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贵阳地区2010年夏秋季病毒性腹泻的病原谱分析
目的 了解贵阳地区不同季节、性别、年龄的病毒性腹泻相关病毒的流行现况,为病毒性腹泻的诊治及预防提供依据.方法 收集6家哨点医院2010年6～11月间就诊的急性腹泻患者粪便426份,采用实时荧光RT-PCR法检测人轮状病毒(Human Rotavirus,HRV)-A/B/C组、诺如病毒(Norovirus,NV)-G1/G2型、札如病毒(Sapovirus,SV)、人星状病毒(Human Astrovirus,Hast V)、小双节RNA病毒(Picobirnavirus,PBV)-Ⅰ/Ⅱ型及肠道腺病毒(Enteric Adenovirus,EAdV),并按季节、性别及年龄进行病原构成的统计分析.结果 贵阳地区腹泻的病原按位次以NV-G2(62.68％)、HRV-A(38.97％,婴幼儿为主)及HastV(32.39％,成人为主),夏季病例标本中NV-G2、HastV、PBV-Ⅰ及Ad V的检出率相对较高(P＜0.05),秋季病例标本中HRV-B及HRV-C的检出率相对较高(P＜0.05)；并且Hast V及PBV-Ⅱ的检出率较其他年龄组高(P＜0.05)；男性及婴幼儿病例标本中NV-G2的检出率相对较高(P＜ 0.05)；未发现HRV-B及HRV-C的流行.426例腹泻标本总的病毒检出率为95.07％,其中单一病原阳性率为37.55％,单一病原感染的腹泻以NV-G2及PBV-Ⅱ为主,混合感染的病原阳性率为56.58％.结论 NV-G2型、HRV-A组(婴幼儿)、HastV(成人)是本地区引起夏秋季腹泻的主要病原,以腹泻相关病毒混合感染为主.
关键词： 病毒性腹泻 实时荧光RT-PCR 混合感染 贵阳 -
2010年桂林地区手足口病病原体RT-PCR检测结果分析
目的 了解2010年桂林地区手足口的病原体流行特征,确定其型别分布情况.为手足口病防控提供科学依据.方法 收集临床诊断为手足口病病例粪便样本1 144份,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)对样本病毒RNA进行总肠道病毒核酸,以及EV71和CoxA16特异性核酸检测.结果 1144份手足口病病例粪便样本中查出总肠道病毒核酸检测阳性823份,阳性率71.94％ (823/1 144)；EV71阳性率44.32％ (507/1 144),CoxA16阳性率1.74％ (20/1 144),非EV71、CoxA16的其他肠道病毒阳性率25.87％ (296/1 144).结论 引起桂林地区2010年手足口病流行的病原体主要是肠道病毒EV71型.
关键词： 手足口病 肠道病毒 实时荧光RT-PCR -
2011年眉山市手足口病病毒核酸检测结果分析
目的 通过手足口病病原体核酸检测,掌握眉山市2011年手足口病流行状况,为手足病预防和控制提供实验依据.方法 收集2011 -03/12间351例手足口临床诊断病例患者咽拭子标本,采用Real - time( RT - PCR)检测手足口病病原体核酸.结果 在351例患者咽拭子标本中,178例检测结果为阳性,其中135例为肠道病毒71型(EV71)阳性(75.84％)；36例为柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)阳性(20.22％),7例为其它肠道病毒阳性(3.93％),3～12月份均有病例报告,5、6月为发病高峰,发病年龄以4岁以下儿童(94.94％)为主,男女性别比为1.54∶1.结论 2011年手足口病病原以EV71型为主,5、6月为发病高峰,以4岁以下儿童发病为主.
关键词： 手足口病 实时荧光RT-PCR 病毒核酸检测 -
A (H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法的建立
目的 建立A (H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法.方法 由NCBI获取的6株流感疫苗株及2012年～2015年本实验室分离的17株,共计23条A(H3N2)亚型毒株NA基因全序列.根据序列比对结果,特异性设计针对R292K和N294S突变位点的TaqMan-MGB探针及引物进行3重realtime RT-PCR检测方法.使用倍比稀释的方法检测其敏感性.并利用临床标本,其他亚型流感及其他常见呼吸道病毒验证该方法的特异性.结果 设计的TaqMan-MGB探针可以检测到107(1000 copies)稀释度的对应模板,使用其他亚型流感病毒与常见呼吸道病毒验证该引物无交叉反应.通过对57份日常监测分离毒株进行检测,未发现耐药位点突变株.结论 建立了A (H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法;验证了该引物探针具有较高的敏感性与特异性,具有实际应用潜力.
关键词： H3N2 突变 实时荧光RT-PCR -
西安地区2011年儿童手足口病病原学分析
目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.
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宫颈癌组织中TSLC1基因表达的意义
0引言TSLC1(tumor suppressor in lung cancer-1)基因的沉默和宫颈癌的发生发展有关[1]. 我们采用实时荧光RT-PCR方法检测了不同宫颈组织中TSLC1的表达.
