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复方861对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原基因表达影响的研究
目的:观察复方861对HSC-T6I型胶原(CoI-Ⅰ)基因表达的影响.方法:复方861 0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml等浓度用于HSC-T6细胞48小时,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞Col-1基因表达的影响.结果:复方8610.25mg/mll、0.5mg/ml、1.0mg/ml等不同浓度的HSC-T6细胞基因表达水平依次为0.59±0.13、0.29±0.06、0.13±0.01,与空白对照组(2.80±0.60)比较,可明显抑制Col-Ⅰ mRNA水平(P＜0.01或P＜0.001).结论:复方861抑制HSC-T6细胞Col-Ⅰ mRNA水平,从而抑制胶原的合成,是其抗肝纤维化的作用机理之一.
关键词： 复方861 HSC-T6细胞 Ⅰ型胶原基因表达逆转录PCR -
中药复方861在糖尿病大鼠肾脏保护中的作用
目的:探讨中药复方861对糖尿病大鼠的肾脏保护作用.方法:将单侧肾切除Wistar大鼠制成链脲佐菌素(STZ)糖尿病模型,随机分为糖尿病组、糖尿病+861小剂量(3.2g.kg-1.d-1)组、糖尿病+861大剂量(6.4g.kg-1.d-1)组和糖尿病+氯沙坦(10mg.kg-1.d-1)治疗对照组.观察大鼠腹腔注射STZ6周及12周后血糖、肾小球滤过功能、尿白蛋白排泄量、尾动脉血压及肾组织病理学的变化.结果:复方861可改善肌酐清除率、降低血尿素氮、减少尿白蛋白含量、控制高血压以及明显减轻细胞外基质(ECM)增生,与氯沙坦比较无显著性差异.结论:复方861对糖尿病大鼠具有延缓糖尿病肾病进展的肾脏保护作用.
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复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达影响的研究
观察复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CoL-Ⅲ)mRNA表达影响.以不同剂量复方861灌胃大鼠制备的含药血清,作用HSC-T6细胞48h,应用逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ mRNA表达的影响.结果表明:复方8610.5、1.0、2.0、6.0g/kg等不同剂量含药血清HSC-T6细胞CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ mRNA表达.与空白对照组比较,具有显著性(P＜0.05或P,0.01).因此,复方861可降低HSC-T6细胞CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ mRNA表达水平,具有抗肝纤维化作用.
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复方861对原代培养大鼠肝细胞增殖和凋亡的作用
目的:研究中药复方861对原代培养大鼠肝细胞增殖和凋亡的干预作用.方法:分离培养大鼠原代肝细胞并进行鉴定,细胞增殖采用H3标记胸腺嘧啶掺入法检测,细胞凋亡采用电镜观察和流式细胞仪检测.结果:一定浓度的复方861可以促进体外分离培养的大鼠肝细胞DNA合成(P＜0.05),这种作用在一定浓度范围内呈剂量效应关系.而该药对肝细胞的凋亡无显著影响(P＞0.05).结论:中药复方861对体外培养的大鼠肝细胞具有促进增殖的作用.
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实验性肝癌前期病变的研究及中药复方861对其的影响
目的研究肝癌前期病变有关指标的表达和中药复方861对癌前期病变形成过程的影响.方法以二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前期病变,以复方861对诱癌过程干预,利用免疫组化、蛋白质印迹(Western-blotting)法分别检测胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-P)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果免疫组化染色结果示第6周时见GST-P阳性细胞,第8周开始普遍见GST-P结节.PCNA免疫组化结果示,第6周开始有阳性细胞表达,部分GST-P阳性结节内PCNA阳性细胞较多.Western-blotting结果示GST-P从诱癌第6周开始有阳性表达,造模组GST-P阳性表达比同期干预组表达量大.结论PCNA标识的GST-P阳性的细胞是早期癌前期病变的有效标志.复方861可抑制癌前期病变的进程.
