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邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响
目的 通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基已酯( di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase -3和Caspase -9基因表达以及细胞凋亡的影响.方法 分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h.荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase -3和Caspase -9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase -3和Caspase -9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率.结果 与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase -3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P＜0.05),Caspase -9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P＜0.05),同时细胞凋亡率增加(P＜0.05),呈浓度依赖关系.结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能.
关键词： 邻苯二甲酸二乙基己酯 卵巢颗粒细胞 Caspase通路 凋亡 -
芍药苷对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用
目的 研究芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导人神经瘤母细胞(SH-SY5Y)凋亡的保护作用及其机制.方法 制备H2O2诱导的氧化应激损伤模型.相差显微镜观察SH-SY5Y细胞形态的变化；CCK-8法测定细胞存活率；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；碘化丙啶染色、流式细胞仪检测细胞周期;2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS); INT显色反应法测定乳酸脱氢酶(LDH)的量；ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的量；caspase-3催化特异性底物反应检测caspase-3活性.结果 与对照组相比,200μmol/L H2O2作用SH-SY5Y细胞24 h,使细胞存活力显著下降(P＜0.01),细胞凋亡率上升(P＜0.01),增殖指数(PI)降低(P＜0.05),8-OHdG的量上升(P＜0.01),LDH释放量和细胞内ROS量增加(P＜0.01),caspase-3活性增强(P＜0.01).与H2O2损伤组相比,芍药苷终浓度为20～40 μmol/L,可浓度相关地减轻H2O2诱导的SH-SY5Y细胞上述指标的变化(P＜0.05)；芍药苷10μmol/L组细胞PI、LDH和8-OHdG量未有明显改观,但能显著减轻H2O2诱导的SH-SY5Y细胞毒性、ROS和caspase-3活性(P＜0.05).结论 芍药苷对H2O2 诱导SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用,该作用可能与其清除ROS、减轻DNA氧化损伤、抑制细胞凋亡的caspase通路激活和调节细胞周期有关.
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PJA1诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的初步研究
目的:探讨PJA1在宫颈癌Hela细胞中的促凋亡作用.方法:采用流式细胞仪检测转染PJA1后的宫颈癌细胞12,24,36,48 h的凋亡变化.采用Western免疫印迹(Western Blot)检测凋亡通路.结果:宫颈癌Hela细胞在转染PJA1后12 h凋亡率低,48 h高,并且在凋亡中与caspase通路相关.结论:PJA1可以通过caspase通路促进宫颈癌Hela细胞凋亡.
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DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡Caspase通路的影响
目的:通过对原代培养的大鼠睾丸间质细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9表达以及细胞凋亡的影响.方法:体外分离和原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100 nmol/L)染毒24h.荧光定量PCR法检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,Western印迹检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,流式细胞术检测间质细胞凋亡率. 结果:与对照组相比,DEHP各组睾丸间质细胞Caspase-3 mRNA(1.69±0.38 vs3.82±0.39、6.91±0.40、15.47±0.40)和蛋白(0.18±0.09 vs0.32±0.10、0.61±0.08、0.89±0.09)表达显著增加(P均＜0.05),Caspase-9 mRNA(2.24±0.41 vs 5.16±0.43、9.61±0.45、19.22±0.43)和蛋白(0.26±0.07 vs0.40±0.08、0.68±0.09、0.96±0.08)表达也显著增加(P均＜0.05),细胞凋亡率(4.36±1.11 vs 7.52±1.09、12.72±1.10、24.59±1.11)也显著增加(P均＜0.05),呈浓度依赖关系.结论:DEHP可通过激活细胞凋亡Caspase通路而诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡,进而影响间质细胞功能.
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麦冬皂苷D对大鼠心肌细胞凋亡及caspase通路的影响
目的:观察麦冬皂苷D对糖尿病(DM)大鼠心功能、心肌细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法:将90只大鼠随机分为空白对照组、DM模型组、麦冬皂苷D低(10 mg·kg-1)、中(20 mg·kg-1)、高(40 mg·kg-1)剂量组、阳性对照(二甲双胍,160 mg·kg-1)组,每组15只.除空白对照组外,其余各组均采用腹腔注射链脲佐菌素复制DM模型.造模成功后,分别灌胃给药,空白对照组和DM模型组给予等量生理盐水,qd,持续4周.给药结束后,采用多普勒彩色超声评估各组大鼠心脏功能;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织形态结构;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹分析caspase 3通路及其上游相关蛋白表达情况.结果:与空白对照组比较,DM模型大鼠心功能下降、心肌组织现病理损伤、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);Bax和cleaved-caspase 3蛋白在心肌组织表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt和p-GSK-3β蛋白在心肌组织表达下调(P<0.05).与DM模型大鼠比较,麦冬皂苷D各剂量组大鼠心功能增强、心肌组织病理损伤程度减轻、细胞凋亡率降低(P<0.05);Bax和cleaved-caspase 3蛋白在心肌组织表达下调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt和p-GSK-3β蛋白在心肌组织表达上调(P<0.05).麦冬皂苷D低、中剂量组的各指标水平与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:麦冬皂苷D可能通过调节Akt/GSK-3β抑制caspase 3通路,减轻糖尿病大鼠心肌损伤.
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羽扇豆醇对人高转移肝癌HCCLM3增殖影响的机制研究
目的：：研究羽扇豆醇( Lupeol)在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中的抗增殖作用机制。方法：运用CCK-8法检测不同浓度Lupeol在12-48 h对HCCLM3细胞活力的影响及相关Caspase参与Lupeol(20~100μmol·L-1)诱导的细胞凋亡类型；运用Realtime PCR评价Lupeol对细胞内Caspase家族及Bcl-2相关基因的mRNA表达的影响；同时运用流式细胞术检测Lupe-ol对细胞周期分布的影响。结果：Lupeol在24~48 h能够抑制HCCLM3的细胞增殖，并呈现浓度依赖性，在24 h处理细胞的IC50为93μmol·L-1；运用60~100μmol·L-1的Lupeol能够使HCCLM3细胞在G2/M期细胞数增加1倍；Lupeol能够活化Caspase通路，与对照组相比Lupeol处理后细胞内Caspase-3的mRNA表达量增加50%~150%，同时100μmol·L-1的Lupeol处理细胞后使胞内p53及Bax的mRNA表达量分别上调1倍以上，并显著降低Bcl-2及PARP的mRNA水平( P<0.05或P<0.01)。结论：Lupeol具有抑制肝癌细胞增殖能力，对肝癌预防及治疗可能具有一定的协同作用。
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小檗碱通过ROS及caspase通路对肝癌HepG2细胞凋亡的作用
目的 探究小檗碱(BBR)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L) BBR对肝癌HepG2细胞的抑制作用;采用Hoechst 33342染色观察处理后HepG2细胞形态学变化;用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率;间接荧光标记法检测BBR对细胞内活性氧簇(ROS)水平的影响;JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位的变化;应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达变化.结果 MTT法显示BBR可呈剂量、时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞活力(P＜0.05);Hoechst 33342染色发现细胞形态发生明显变化,0μmol/L BBR处理的细胞呈淡蓝色,处理组细胞核固缩,形成凋亡小体,细胞凋亡率与药物浓度呈正相关(P＜0.05).流式细胞术发现BBR能使细胞内ROS升高,线粒体膜电位水平下降.Western blot法显示随着药物浓度升高,Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达增强,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡相关蛋白caspase-3表达下降.结论 BBR在体外可能通过增加ROS、提高促凋亡蛋白Bax并激活caspase-3表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡.
