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大鼠单根近端肾小管Na+-K+-ATPase活性测定方法的改进
本研究旨在对Doucet等报道的定量检测大鼠单根近端肾小管Na+-K+-ATPase活性方法进行改进,取经过Ⅱ型胶原酶消化的大鼠肾脏皮质组织,在体视显微镜下手工分离单根近端肾小管,并测量其长度,经低渗和冻融处理后与[γ-32P]ATP共同孵育,液闪法检测从[γ-32P]ATP解离出的32Pi,采用修正后的公式计算Na+-K+-ATPase活性.改良法与Doucet等的方法比较,测定单根近端肾小管Na+-K+-ATPase活性无显著性差异(P＞0.05).改进后的方法节省试剂,操作简便、省时.
关键词： 近端肾小管 Na+-K+-ATPase 大鼠 -
脱氧鬼臼毒素对3龄菜青虫头部AChE、ATPase活性的影响
目的:研究脱氧鬼臼毒素(DOP)对3龄菜青虫的毒杀作用及中枢神经系统AChE、ATPase活性的影响,探讨其杀虫机制.方法:采用小叶碟添加法,测定DOP对3龄菜青虫的毒杀活性,建立染毒模型,用试剂盒测定AChE和ATPase活性.结果:①DOP对3龄菜青虫的毒杀活性表现出浓度、时间依赖性,48 h LC50=151.87 mg/L＞72 h LC50=39.99 mg/L＞96 h LC50=10.60mg/L.②DOP对AChE活性没有明显影响.③高浓度(125 mg/L)组对ATPase活性持续抑制,中浓度(5、25 mg/L)组在24 h时激活,48 h时恢复正常,72 h时保持正常(5 mg/L)或抑制作用(25 mg/L).结论:DOP对3龄菜青虫具有毒杀作用;3龄菜青虫中枢神经系统AChE不是DOP靶标.ATPase可能是DOP的重要靶标之一.
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二氮嗪对移植鼠心不同时期心肌组织ATP酶活性的作用
目的 探讨二氮嗪对移植鼠心在术后不同时期心肌细胞膜Na+-K+-ATPase和肌浆网Ca2+-ATPase活性的变化及其对心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 采用改良Heron法大鼠颈部异位心脏移植模型.SD雄性大鼠随机分为实验组、对照组和拮抗组,并在术后不同时间(Smin、1周、3个月)留取标本,检测心肌细胞膜Na+-K+-ATPase和肌浆网ca2+-ATPase活性,及观察心肌超微结构.结果 (1)实验Ⅰ、Ⅱ组心肌细胞膜Na+-K+-ATPase和肌浆网Ca2+-ATPase活性均显著高于相应对照Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05);实验组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组心肌细胞膜Na+-K+-ATPase活性增高呈递减性显著性减弱(P<0.05),实验Ⅰ组肌浆网Ca2+-ATPase活性显著高于实验Ⅱ、Ⅲ组;余差异无显著性.(2)拮抗组取消实验组DE的这一增高作用.(3)中长期各组均有良好的心肌超微结构保护,肌节清,线粒体肿胀不明显,嵴结构尚清楚,排列整齐;仅Ⅲ组偶有空泡变性.结论 二氮嗪对移植鼠心长期冷缺血保存后,有更好的保存和提高细胞膜Na+-K+-ATPase和肌浆网Ca2+-ATPase的活性,减轻心肌缺血再灌注损伤,维持心肌能量代谢有效地进行来发挥心肌保护作用.
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RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究
目的:通过RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法:设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(CRL-1444)内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法(Woundhealing法)检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na+-K+-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响.结果:荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71％(P＜ 0.01)；siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17％(P＜ 0.01)；siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义(P＞ 0.05).CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05).划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.01).Na+-K+-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na+-K+-ATPas活性低于siRNA-con对照组(P＜ 0.05)和空白对照组(P＜0.01).结论:RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平；特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na+-K+-ATPase活性明显降低.