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生长抑素受体亚型在人肝星状细胞的表达及其临床意义
目的 研究人肝星状细胞系(LX-2细胞)生长抑素受体(somatostatin receptor, SSTR)亚型的表达情况,探讨其临床意义.方法 选择对数生长期的LX-2细胞,将细胞以8×104个/孔接种于预置入盖玻片的6孔板中,分为LX-2组、中药复方861组、奥曲肽(octreotide)处理组及SSTR亚型阳性细胞(PANC-1)对照组,每组重复2孔.应用免疫细胞化学染色方法,观察LX-2细胞SSTR 2、SSTR5的表达;用RT-PCR方法观察SSTR亚型1～5的表达.结果 免疫细胞化学染色结果发现,LX-2细胞SSTR亚型2、5表达阳性,阳性物质呈棕红色,主要位于细胞膜及细胞质,复方861处理组SSTR2、5表达增强,细胞着色较深;RT-PCR结果发现,LX-2细胞SSTR亚型1～5的表达均阳性,阳性表达的高低依次为SSTR1、SSTR4＞SSTR2、SSTR5＞SSTR3(P＜0.05).结论 LX-2表达5种SSTR亚型,肝星状细胞可能是SST及其类似物降低门静脉压力的作用靶点.奥曲肽可能通过SSTR2、 SSTR5亚型调节肝星状细胞的舒张与收缩功能,从而影响肝内阻力及门静脉压力.
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复方861对DMN损伤性大鼠肝纤维化肝脏中MMP-2表达的影响
目的 研究抗肝纤维化中药复方861对DMN诱导的肝纤维化大鼠肝脏中MMP-2表达的影响.方法 将大鼠随机分成正常对照组,模型组与861防治组.模型组以DMN腹腔内注射,第1周注射3次,随后每周2次,共注射6周;治疗组同法注射DMN同时每日灌胃861冲剂;正常对照组以生理盐水代替腹腔内注射.实验结束处死大鼠,留取的肝脏组织做HE与Masson染色按0～4期标准判定肝纤维化程度,应用半定量RT-PCR检测肝组织中MMP-2mRNA,用免疫组化检测肝组织中MMP-2的表达.结果 模型组大鼠肝纤维化程度处于2～4期,其中大部分达3期以上,861防治组大鼠肝纤维化程度明显减轻,只有少部分达3期.模型组大鼠肝组织中MMP-2 mRNA水平显著高于正常对照组(t=4.03,P＜0.01),而861防治组大鼠肝组织中MMP-2 mRNA水平显著低于模型组(t=3.43,P＜0.01).861防治组与正常组之间,肝组织中MMP-2 mRNA水平无明显差别.模型组大鼠肝组织MMP-2的阳性表达显著强于正常对照组(t=4.56,P＜0.01),861防治组肝组织中MMP-2的阳性表达虽明显强于正常组(t=2.71,P＜0.05),但较模型组显著减弱(t=3.24,P＜0.01).结论 中药复方861能有效抑制DMN诱导的肝纤维化大鼠肝脏中MMP-2的表达,可能有利于维持HSC处于静止状态所需要的细胞外基质环境,这对于抑制HSC的活化与肝纤维化的发展具有重要意义.
关键词： 中药 复方861 肝纤维化 基质金属蛋白酶2/MMP-2 二甲基亚硝胺/DMN 大鼠 -
复方861对人肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达的调节作用
目的研究复方861对人肝星状细胞(LX-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的调节作用.方法应用基于SYBR-Green Ⅰ的实时定量荧光PCR方法,研究复方861分别作用24、48、72 h后,LX-2细胞中α-SMAmRNA含量的变化情况.结果复方861在48和72 h可以显著降低LX-2细胞中α-SMA mRNA含量.结论复方861可抑制LX-2细胞中α-SMA基因的表达,提示其抗肝纤维化作用可能与其抑制LX-2细胞的活化有关.
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中药复方861对糖尿病大鼠肾脏损害的防治作用
目的:探讨中药复方861对糖尿病大鼠肾脏损害的防治作用.方法:将单侧肾切除Wistar大鼠制成链脲佐菌素(STZ)糖尿病模型,随机分为糖尿病组、糖尿病+861小剂量(3.2 g·kg-1·d-1)组、糖尿病+861大剂量(6.4 g·kg-1·d-1)组和糖尿病+氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1)治疗对照组.观察大鼠腹腔注射STZ 6周及12周后血糖、肾小球滤过功能、尿白蛋白排泄量、尾动脉血压及肾组织病理学的变化.结果:复方861可改善糖尿病大鼠肌酐清除率、降低血尿素氮、减少尿白蛋白含量、控制高血压以及明显减轻细胞外基质(ECM)增生,与氯沙坦比较无统计学差异.结论:复方861对糖尿病大鼠具有延缓糖尿病肾病进展的肾脏保护作用.
