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不同热处理方法对鲤鱼DNA的影响及不同DNA提取方法的比较
目的 研究不同加热方法处理后鲤鱼基因组DNA长度和含量的变化,并对4种DNA提取方法进行比较.方法 用电磁炉和微波炉将鲤鱼背部肌肉加热煮沸1、2、3 h取出,再分别用酚氯仿法、Wizard 试剂盒法、磁珠法和离心柱法提取处理前后鲤鱼基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳对处理前后的总DNA长度进行比较,再用实时荧光定量PCR法检测所得DNA样品中内参基因口β-actin含量的变化.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,处理后DNA片段明显降解.生鱼肉提取β-actin的量为1 070 213.39拷贝/μl,电磁炉处理1、2、3 h的浓度分别为143 309.6、441 350.43和256 994.16拷贝/μl,微波炉处理1、2、3 h的浓度分别为269 121.17、267 371.16和134649.97拷贝/μl.酚氯仿法、Wizard 试剂盒法、离心柱法和磁珠法提取的平均DNA浓度分别为718 944.93、737 945.64、26 751.22和2 934.06拷贝/μl.结论 加热煮沸导致DNA降解,因此加工食品中DNA的检测应当选择较短的目标片段.4种DNA提取方法比较,Wizard 试剂盒法和酚氯仿法提取的DNA浓度显著高于离心柱法和磁珠法,且离心柱法又高于磁珠法.
关键词： 加热时间 鲤鱼DNA DNA提取方法 荧光定量聚合酶链反应 -
从外周血获取DNA样本的方法学研究--分子流行病学研究方法探讨
目的研究从外周血获取DNA样本的主要影响因素,提供适合于分子流行病学调查时血液标本的处理方法、血液标本类型、DNA提取方法.方法采集40名健康志愿者静脉血,各自分成三种不同的类型(全血、血凝块、白细胞),并随机将其分为四种方法进行保存,用四种常用方法提取DNA.用方差分析比较DNA产量、纯度.分析比较各种条件下所提取DNA的质量.使用模糊综合评价方法评价血液标本类型、DNA提取方法的优劣.结果①DNA产量:全血DNA产量高,血凝块产量其次,白细胞产量低;提取方法所获DNA产量高低依次为:盐析法、酚/氯仿法、KI法、TKM法;样品在低温保存产量大于室温保存产量;3个月低温保存时,白细胞样品的DNA产量下降明显,血凝块DNA产量无明显变化.②DNA质量:DNA提取方法中酚/氯仿法优,盐析法与KI法相近,TKM法略差;从全血、白细胞中提取的DNA纯度略好于血凝块;室温保存样品对纯度有不良影响,特别是对白细胞和血凝快样品影响明显.结论各类样品应以低温运输与低温保存.如果开展较大规模的分子流行病学研究,综合各种因素,建议选取全血或血凝块样品,采用盐析法提取DNA.如特别要考虑DNA纯度可使用酚/氯仿法或KI方法提取.
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连翘干叶片和鲜叶片DNA提取方法和质量比较研究
目的 探讨三种DNA提取方法对连翘干叶片和鲜叶片DNA质量的影响,比较干叶片和鲜叶片DNA提取质量.方法 采用常规CTAB法、高盐低pH法和新改良CTAB法提取连翘干叶片和鲜叶片DNA,进行A260/A280测定、琼脂糖凝胶电泳检测和RAPD扩增分析.结果 新改良CTAB法提取的连翘干叶片和鲜叶片DNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间,电泳条带清晰无拖尾,选用随机引物(S7)对上述DNA样品进行RAPD扩增,可获得具有一定多态性扩增谱带.对连翘干叶片和鲜叶片DNA样品综合比较,结果显示由干叶片获得的DNA质量高于鲜叶片.结论 新改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法,该方法得到的干叶片DNA质量较鲜叶片更适合下一步分子生物学研究.
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连翘干燥叶片高质量DNA的提取方法研究
目的:探讨不同DNA提取方法对连翘干燥叶片的DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响,找出提取连翘总DNA的佳方法.方法:分别用常规CTAB法、高盐低pH法和改良CTAB法提取连翘总DNA,分别进行琼脂糖凝胶电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析,通过比较找出提取连翘总DNA的佳方法.结果:以CTAB法为基础的改良CTAB法可获得较高质量的DNA进行PeR扩增.结论:改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法.