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葡萄糖酸镁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤的影响,探讨葡萄糖酸镁心肌保护作用及其机理.方法:采用改进了的整体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型,检测组织内Na+-K+-ATPase活力及丙二醛(MDA)和Ca2+含量,并测定由ADP诱导的血小板 5 min 大聚集率AGG(M).结果:与假手术组相比,缺血再灌注组心肌组织内Na+-K+-ATPase活力显著下降(P＜0.01),MDA和Ca2+含量明显升高(P＜0.01), AGG(M)升高(P<0.05).与缺血再灌注组比较,葡萄糖酸镁3个不同剂量保护组心肌组织内Na+-K+-ATPase活力明显升高(P＜0.01),MDA和Ca2+含量明显降低(P<0.05 或P<0.01),AGG(M)也明显降低(P＜0.01),且各作用均随用药剂量的增加而更加显著.结论:葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其保护作用机制与增加Na+-K+-ATPase活性、减轻钙超载和抑制脂质过氧化反应以及血小板聚集有关.
关键词： 葡萄糖酸镁 心肌缺血再灌注损伤 血小板聚集 Na+-K+-ATPase MDA -
甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对化学性缺氧小鼠能量代谢影响的比较
目的:比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对急性化学性缺氧小鼠能量代谢的影响.方法:通过注射NaNO2造成小鼠急性化学性缺氧,记录小鼠存活时间,用ATPase、LD检测试剂盒分别检测脑组织中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase 和乳酸(LD)含量,比较两药对能量代谢的影响.结果:两药均可延长化学性缺氧小鼠存活时间,增强Na+-K+-ATPase.Ca2+-ATPase 活力,降低LD含量,其中大剂量甘西鼠尾草注射液较大剂量丹参注射液更能增强Na+-K+-ATPase活力,而小剂量的甘西鼠尾草注射液在增强Ca2+-ATPase活力上较小剂量的丹参注射液作用更强;在降低缺氧小鼠脑组织LD含量方面,两药作用基本相似.结论:丹参注射液和甘西鼠尾草注射液对缺氧小鼠的能量代谢均有改善作用.两药均可延长缺氧小鼠存活时间,降低脑组织LD含量,提高ATPase活力,但甘西鼠尾草注射液在提高ATP酶活力方面优于丹参注射液.
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低钾性周期性麻痹患者红细胞膜Na+-k+-ATPase活性变化及相关激素研究
目的研究原发性低钾性周期性麻痹(HOKPP)的发病机理及影响因素.方法采用磷钼酸比色法测定了30例HOKPP患者发作期和恢复期及30例健康人的Na+-k+-ATPase(以下简称NKA),同时应用放免法测定HOKPP发作期和恢复期胰岛素(INS)、皮质醇(F)、生长激素(GH)、睾酮(T)水平.结果HOKPP患者发作期(20.07±5.74umo1.pi/106RBC/h)显著高于恢复期NKA(14.33±4.13umol.pi/106RBC/h)和健康对照组NKA(14.59±3.91umol.pi/106RBC/h)(P＜0.05);恢复期HOKPP患者与健康对照组NKA无显著差异(P＞0.05).HOKPP患者发作期INS、F、CH显著高于缓解期(P值分别为＜0.05和＜0.001),两期T水平差异无显著性.以血钾、激素和NKA的关系做直线相关分析,发现发作期和恢复期K与NKA呈负相关,(分别为r=-0.823 P＜0.001;r=-0.596 p＜0.01)发作期INS与NKA呈正相关(P＜0.001r=0.855).结论①HOKPP发作期血K+降低是NKA活性增加的结果;②发作期的胰岛素水平升高是低钾的主要原因.
关键词： 周期性麻痹 Na+-K+-ATPase 激素 -
低钾性周期性麻痹患者红细胞膜Na+-K+-ATPase活性变化及相关因素研究
原发性低钾性周期性麻痹(HOKPP)属常染色体显性遗传性疾病,多数散发,基因连锁分析表明HOKPP基因位于染色体lq[31-32],它与二氢吡啶受体基因紧密连锁[1],发作机理不清,研究认为钾代射障碍是导致低钾麻痹的主导因素[2],为此,我们测定了42例HOKPP患者发作期和恢复期红细胞膜Na+-K+-ATPase活性相关激素水平,旨在探讨HOKPP血钾、Na+-K+-ATPase活性变化及相关激素的关系.