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复方861对大鼠肝脏卵圆细胞分化的影响
目的 探讨复方861对大鼠肝脏卵圆细胞分化的影响,了解其在肝纤维化治疗过程中促进肝细胞再生的可能机制.方法 不同浓度(1.95,3.90,7.81,15.62,31.25,62.50,125,250,500,1000 μg/mL)的复方861在无血清培养条件下作用于WB-F344细胞24h,MTT法分析法检测细胞生长情况.500 μg/mL复方861在无血清条件下作用WB-F344细胞72 h后,通过RT-PCR观察CK-19、AFP、ALR、αmRNA表达的变化.以同期未作处理的WB-F344作为空白对照组.结果 WB-F344细胞经过不同复方861作用后,除1000 μg/mL外,各组细胞生长均未受到抑制,500 μg/mL时细胞生存活性佳.无血清条件下作用72 h后,半定量RT-PCR发现861组AFP mRNA的表达显著增加,CK-19 mRNA的表达显著减少,同时发现861组有ALB mRNA的表达.结论 复方861可能诱导WB-F344细胞主要向肝细胞方向分化.
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复方861对HSC-T6细胞基质分解素1mRNA表达水平影响的研究
为观察复方861对HSC-T6细胞基质分解素1(MMP3)mRNA表达水平的影响,复方861以0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml等浓度作用于HSC-T6细胞48小时,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响.结果表明,复方861 0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml等不同浓度的HSC-T6细胞mRNA表达水平依次为2.75±0.35、3.00±0.01、3.50±0.71,与空白对照组比较,可明显提高MMP3mRNA表达水平(P《0.05或P《0.01).因此,复方861提高HSC-T6细胞MMP3 mRNA表达水平,可能是其促进胶原降解,抗肝纤维化的作用机理之一.
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胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织MMP2mRNA的表达及复方861抑制作用的研究
观察胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织MMP2mRNA表达以及复方861的抑制作用.给雌性Wistar大鼠进行胆管内逆行性注入粘合剂加胆管结扎导致胆管阻塞,制备胆管阻塞性肝纤维化模型.于术后7天开始给予不同剂量的复方861灌胃,共49天.以RT-PCR法观察肝组织MMP2mRNA表达水平.胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型组(造模56天)MMP2mRNA为0.633±0.35,明显高于正常对照组(0.025±0.018,P<0.01);复方861 3g/kg、6g/kg、9g/kg组的MMP2mRNA分别为0.107±0.070、0.248±0.0192、0.222±0.106,明显低于模型对照组(P<0.05).复方861能够抑制胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织MMP2m RNA表达增高,可能是其抗肝纤维化作用的机理之一.
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复方861抑制四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的研究
目的:观察复方861对四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:实验分为对照组(20只)、四氯化碳模型组(20只)、复方861干预组(20只)3组,实验8周,处死大鼠,取肝组织,应用RT-PCR检测肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达和病理组织特殊染色.结果:表明与模型组(0.90±0.03、0.9±0.05)比较,复方861组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平分别为0.77±0.06、0.75±0.05,差异具有显著性(P＜0.01).结论:复方中药861能够抑制Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因水平,减少细胞外基质的沉积,是其抗肝纤维化的作用机理之一.
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胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织TIMP1mRNA表达及复方861抑制作用的研究
目的:观察胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织TIMP1 mRNA表达以及复方861的治疗作用.方法:给雌性Wistar大鼠胆管内逆行注入粘合剂加胆管结扎制备胆管阻塞性肝纤维化模型.术后第7天开始给予不同剂量的复方861灌胃,共49天.以RT-PCR法观察复方861对肝组织TIMP1 mRNA表达水平的影响.结果:模型组肝组织TIMP1 mRNA为1.691±0.646,明显高于正常对照组(P＜0.05);复方861 3g/kg、6g/kg、9g/kg组肝组织TIMP1 mRNA分别为0.858±0.132、0.771±0.227、0.872±0.306,明显低于模型组(P＜0.05或0.01).结论:胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型肝组织TIMP1 mRNA明显增高,复方861能够抑制该增高,可能是其抗肝纤维化作用的机理之一.
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复方中药861对胆管阻塞性肝纤维化模型的影响
目的:观察复方中药861对胆管阻塞性肝纤维化模型的影响.方法:动物模型为胆管阻塞性肝纤维化模型.以复方861喂服大鼠后分别观察血清生化、纤维化指标,肝组织羟脯氨酸含量,观察肝脏组织学变化.结果:经中药861治疗后,血清纤维化指标下降,肝组织总胶原含量下降,病理增生的胆小管减少,纤维组织分布不连续,HSC明显减少,同时PCNA染色显示胆小管增生不明显,肝细胞增生活跃.结论:抗纤中药861的逆转肝纤维化的作用在非炎症性肝纤维化模型中又一次得到证实.