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含当归中成药的DNA提取及其分子鉴定
目的:优化含当归中成药的DNA提取方法,并利用叶绿体trnL-F基因及当归特异分子标记对当归中成药进行鉴定.方法:采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,十二烷基磺酸钠(SDS)法,磁珠法以及改良CTAB法对10种含有当归成分的中成药进行DNA提取,利用微量紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳检测所得总DNA的完整性、纯度和浓度.对10份当归中成药的trnL-F序列进行扩增、测序,对序列进行比对分析并构建系统发育树.利用当归特异鉴别分子标记对10种当归中成药中的当归成分进行分子鉴别.结果:利用改良CTAB法获得了纯度较高,质量较好的DNA.10种中成药中当归的trnL-F序列与正品当归序列相似度为99.88％～100％,系统发育树显示10份中成药中的当归与正品当归聚为一类.利用当归特异性鉴别分子标记进行验证,10种中成药DNA样品均能得到明亮的扩增条带.结论:改良CTAB法可以有效提取当归中成药中的基因组DNA.利用trnL-F序列和当归特异性鉴别分子标记,成功对10份市售当归中成药进行了分子鉴别,为当归类中成药的分子鉴定奠定了基础.
关键词： 当归中成药 DNA提取方法 叶绿体trnL-F序列 特异性鉴别分子标记 分子鉴定 -
阿魏属4种药用植物总DNA提取方法比较
目的:对阿魏属4种药用植物基因组总DNA提取方法进行比较,建立阿魏属药用植物总DNA的佳提取方法,为下游分子生物学实验提供依据.方法:利用3种不同的DNA提取方法提取阿魏属4种药用植物的总DNA;用核酸蛋白检测仪和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的浓度和纯度;用ISSR分子标记的方法检测所得总DNA的质量.结果:试剂盒法提取的总DNA纯度高,质量好,能够将所有样品扩增出丰富而清晰的条带.所需时间短,操作简单.改良的CTAB法与SDS法提取的总DNA纯度及质量均次于试剂盒法,所需时间长,操作复杂.结论:试剂盒法为提取阿魏属4种药用植物总DNA的佳方法,能够直接用于下游分子生物学实验.
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3种真核藻类DNA提取方法比较
目的 建立一种简单、快速、高效的从自然水样中提取藻类总DNA的方法.方法 通过DNA产物的浓度和纯度、DNA产物的完整性及PCR扩增的比对,对3种真核藻类DNA的提取方法[纤维素酶法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CRAB)法和超声波破碎试剂盒法]进行比较.结果 3种方法得到的基因组DNA均较完整,片段大小都在23 kb左右；且3种方法得到的DNA浓度均较高.CTAB法和试剂盒法提取得到的总DNAA260nm/A280nm.的比值分别为1.767和1.824,并且A260nm/A230nm比值均在1.9以上,说明提取得到的总DNA纯度较高,且PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测得到明亮的条带.而纤维素酶法得到的DNA的A260nm/A280nm比值与A260/A230nm比值分别为1.617和1.522,表明盐及蛋白质污染较前两者严重.结论综合考虑后,认为CTAB方法更适合从自然水样中提取藻类DNA.
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两种血凝块基因组DNA提取方法的比较
分子生物学实验常常涉及到血液中基因组DNA的提取,通常用于实验的DNA主要是从抗凝血中提取,但抗凝血保存的时间过长,也会形成血块,给提取带来不便,造成许多珍贵的血液标本遗弃.为此,本实验对比研究了两种不同的血凝块基因组DNA提取方法,以探索血凝块基因组DNA提取的有效方法,现报道如下.