关键词： 低钾性 周期性麻痹 Na+-K+-ATPase 激素 -
加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠神经元保护作用的实验研究
目的:观察加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠神经元的保护作用及其可能作用机制.方法:采用栓线法制作大鼠局灶性脑缺血损伤模型(MCAO).120只Wistar大鼠随机分成6组:空白组,假损伤组,模型组,中药高剂量组,中药低剂量组,阿司匹林对照组,每组20只.连续灌胃7 d后,进行手术操作.测定大鼠大脑皮层组织Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-ATP酶活性、SOD活性和MDA含量.结果:加减地黄饮子低剂量、高剂量组均能提高脑缺血大鼠大脑皮层组织的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及SOD活性,降低MDA含量.结论:加减地黄饮子可对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元起保护作用,其脑保护作用机制可能与其调节Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性、SOD活性和降低MDA含量有关.
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严重腹腔感染时胃粘膜Na+-K+-ATPase活性与电位差的相关性研究
目的:探讨严重腹腔感染状态下大鼠胃粘膜Na+-K+-ATPase活性变化对胃粘膜电位差(GTPD)的影响.方法:利用大鼠盲肠结扎穿孔造成腹腔严重感染动物模型,应用电生理记录仪检测穿孔前和穿孔后3h、6h、12h、24h、48hGTPD变化;应用生化法测定了各时相大鼠胃粘膜Na+-K+-ATPase活性.结果:盲肠穿孔后3hNa+-K+-ATPase活性显著降低(P＜0.05),12h降至低(P＜0.01),仅为对照组的48.5%,48h仍未恢复正常.GTPD伤后6h显著下降(P＜0.05),12h降至低(P＜0.01),24h和48h仍显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.05).结论:严重腹腔感染状态下胃粘膜Na+-K+-ATPase活性降低可能是引起胃粘膜屏障功能受损的主要原因.
关键词： 腹腔感染 Na+-K+-ATPase 胃粘膜电位差 -
中药二至丸对老年痴呆模型小鼠脑组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及学习记忆的影响
目的:观察中药二至丸对老年痴呆(alzheimer disease AD)模型小鼠脑组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及学习记忆的影响.方法:颈背部皮下注射D-半乳糖建立亚急性老年痴呆模型,测定脑组织中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性、采用跳台法测定小鼠的学习记忆能力.结果:中药二至丸能明显提高Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性、缩短小鼠学习潜伏期,延长记忆潜伏期、减少错误次数.结论:中药二至丸能改善老年痴呆模型小鼠的学习记忆能力,提高ATP酶的活性,维持脑组织的正常功能.
关键词： 中药二至丸 AD Na+-K+-ATPase Ca2+-ATPase -
环维黄杨星D长期给药对大鼠肝组织Na+-K+-ATPase mRNA表达的影响
目的 探讨环维黄杨星D对大鼠肝组织Na+-K+-ATP酶mRNA表达影响.方法 将SD大鼠随机分为对照组、环维黄杨星D(3、6、12mg/kg),灌胃8周,采用RT PCR检测Na+-K+-ATPase mRNA表达水平.结果 环维黄杨星D高剂量组显著降低肝组织中Na+-K+-ATPase mRNA表达.结论 黄杨宁长期给药对肝脏毒性可能与抑制Na+-K+-ATPase活性有关.
关键词： 环维黄杨星D Na+-K+-ATPase RT-PCR -
丹参注射液对腹腔感染状态下胃粘膜Na+-K+-ATPase活性和电位差的影响
目的:探讨丹参注射液对严重腹腔感染状态下大鼠胃粘膜Na+-K+-ATPase活性变化和电位差的影响.方法:利用大鼠盲肠结扎穿孔造成腹腔严重感染动物模型,应用生化法检测穿孔前和穿孔后3h、6h、12h、24h、48h各时相大鼠胃粘膜Na+-K+-ATPase活性.应用电生理记录仪检测穿孔前和穿孔后3h、6h、12h、24h、48h GTPD变化.结果:盲肠穿孔后3hNa+-K+-ATPase活性显著降低(P＜0.05),12h降至低(P＜0.01),仅为对照组的48.5%,48h仍末恢复正常;丹参组12h、24h Na+-K+-ATP酶活性比感染组显著升高(P＜0.05).GTPD穿孔后3h即有下降,6h下降显著(P＜0.05),12h下降至低(P＜0.01),24h和48h仍然显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.05);丹参组12h、24h比感染组明显升高(P＜0.05).结论:严重腹腔感染状态下胃粘膜Na+-K+-ATPase活性降低可能是引起胃粘膜屏障功能受损的原因之一.早期应用丹参对有效地预防应激性溃疡的发生有重要的临床意义.
