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生活饮用水中二氯乙酸和三氯乙酸的离子色谱电导测定法
目的:建立生活饮用水中二氯乙酸(DCAA)和三氯乙酸(TCAA)的离子色谱检测法.方法:利用Dionex 2100型离子色谱仪,选用IonPac AS19阴离子色谱分析柱,进样体积500 μl,10 mmol/L～45 mmol/L氢氧化钾溶液梯度淋洗,流速1.0 ml/min,电导检测器,0.22 μm滤膜过滤后直接进样.结果:本法相关性r>0.999,DCAA和TCAA低检出限分别为0.003 mg/L和0.005 mg/L,RSD%<4.56%,回收率范围85%～104%.结论:本法具有简便快速,灵敏准确及安全实用的特点,适合生活饮用水大批样品的检测.
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离子色谱梯度法检测自来水中的二氯乙酸、三氯乙酸及6种阴离子
目的:建立一种多思梯度淋洗技术测试消毒副产物卤代乙酸的方法.方法:采用Metrohm 850型离子色谱仪,METROSEP A Supp 7250分离柱;淋洗液A:18 mM Na2CO3的超纯水溶液;淋洗液B:超纯水;进样体积100μl,流速0.7 ml/min,测定废水样品中常规阴离子及二氯乙酸(DCAA)、三氯乙酸(TCAA).结果:该方法相关性好(r>0.9999),线性范围宽,精密度高(RSD<1.5%),方法测量结果好,准确度高,分析时间短,一次进样可以分析多个阴离子及卤代乙酸,重现性好.结论:该方法是一种检测水中消毒副产物的理想方法.
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固相萃取离子色谱法测定反义寡核苷酸药物杂质
目的 建立同时测定寡核苷酸原料药中杂质醋酸(MCAA)、二氯乙酸(DCAA)、氯离子(Cl-)含量的固相萃取离子色谱(IC)法.方法 Ionpac AS 23(4 mm×250 mm)分析柱;Ionpac AG 23(4 mm×50 mm)保护柱;流动相:0.8 mmol·L-1 碳酸氢钠/4.5 mmol·L-1碳酸钠;抑制型电导检测器.结果 MCAA、DCAA和Cl-的标准曲线方程分别为:Y＝ 5.230 7X + 0.014 (r＝0.999 7),Y＝ 19.762X-0.007 2 (r＝0.999 9)和Y＝507.4X-0.746 2 (r＝0.999 8);MCAA在0.002~0.400 μg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,DCAA在0.000 624~0.156 μg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,Cl-在2.4×10-3~1.5 mg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,其检测限分别为0.02,0.312 ng·mL-1和0.01 μg·mL-1.结论 该方法操作简便、快速,结果准确,可用于反义寡核苷酸原料药中杂质的控制.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定生活饮用水中二氯乙酸和三氯乙酸
目的 建立生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸的超高效液相色谱-串联质谱同时测定方法.方法 样品经0.2μmn滤膜过滤,在HSST3色谱柱上进行分离,采用乙腈-0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱,电喷雾负离子模式下以多反应监测(MRM)方式检测.结果 二氯乙酸、三氯乙酸线性范围在5.0～100.0ug/L,两者相关系数均大于0.999,检出限和定量限分别为0.5 μg/L和1.5 μg/L.在10.0、20.0、50.0 μg/L三浓度水平下,空白水样的平均加标回收率在88.9％～113.7％,相对标准偏差均小于6.0％.结论 该方法前处理简单、分析速度快、灵敏度高、准确性好,适用于生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸的测定.
关键词： 二氯乙酸 三氯乙酸 生活饮用水 超高效液相色谱-串联质谱 -
二氯乙酸对NB4细胞株凋亡的诱导作用及机制
目的 研究二氯乙酸对人急性髓系白血病NB4细胞的诱导凋亡作用并探讨其可能的作用机制.方法 用CCK-8法检测2~8 mmol/L二氯乙酸作用于NB4细胞48 h后增殖抑制作用;2~8 mmol/L二氯乙酸作用于NB4细胞24 h后,用流式细胞术分析细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白细胞色素C、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达水平.结果 二氯乙酸对NB4细胞具有浓度和时间依赖性抑制增殖作用.二氯乙酸作用24 h后,线粒体释放到细胞浆的细胞色素C增加.结论 二氯乙酸能诱导NB4细胞凋亡,作用机制与释放线粒体细胞色素C激活caspase-3介导的细胞凋亡途径相关.