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皮肤分枝杆菌DNA提取方法比较分析
目的 比较分枝杆菌DNA提取的常用方法.方法 分别采用传统的冻融法和两种试剂盒(A、B)对不同浓度结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和耻垢分枝杆菌纯菌悬液及模拟标本进行总DNA提取.通过检测DNA纯度和PCR产物比较3种方法的提取效果,并应用临床皮肤组织标本进一步验证.结果 3种方法提取的分枝杆菌DNA均能用于PCR检测.试剂盒A获得的DNA纯度高,冻融法其次,试剂盒B杂质多;灵敏性检测显示3种方法可检测出的纯菌悬液低浓度皆为102菌细胞/ml;对于模拟标本,在103菌细胞/ml时检出率为100％,在102菌细胞/ml时试剂盒A、B和冻融法检出率分别为60％(12/20)、55％(11/20)、55％(11/20);临床标本检测结果提示,试剂盒B可用于石蜡标本DNA的提取,对分枝杆菌感染组织提取率同其它两种方法基本一致.结论 试剂盒A通过多次过柱洗涤可快速获得分枝杆菌的优质基因组DNA,为实验研究及临床检测的首选;试剂盒B单次试剂处理除适用于石蜡标本提取DNA外,可用于新鲜组织标本的协同检测.
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不同种类中药材的DNA提取方法
目的根据不同种类中药材来选择DNA提取方法.方法根据作者对各种药材鉴定的实践经验,结合国内外有关代表性的论文,进行归纳和整理.结果分析了不同DNA提取方法适用范围和局限性.结论根据药材种类、贮存时间,选取合适的提取方法和适当的样品量.
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适合中药材DNA条形码分析的DNA提取方法的研究
目的 建立适合中药材DNA条形码分析的DNA提取方法.方法 以6种富含次生代谢物质的药用顽拗植物为材料,对7种DNA提取方法进行比较.结果 CTAB法3对中药材具有通用性,操作简便、快速,提取的DNA浓度和合格率比其他对照方法高,能满足DNA条形码PCR扩增的要求.该方法主要特点:(1)用3%的CTAB浓度代替常用的2%CTAB;(2)采用1%的PVP与0.2%β-巯基乙醇共同去除杂质和防止DNA降解;(3)采用10000 r/min离心15 min去除蛋白质等杂质.结论 CTAB法3是适合中药材DNA条形码研究的DNA提取方法.
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存放14年微量血痕DNA检验1例
1案例资料1.1简要案情1996年9月3日,长沙某高校教务处处长及女儿在家中被杀,犯罪嫌疑人申某外逃,直至2009年2月被抓获.2010年4月因案件审理需要,要求对14年前在现场提取的1双男士丝质袜上的可疑血迹进行DNA检验.
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67例皮肤接触样本的采集及DNA提取方法的比较分析
DNA分型检验已广泛应用于法医学实践检案,尤其皮肤脱落细胞DNA分型检验,对侦查破案有重要意义[1].而对于此类检材,选择检材预处理及DNA提取方法至关重要.本文针对常见的皮肤接触样本,对负压吸附、胶纸粘取、两步擦拭和直接剪取等4种样本采集方法,以及DNA IQ-Maxwell 16工作站、M48手工法、磁珠手工法、磁珠联合Kingfisher 工作站提取等4种DNA提取法进行比较分析,以期为实践检验选择方法时参考借鉴.
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动物类药材DNA提取方法简介
分子遗传标记技术逐渐应用于中药材的鉴定,为准确鉴定中药材开辟出一条新路.这一技术的应用,首先必须能够从药材中抽提出DNA.本文概述了目前动物类药材的常用提取方法.对于不同种类动物药材,需要有相应的提取方法.寻找到每种动物类药材的经济有效的DNA提取方法,为进一步的深入研究奠定基础.
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石蜡包埋淋巴组织中DNA提取方法的比较
目的：通过比较三种从石蜡组织中提取DNA的不同方法，寻找一种高效、经济而简便的方法指导实际工作。方法选取结外淋巴组织增生性病变8例，采取三种方法提取DNA,分别是酚-氯仿提纯法，快速法和试剂盒法。通过检测提取DNA的浓度和纯度，PCR扩增效果，比较三种DNA提取方法的优劣。结果试剂盒法提取DNA OD260/280比值在1.91-1.96间；酚-氯仿提纯法OD值在1.32-1.68间；快速法OD值在1.19-1.36间。其中试剂盒提取DNA为稳定。3种方法提取的DNA为模板行PCR扩增，阳性率无统计学意义。结论快速法简单、无毒、需要的样品少，是一种值得推荐的DNA提取方法。