关键词： 腹腔感染 Na+-K+-ATPase 电位差 丹参 -
复方桂枝茯苓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠NOS、Na+-K+-ATPase的影响
目的:观察复方桂枝茯苓丸对脑缺血再灌注损伤(CRI)大鼠一氧化氮合酶(NOS)、Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase)的影响.方法:用结扎双侧颈总动脉45min后再通法,制备CRI大鼠模型,用复方桂枝茯苓丸、血塞通治疗,给药2周,检测血清与脑匀浆NOS活性、脑匀浆Na+-K+-ATPase活性变化.结果:复方桂枝茯苓丸能降低CRI大鼠血清与脑匀浆NOS活性,升高大鼠脑匀浆Na+-K+-ATPase活性.结论:复方桂枝茯苓丸对CRI大鼠具有治疗作用.
关键词： 复方桂枝茯苓丸 CRI NOS Na+-K+-ATPase -
淫羊藿苷减轻铝诱导的大鼠学习记忆减退并增强皮质及海马Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性
目的:观察淫羊藿苷对铝诱导的痴呆大鼠模型学习记忆的影响,并分析其作用机制.方法: 以三氯化铝溶液诱导痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠的空间辨别学习记忆能力及化学法检测大脑皮层及海马Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性.结果: 淫羊藿苷可缩短痴呆大鼠在定向航行实验中逃避潜伏期及搜索距离,并增强鼠脑皮层及海马Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性.结论: 淫羊藿苷对铝盐诱导的痴呆大鼠学习记忆障碍模型有保护作用,其机制至少与增加大鼠脑内Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性有关.
关键词： 淫羊藿苷 铝 学习记忆 Na+-K+-ATPase Ca2+-ATPase -
健脑复方对大鼠缺血性脑损伤的保护作用
大鼠ig健脑复方7d后,采用双侧颈总动脉结扎法致全脑不完全性缺血损伤30min,结果显示大鼠脑组织中Na+-K+-ATPase活性显著升高,NO含量显著下降,海马锥体细胞缺血性损伤状态改善,表明健脑复方对脑缺血损伤有保护作用.
关键词： 健脑复方 脑损伤 海马锥体细胞 NO Na+-K+-ATPase -
参附注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑能量代谢的影响
目的 探讨参附注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑能量代谢的影响及其可能的机制.方法 ♂ SD大鼠30只,随机均分为空白对照组(C组)、脑缺血再灌注组(IR组)、参附注射液预处理组(SFI组).HPLC测定大鼠脑组织中的高能磷酸化合物三磷酸腺苷(ATP)的含量;应用乳酸及Na+-K+-ATPase检测试剂盒观察大鼠脑组织中乳酸及Na+-K+-ATPase的变化.结果 C组、IR组大鼠脑组织中乳酸含量为0.20±0.04、0.70±0.05 mmol·g-1;C组ATP的含量为416.81±20.52 ng·mL-1,Na+-K+-ATPase为5.98±0.53μmol· mg·h-1,而IR组大鼠脑组织中ATP的含量及Na+-K+-ATPase的活性均明显低于C组(P＜0.01),表明脑缺血再灌注损伤大鼠模型的建立成功;而给予SFI预处理后,SFI组大鼠脑组织中乳酸含量降低到0.42±0.04 mmol·g-1,明显低于IR组(P＜0.01),而ATP的含量及Na+-K+-ATPase活性则均较IR组明显升高(P＜0.01).结论 参附注射液预处理可以通过提高缺血再灌注大鼠脑组织中的ATP含量、增强Na+-K+-ATPase的活性,降低脑组织中乳酸的含量,以改善大鼠的脑缺血再灌注损伤.