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二氯乙酸对膀胱癌细胞株T24克隆形成、侵袭和迁移的影响
目的 探讨二氯乙酸(DCA)对膀胱癌T24细胞株的克隆形成、侵袭和迁移的影响并探讨其相关机制.方法将膀胱癌T24细胞随机分成两组,实验组分别以5、10、20 mmol/L DCA处理,对照组以等量0.1％二甲基亚砜处理;用Giemsa染色检测T24细胞克隆形成,细胞划痕以及Transwell实验检测T24细胞的迁移侵袭能力;应用Real time PCR及Western blot检测T24细胞内上皮间质转化(EMT)相关标记物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、Snail及Slug蛋白表达.结果 细胞克隆实验显示,与对照组比较,实验组随DCA浓度增加,显著减少T24细胞的克隆形成(P＜0.01);细胞划痕实验结果显示实验组随DCA浓度增加及处理时间延长,T24细胞的迁移能力下降(P＜ 0.01);Transwell实验结果示与对照组比较,实验组随DCA浓度增加T24细胞的迁移力降低(P＜0.01);经过DCA作用48 h后,Real time PCR结果显示:T24细胞中E-cadherin的mRNA明显高于对照组(P＜0.05),而Snail、Slug、vimentin和N-cadherin的mRNA表达水平明显低于对照组(P＜0.05).Western blot结果显示:T24细胞中Ecadherin的蛋白水平明显高于对照组(P＜0.05),而Snail、Slug、vimentin和N-cadherin的蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 DCA可抑制膀胱癌T24细胞的克隆形成、侵袭和迁移,其机制可能通过下调核转录因子Snail和Slug的表达,抑制T24细胞发生上皮间质转化.
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二氯乙酸对急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的影响及其机制的研究
目的 探讨二氯乙酸对急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响及其相关机制.方法 急性髓系白血病细胞株U937细胞为研究对象,采用不同浓度的二氯乙酸对其进行处理后,测定不同作用时间下的相关指标,包括用CCK-8法测定细胞增殖活性变化；流式细胞术检测活性氧簇(ROS)的变化及细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡通路相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP的表达.结果 二氯乙酸呈时间-剂量依赖性抑制U937细胞生长.二氯乙酸处理24 h后,U937细胞ROS生成明显增多,伴细胞凋亡增加明显(P均＜0.05).结论 二氯乙酸可以抑制U937细胞增殖并诱导其凋亡.细胞的凋亡机制可能与细胞代谢途径改变导致的ROS增加有关.
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二氯乙酸对肥大心肌细胞缺氧复氧的抗凋亡作用
目的研究缺氧复氧损伤诱导体外培养新生大鼠的肥大心肌细胞凋亡及干预糖代谢对此过程的作用.方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导其肥大,分4组:一组于3%O2、5%CO2、92%N2的培养箱中培养12、24、36 h,再恢复正常条件培养4 h,造成缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(dichloroacetate, DCA)分别使其终浓度为10-3、10-4、 10-5 mmol/L,再缺氧复氧相同时间;电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化;Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率.结果肥大心肌细胞在缺氧12、24和36 h后复氧4 h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率分别为:(19.99±4.88)%,(22.66±5.08)%和(24.47±5.74)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-3mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%, (9.7±3.52)%和(22.5±3.41)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-4mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(17.4±3.72)%, (20.6±3.94)%和(23.5±3.76)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-5mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(18.4±3.44)%, (21.3±3.77)%和(23.8±3.73)%.结论缺氧引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高;缺氧复氧较单纯缺氧肥大心肌细胞凋亡率增加; DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用.
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液液萃取-超声辅助衍生化气相色谱法同时测定水中二氯乙酸、三氯乙酸和2.4-滴
目的 建立生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸和2.4-滴的液液萃取-衍生气相色谱法.方法 水中被测物用甲基叔丁醚萃取,然后在50℃恒温超声下,硫酸-甲醇衍生,衍生产物采用DB-5毛细管柱(30m×320 μm,0.25 μm)程序升温分离、电子捕获检测器检测,内标法定量.结果 方法的线性范围为0.003 mg/L～ 0.400 mg/L,检出限为0.0004mg/L ～ 0.0030 mg/L,回收率为83.4％～ 109.7％,相对标准偏差为7.63％～9.31％.结论 本法快速,重现性好,灵敏度高,可用于饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸和2.4-滴的同时测定.