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复方861对肝星状细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响
目的 观察复方861对HSC-T6细胞间质胶原酶(MMP13)及Ⅰ型胶原基因表达的影响.方法 以不同浓度的复方861(1.00、0.50、0.25 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定MMP13及Ⅰ型胶原的基因表达水平.结果 MMP13基因表达水平在复方861 1.00、0.50、0.25 g/L 3组分别为1.03±0.16、0.60±0.08、0.33±0.04,而空白对照组为0.26±0.04.Ⅰ型胶原基因表达水平在复方861 1.00、0.50、0.25 g/L 3组分别为0.12 ±0.01、0.34±0.04、0.67 ±0.10,而空白对照组为3.12±0.46.结论 复方861可明显促进HSC-T6细胞间质胶原酶的基因表达,并明显抑制Ⅰ型胶原的基因表达；且该作用与剂量有关.
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复方861对活化肝星状细胞超微结构及细胞骨架蛋白的影响
为探讨复方861抗肝纤维化的药理作用,研究其对活化的肝星状细胞系(HSC-T6)超微结构及细胞骨架蛋白的影响.
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复方861治疗慢性乙型肝炎肝纤维化与早期肝硬化的临床研究
目的观察复方861对慢性乙型肝炎肝纤维化、早期肝硬化患者的抗肝纤维化效果.方法采用随机、双盲、安慰剂对照的方法,以治疗前后肝穿病理组织学为评价指标,对6家医院的慢性乙型肝炎肝纤维化患者136例,按照随机编码分别服用复方861胶囊或安慰剂胶囊共24周,观察治疗前后患者症状、体征、肝功能、肝纤维化指标[IV胶原(C Ⅳ)、层黏连蛋白(L N)、Ⅲ型前胶原N端肽(P ⅢP)、透明质酸(HA)]、基质金属蛋白酶1、2、9(MMP1、2、9)及金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP1、2)水平以及肝病理组织学的变化.结果 5 2例治疗组、5 0例安慰剂组的患者完成治疗前后肝穿刺.治疗组患者治疗前、后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别为(68.2±68.6)U/L和(45.9±26.1)U/L、天冬氨酸氨基转移酶(AST)分别为(60.4 ± 62.6)U/L和(46.7 ± 39.0)U/L,安慰剂组患者治疗前、后血清ALT分别为(65.3±48.3)U/L和(85.4±115.5)U/L,AST分别为(60.4±44.6)U/L和(77.6±89.6)U/L,两组比较差异均有显著性,t=2.315和t=2.168,P＜0.05.治疗组血清HA、PⅢP、CⅣ、LN水平均较治疗前有所下降,但与安慰剂组相比,差异无显著性.治疗组治疗前、后血清TIMP1分别为(172.0±79.6)ng/m1和(133.5 ± 66.8)ng/ml,MMP9分别为(116.1±88.2)ng/ml和(80.4±79.0)ng/ml,较治疗前均明显下降,f=2.723和t=2.433,P＜0.05.复方861治疗前、后血清TIMP1/MMP1比值分别为4 8.3±96.3和19.9 ± 28.0,较治疗前下降,而对照组则较治疗前升高,治疗前后差值相比,两组差异有显著性,t=2.248,P＜0.05.治疗组治疗前、后肝组织炎症计分分别为14.0±6.0和10.2±6.1、纤维化计分分别为11.9±6.5和8.2=4.5,病理图像分析胶原相对含量分别为18.9%±9.5%和14.9%± 8.4%,t值为3.354～2.202,P值均＜0.05;S2期逆转率为38.9%,S 3期为53.3%,S4期为78.6%,总逆转率52.0%;安慰剂组分别为14.3%、25.0%、41.7%、20.0%,两组差异有显著性,x2值为9.766～4.478,P值均＜0.05.复方861治疗组未见明显不良反应.结论复方861治疗慢性乙型肝炎肝纤维化、早期肝硬化是可以逆转的.
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复方861治疗慢性乙型肝炎肝纤维化与早期肝硬化的临床研究
目的分析复方861治疗慢性乙型肝炎肝纤维化与早期肝硬化的临床效果。方法选择134例慢性乙型肝炎肝纤维化与早期肝硬化患者纳入研究对象，采用随机数字表法分为观察组和对照组67例，分别给予复方861胶囊和安慰剂治疗，两组疗程均为24w。结果观察组PⅢP、CIV、MMP9、TIMP1/MMP1均明显低于对照组，差异有统计学意义(<0.05)；S2、S3、S4期总逆转率(53.730%)显著高于对照组(19.40%)(<0.05)。结论复方861治疗可降低血清纤维化及血清胶原酶指标，促进慢性乙型肝炎肝纤维化与早期肝硬化逆转。