关键词： 脑缺血再灌注 参附注射液 乳酸 Na+-K+-ATPase 三磷酸腺苷 -
针刺益气养阴活血法治疗糖尿病周围神经病变机制的实验研究
目的:探讨针刺对糖尿病大鼠周围神经病变的治疗作用和机制.方法:对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠取穴脾俞、肾俞、三阴交、足三里,隔日针刺1次,每次30min,针刺治疗8周后测定大鼠感觉神经传导速度(SNCV)、热痛域,坐骨神经能够内山梨醇、一氧化氮(NO)和Na+-K+-ATPase活性.结果:糖尿病大鼠SNCV明显减慢,热痛域值明显升高;坐骨神经内山梨醇升高、NO降低,Na+-K+-ATPase活性降低,与正常组比较差异显著(P＜0.05或0.01).针刺治疗可使上述改变减轻,与糖尿病模型组比较差异显著(P＜0.05或0.01).结论:针刺治疗通过降低实验性糖尿病大鼠坐骨神经内山梨醇含量,防止NO降低和Na+-K+-ATPase活性下降,可有效恢复其神经传导速度、热痛域等神经障碍,为治疗DPN的有效方法.
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阳离子聚合物介导的体外培养兔角膜内皮细胞基因转移
目的 观察非病毒载体阳离子聚合物(SofastTM)介导的编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pEGFP-N1和pIRE-EGFP两种质粒对体外培养的兔角膜内皮细胞(RCEC)的转染效率和转染前后细胞Na+-K+-ATPase活性变化,探索优的体外RCEC非病毒载体基因转移条件.方法 消化法原代培养RCEC,SofastTM与pEGFP-N1和pIRE-EGFP两种质粒按不同比例混合,介导此两种质粒转染RCEC,分别比较各质粒不同时间的转染效率,并检测转染与未转染细胞Na+-K+-ATPase的活性以确定基因转移对RCEC活性的影响.结果 SofastTM与质粒(pEGFP-N1和pIRE-EGFP)按不同比例转染RCEC后,24-48 h均有EGFP的表达.SofastTM∶pEGFP-N1=3.2∶1组在转染后 48 h时转染效率高(P＜0.05),为3.6%.SofastTM∶pIRE-EGFP=3.2∶1组在转染后 24 h时转染效率高(P＜0.05),为3.5%.转染与未转染组细胞数和细胞Na+-K+-ATPase活性均无明显差异.结论 SofastTM可有效介导以pEGFP-N1和pIRE-EGFP为载体的外源基因向体外培养的RCEC转移,且基因转移后RCEC活性不受影响.
关键词： 角膜内皮细胞 阳离子聚合物 基因转移 Na+-K+-ATPase -
丹参对大鼠腹腔感染状态下胃黏膜Na+-K+-ATPase和pH值的影响
目的探讨丹参注射液对严重腹腔感染状态下大鼠胃黏膜Na+-K+-ATPase活性变化和胃黏膜内pH的影响.方法利用大鼠盲肠结扎穿孔造成腹腔严重感染动物模型,检测穿孔前和穿孔后3、6、12、24、48 h各时相大鼠胃黏膜Na+-K+-ATPase活性和胃黏膜内pH的变化.结果盲肠穿孔后感染组3 h Na+-K+-ATPase活性显著降低(P<0.05),12 h降至低(P<0.01),仅为对照组的48.5%,48 h仍未恢复正常;丹参组12 h、24 h Na+-K+-ATP酶活性比感染组显著升高(P<0.05).感染组胃黏膜内pH值穿孔后3 h即有下降,6 h明显低于对照组(P<0.05),12 h下降至低(P<0.01).48 h仍低于对照组(P<0.05).丹参组从12 h开始胃黏膜内pH值与感染组显示出差别(P<0.05).结论严重腹腔感染状态下胃黏膜Na+-K+-ATPase活性和pHi降低可能是引起胃黏膜屏障功能受损的主要原因.早期应用丹参对有效地预防应激性溃疡的发生有重要的临床意义.
关键词： 腹腔感染 Na+-K+-ATPase pH 丹参
