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大豆异黄酮对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂代谢的影响
目的 研究大豆异黄酮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏脂质、血脂、抗氧化指标及肝脏脂肪代谢相关因子的影响.方法 将36只雄性SD大鼠用随机数字表法按体重分层随机分为正常对照组、NAFLD模型对照组、大豆异黄酮低剂量组(10 mg/kg)及高剂量组(20 mg/kg),每组9只.正常对照组采用D12450B饲料(10%脂肪热能),模型对照组和大豆异黄酮干预组采用D12492饲料(60%脂肪热能),喂养12周后,检测各组大鼠肝脏脂质、血脂和抗氧化指标的变化,Western blotting检测大鼠肝组织中固醇调节原件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的蛋白表达.结果 正常对照组、NAFLD模型对照组、大豆异黄酮低剂量组、高剂量组肝脏甘油三酯(TG)分别为(8.11±4.13)、(57.06±16.95)、(31.26±10.48)、(31.38±13.25)mmol/mg蛋白(F=22.569,P＜0.01);肝脏游离脂肪酸(FFA)分别为(0.030±0.007)、(0.042±0.009)、(0.038±0.009)、(0.032±0.005)μmol/mg蛋白(F=4.857,P＜0.01);肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性分别为(502.29±23.71)、(201.83±16.99)、(228.93±21.71)、(238.08±15.96)U/mg蛋白(F=9.555,P＜0.01);肝脏丙二醛(MDA)含量分别为(1.29±0.29)、(2.85±0.73)、(2.07±0.49)、(2.03±0.37)nmol/mg蛋白(F=13.449,P＜0.01);肝脏SREBP-1c蛋白表达分别为0.45±0.16、1.42±0.30、1.02±0.31、0.47±0.27(F=24.515,P＜0.01);FAS蛋白表达分别为0.27±0.08、1.97±0.47、1.35±0.30、0.49±0.12(F=60.361,P＜0.01);PPARα蛋白表达分别为2.03±0.56、0.41±0.17、0.81±0.27、0.66±0.16(F=37.97,P＜0.01).结论大豆异黄酮可能通过抑制SREBP-1 c、激活PPARα的表达来减少肝脏脂质沉积,增加抗氧化能力.
关键词： 异黄酮类 黄豆 脂肪肝 胆固醇调节元件结合蛋白质1 PPARα -
AHSG对胰岛素刺激下的HL-7702细胞中FAS、SREBP-1基因表达的影响
目的 研究纯化后的人胎球蛋白A(AHSG)对HL-7702细胞胰岛素信号通路下游基因FAS、SREBP.1表达的影响.方法 通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和鱼精蛋白(protamine)亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白;单用胰岛素或胰岛素与AHSG共同处理HL-7702细胞后,提取细胞的RNA并且逆转录成cDNA,通过实时PCR(real-time PCR)方法分析细胞中FAS、SREBP-1基因mRNA的含量.结果 100 nmoL/L胰岛素在1、2、3、4、5、6 h都可刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-1的基因表达量增加;在胰岛素刺激HL-7702细胞5h时,FAS、SREBP-1基因表达量随胰岛素浓度的增加而升高;当HL-7702细胞用20nmol/L胰岛素与100、300和600μg/ml的AHSG蛋白分别共同处理时,AHSG能抑制FAS、SREBP-1基因的表达,并且在600μg/ml时抑制作用较强.结论 胰岛素能刺激HL-7702细胞中FAS、SREBP-l基因表达量的增加,但AHSG蛋白抑制由胰岛素刺激引起的FAS、SREBP-1基因表达量的增加.