关键词： 宫颈组织 宫颈癌 TSLC1基因 实时荧光RT-PCR -
细胞培养结合实时荧光 RT-P CR 法快速检测甲肝病毒滴度的研究
目的：建立一种细胞培养与实时荧光RT-PCR相结合的快速检测甲肝病毒滴度的方法。方法根据甲肝病毒（ HAV） L-A-1株5′端基因组序列，设计了2条基因特异性引物及一条探针，建立实时荧光RT-PCR法，结合细胞培养检测甲肝病毒滴度，并与ELISA检测法进行比较。结果实验中建立的方法能特异检测甲肝病毒，细胞培养8 d检测病毒滴度为lg107．0 CCID50/mL。同一样本重复检测3次，批内样本Ct值的变异系数大为0．89％，批间样本Ct值变异系数大为1．66％。建立的细胞培养结合实时荧光RT-PCR法（细胞培养8 d）与细胞培养ELISA法（细胞培养28 d）检测甲肝病毒滴度结果差异无统计学意义（P＞0．05）。结论该方法具有快速、灵敏、特异等优点，应用于疫苗常规检测有良好前景。
关键词： 甲型肝炎病毒 细胞培养 实时荧光RT-PCR ELISA -
湖南省湘西自治州首例人感染H5N6禽流感病例的实验室诊断
目的:对一例不明原因重症肺炎病例进行H5N6禽流感病毒实验室诊断.方法:采集患者呼吸道标本,利用两种核酸提取方法,使用实时荧光RT-PCR技术进行检测.结果:H5和N6亚型引物的检测结果均为阳性,其中仪器提取法扩增曲线较手工提取法扩增曲线结果典型.结论:为提高H5N6禽流感病毒的检出率,建议在可疑病例使用药物之前,及早采集下呼吸道标本送实验室检测.
关键词： H5N6禽流感 实时荧光RT-PCR -
实时荧光RT-PCR检测20份流感考核盲样
目的 将实时荧光RT-PCR法应用于流感病毒盲样考核中,以便及时找出问题.方法 设计高度特异性的引物,采用实时荧光RT-PCR法对2011年和2012年国家下发的共20份流感考核盲样进行检测.结果 经实时荧光RT-PCR法检测,2011年10份盲样中B型2份,新甲型HIN1 2份,季节性H1亚型1份,季节性H3亚型2份,禽流感H5亚型1份,阴性2份.2012年10份考核盲样10份盲样中B型流感1份,新甲型H1N1 1份,季节性H1亚型1份,季节性H3亚型2份,禽流感H5亚型2份,阴性3份.根据国家流感中心的反馈,各年度正确率100％.结论 将实时荧光RT-PCR法应用于流感盲样考核中,保证了检测结果的准确性.
关键词： 实时荧光RT-PCR 病毒 考核盲样 -
7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法的比较和验证
[目的]比较和验证7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法,筛选出可用于实验室日常检测的方法,并证实实验室具有正确操作这些方法的能力.[方法]应用7种方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,包括5种SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法和2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒,用于方法比较和验证的参考样品包括猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、能力验证样品等不同来源的核酸.[结果]2种预期用于猪流感H1N1病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均能达到预期目的;3种预期用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均无法区分2009年新甲型H1N1流感病毒核酸和猪流感H1N1病毒核酸;2种Taqman探针荧光RT-PCR试剂盒均能正确检出2009年新甲型H1N1流感病毒核酸,但只有1种可检出能力验证阳性样品.[结论]5种SYBRGreen Ⅰ荧光RT-PCR法中有2种能用于猪流感H1N1病毒核酸的检测,另外3种不能用于新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒能用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸的检测.
关键词： 实时荧光RT-PCR 甲型H1N1流感病毒 检测 比较 方法证实 -
TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测腹地病毒方法的建立
为建立特异、快速、灵敏的TaqMan荧光定量RT-PCR方法用于腹地病毒核酸检测,利用腹地病毒核衣壳蛋白编码基因的特异性序列设计引物和探针,建立荧光定量RT-PCR快速检测体系.对含有目的基因的质粒、80份发热伴血小板减少综合征病毒阳性血清样本以及80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本进行核酸检测,验证方法的灵敏度、特异度和重复性.结果显示,该方法所检测的80份发热伴血小板减少综合征病毒核酸阳性血清与80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本均为阴性,对目的基因的检测灵敏度达50拷贝/反应;重复性测试中的变异系数为0.09％-0.87％,从样本核酸提取至检测完成的全过程仅需2h.证明建立的腹地病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法具有快速、特异、灵敏及重复性好的特点,有助于进口货物中昆虫、啮齿类动物、外轮上工作的疑似病人检疫以及对腹地病毒流行病学监测工作的开展.
关键词： 腹地病毒 发热伴血小板减少综合征 实时荧光RT-PCR -
益气清热方对幽门螺杆菌ureA基因表达影响的研究
目的:观察益气清热方对幽门螺杆菌(Hp)ureA基因表达的影响.方法:将益气清热方、黄芪及黄芩按Hp大耐受浓度加入培养基进行Hp液体培养,72小时后提取RNA,应用实时荧光RT-PCR方法定量检测Hp ureA基因mRNA.结果:与对照组相比,黄芪和复方组HpureA基因mRNA水平低于对照组,有显著性差异(P＜0.001),而黄芩组与对照组相比无显著差异.结论:益气清热方和黄芪对Hp ureA基因的表达有下调作用.
关键词： 幽门螺杆菌 ureA基因 益气清热 实时荧光RT-PCR