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淋洗液在线发生离子色谱法同时测定饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦
目的 建立饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦的淋洗液在线发生离子色谱测定方法.方法 水样经IonPAC AS19型分析柱(250 mmx4 mm)分离,以KOH为淋洗液,流速为1.00 ml/min,梯度洗脱后抑制型电导检测器检测.结果 二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦的线性范围分别为20.0 ～ 800μg/L、20.0 ～ 800μg/L和20.0 ～1 000μg/L,相关系数均大于0.999,方法检出限分别为3.2μg/L、3.0 μg/L和3.0 μ.g/L,加标回收率为94.0％ ～ 110.0％,相对标准偏差为2.49％ ～6.98％(n=6).结论 本方法操作简便快捷,灵敏度高,结果准确可靠,适用于饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦的同时测定.
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固相萃取-气相色谱法测定自来水中氯乙酸
目的:为自来水中氯乙酸的监测提供灵敏而可靠的实验方法.方法:样品经D101大孔树脂富集和乙腈洗脱,用10%硫酸-甲醇将目标化合物衍生成相应的甲酯,甲基叔丁醚萃取,GC-ECD测定.结果:本法对自来水的加标回收率在87.9%～101.3%之间,5份平行样品测定的相对标准偏差(RSD)二氯乙酸为3.78%,三氯乙酸为5.27%,检出限依次为0.14ng和0.03ng.结论:所建立的方法快速、简便、准确,能满足自来水中目标化合物定量测定的要求.
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二氯乙酸对小鼠肝细胞DNA损伤效应研究
目的:研究二氯乙酸的DNA损伤作用.方法:小鼠肝细胞的体外、体内试验.体外试验,取小鼠肝细胞染毒,染毒1 h后彗星试验;体内试验,小鼠连续灌胃6 d,每天一次,在第1、3、6 d时各染毒3 h后取其肝细胞进行彗星试验.荧光显微镜下观察、计数拖尾细胞的尾长.结果:无论是体外试验,还是体内试验,二氯乙酸均可导致肝细胞DNA损伤;体内试验结果显示,随染毒次数的增加,DNA损伤加重.结论:二氯乙酸是肝细胞的DNA损伤剂,致癌作用可能与其DNA损伤作用有关,属于遗传致癌物.
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英蓝超滤直接进样离子色谱法测定生活饮用水中的二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦
目的 建立生活饮用水中的二氯乙酸、三氯乙酸、草甘膦的英蓝超滤直接进样离子色谱检测方法.方法 生活饮用水经英蓝超滤装置在线过滤后,引入100μl至离子色谱仪分析,色谱柱:Metrosep A 7-250,淋洗液:7.2 mmol/L碳酸钠溶液,流速:0.8 ml/min.结果 二氯乙酸在0.05 mg/L～1 mg/L,三氯乙酸在0.05 mg/L～1 mg/L,草甘膦在0.5mg/L～2 mg/L线性关系良好,线性相关系数r=0.991～0.999,加标回收率在73％～121％,相对标准偏差(RSD％)在2.6％～13.5％.方法检出限:二氯乙酸0.01 mg/L,三氯乙酸0.03 mg/L,草甘膦0.03 mg/L.结论 本方法操作简单、不污染环境、对操作人员无危害、适合批量检测生活饮用水中的二氯乙酸、三氯乙酸和草甘膦.
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二氯乙酸通过抑制HIF-1α、激活p53凋亡通路增强替莫唑胺的化疗作用
目的 探讨二氯乙酸(DCA)增强替莫唑胺(TMZ)对人脑胶质瘤细胞的抑制作用及机制.方法 通过体外实验,观察DCA单药、TMZ单药以及DCA/TMZ联合对人脑胶质瘤细胞的抑制作用;MTT比色法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)的变化;激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位(MMP);蛋白质印迹法检测细胞低氧诱导因子(HIF-1α)和p53凋亡通路相关蛋白的表达.结果 DCA/TMZ联合更有效抑制胶质瘤细胞增殖、使MMP降低、细胞内ROS增加、细胞凋亡增加;HIF-1α表达下降、p53表达升高.结论 DCA能增强TMZ对人脑胶质瘤细胞的抑制作用,其机制与抑制HIF-1α、激活p53凋亡信号通路有关.