关键词： AHSG Fas 胆固醇调节元件结合蛋白质1 基因表达 -
蓝莓联合益生菌对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠PNPLA3和SREBP-1c表达的影响
目的 观察含patatin样磷脂酶域3(PNPLA3)和胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)1c在蓝莓联合益生菌对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠干预实验中的表达,并探讨其在NAFLD中的作用机制.方法 清洁级SD大鼠36只分为正常组(NG)、模型组(MG)、自然恢复组(SRG)、蓝莓组(BG)、益生菌组(PG)和蓝莓联合益生菌组(BPG).实验结束后,制作组织切片,观察血清学、组织学形态变化,检测PNPLA3和SREBP-1c基因及蛋白表达情况.多组间比较用单因素方差分析,方差齐时用SNK-q检验,方差不齐时用Tamhane's-T2检验.结果 6组间在肝脏指数、ALT、TC、TG、LDL和HDL上差异均有统计学意义(F值分别为384.908、188.554、75.523、94.667、95.235、132.586,P值均＜0.01).6组间NAFLD活动度积分差异有统计学意义(F =71.896,P＜0.01),其中BPG组较MG、SRG、BG、PG组下降为显著(P值均＜0.01).6组肝组织表达PNPLA3和SREBP-1c阳性率差异均有统计学意义(F值分别为175.527、110.504,P值均＜0.01),其中BPG组较MG、SRG、BG、PG组下降为显著(P值均＜0.01).PNPLA3和SREBP-1c的mRNA和蛋白表达各组间差异有统计学意义(F值分别为375.822、410.379、288.940、116.054,P值均＜0.01).其中BPG组的PNPLA3和SREBP-1C的mRNA和蛋白表达较MG、SRG、BG、PG组明显下降(P值均＜0.01).结论 蓝莓联合益生菌能有效改善NAFLD的病理组织结构,减轻肝细胞脂肪变性,其机制可能是蓝莓与益生菌联合可减轻炎症因子诱发的炎症效应,下调SREBP-1c的表达,从而减弱PNPLA3基因转录,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,是NAFLD的一个辅助治疗方案.
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双氢睾酮对HaCaT细胞SREBP-1c表达的影响
目的 探讨双氢睾酮( DHT)在HaCaT细胞固醇调控元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)表达中的作用.方法 体外培养HaCaT细胞,分为4组,对照组不加任何刺激因素,DHT组分别加入3种不同浓度的DHT,LY294002+ DHT组在加入50 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)预处理40 min后加入100 nmol/LDHT,PD98059+DHT组即在加入50 μmol/L MEK抑制剂(PD98059)预处理40 min后加入100 nmol/LDHT.用实时定量PCR和Western印迹法检测DHT对HaCaT细胞SREBP 1 cmRNA和蛋白表达的影响.Western印迹法检测DHT作用于HaCaT细胞后蛋白激酶B(AKT)、胞外信号调控激酶(ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况.结果 DHT可呈浓度依赖性上调HaCaT细胞SREBP-1c mRNA和蛋白的表达,并诱导AKT、ERK的磷酸化,但对p38、JNK的磷酸化无明显激活作用.LY294002预处理后HaCaT细胞SREBP-1c mRNA的表达较单纯DHT组明显降低(t=9.406,P＜ 0.05);SREBP-1蛋白水平降为0.7113±0.0313,与单纯DHT组2.2577±0.0601比较,差异有统计学意义(t=39.498,P＜0.05).而PD98059预处理后,SREBP-1c mRNA和蛋白的表达与单纯DHT组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 DHT可诱导HaCaT细胞SREBP-1 c mRNA和蛋白的表达.
关键词： 双氢睾酮 HaCaT细胞 胆固醇调节元件结合蛋白质1 信号转导 -
大黄素激活AMPK/SREBP-1通路减少脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪变性
目的 研究大黄素对游离脂肪酸(FFAs)诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的脂质调节和氧化应激作用及其可能的相关机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法测定大黄素对HepG2细胞存活率的影响;采用1 mmol/L FFAs(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导HepG2细胞脂肪变性,将HepG2细胞分为5组:正常对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组.采用油红O染色及甘油三酯含量测定评价大黄素对肝细胞脂肪变性程度的影响.流式细胞术检测各组细胞脂质蓄积引起的活性氧(ROS)的变化;Western blot检测各组细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK (p-AMPK)、固醇调节元件蛋白1(SREBP-1)的表达变化.结果 1 mmol/L FFAs处理后的HepG2细胞24h后出现大量脂滴,TG含量明显增加(P＜0.05).与模型组相比,大黄素组的脂滴减少,甘油三酯蓄积下降(P＜0.05),并呈剂量依赖性;还可以降低脂肪酸氧化后的ROS水平(P＜0.01).另外,大黄素处理后增加AMPK与p-AMPK的表达水平(P＜0.01),下调SREBP-1的表达水平(P＜0.01).结论 大黄素可抑制FFAs诱导的HepG2细胞脂肪蓄积,减轻氧化应激损伤,其作用可能与激活AMPK/SREBP-1通路有关.
