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2-氯环戊腺苷预处理延迟相对兔缺血-再灌注损伤心肌αB-晶状体蛋白的影响
目的 研究腺苷A<,1>受体激动药2-氯环戊腺苷(CCPA)预处理延迟相对缺血-再灌注损伤心肌αB-晶状体蛋白的影响.方法 新西兰大白兔12只,随机均分为三组:假手术组(S组)、生理盐水预处理组(N组)、CCPA预处理组(C组).S组分离兔左冠状动脉前降支,套带,但不阻断血流;N、C组在用药24 h后分离兔左冠状动脉前降支,结扎30 min,恢复灌注2 h.提取心肌组织蛋白,采用Western Blotting检测αB-晶状体蛋白的表达.结果 S组中αB-晶状体蛋白表达很少,C组αB-晶状体蛋白表达显著高于S、N组(P<0.01).结论 CCPA预处理延迟性心肌保护作用与αB-晶状体蛋白表达上调有关.
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Alpha B-crystallin基因在人胶质瘤中的表达
目的:探讨alpha B-crystallin基因在人胶质瘤中的表达水平.方法:采用RT-PCR方法检测人胶质瘤中alpha B-crystallin mRNA表达情况.结果:不同病理级别人脑胶质瘤组织中alpha B-crystallin mRNA表达均有不同程度下降.结论:Alpha B-crystallin基因表达下调可能与人胶质瘤的发生发展有关.
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人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化
目的 研究人原代晶状体上皮细胞中,下调色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达对波形蛋白和αB-晶状体蛋白表达的影响.方法 取20～ 35岁青年人晶状体上皮细胞进行原代培养.构建三种短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)以特异性下调原代人晶状体上皮细胞中的PEDF基因RNA表达水平.感染细胞后,用Real-time PCR检测PEDF基因mRNA的表达水平,确定RNA干扰效率.人原代晶状体上皮细胞PEDF基因RNA干扰48 h后,用Western Blot检测其中波形蛋白以及αB-晶状体蛋白表达水平的变化,以shRNA-scramble组为阴性对照组.结果 人原代晶状体上皮细胞被成功分离培养,带有绿色荧光蛋白的表达PEDF shRNA的病毒载体对人原代晶状体上皮细胞的感染效率都在80％左右.Realtime PCR结果显示PEDF基因mRNA的表达明显被三种shRNA下调.Western Blot结果显示PEDF基因的表达下调引起了波形蛋白的表达下降(在三个实验组中分别下降了72％、79％和93％)以及αB-晶状体蛋白的表达增加(在三个实验组中分别增加了219％、204％、93％).结论 人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调可引起维持晶状体透明性的两种重要蛋白的改变,提示PEDF与白内障形成有一定的联系.
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αB-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用机制的研究
目的 研究αB-晶状体蛋白对钾离子通道kv1.1、kv1.3及凋亡抑制因子Bel-xl和凋亡因子Caspase-3的影响,探讨αB-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)保护作用的机制.方法 60只SD大鼠随机分为A组(急性高眼压组)、B组(急性高眼压+玻璃体内注射生理盐水5 μL组)、C组(急性高眼压+玻璃体内注射10×10-6g·L-1 αB-晶状体蛋白5μL组),每组20只,右眼为实验眼.注射后7d和14 d时,应用Western blot和实时定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)法检测kv1.1、kv1.3、Bcl-xl和Caspase-3在视网膜上的表达水平.结果 注射后7d和14 d时,C组kv1.1、kv1.3通道蛋白和凋亡因子Caspase-3蛋白表达水平和mRNA相对表达量均较A组、B组低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);C组Bcl-xl蛋白表达水平和mRNA相对表达量较A组、B组高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);相同时间点不同因子A组、B组间两两比较,差异均无统计学意义(均为P＞O.05).结论 αB-晶状体蛋白通过抑制急性高眼压后RGC上钾离子通道kv1.1、kv1.3的表达,从而提高凋亡抑制因子Bcl-xl的表达、降低凋亡因子Caspase-3的表达,减少细胞凋亡,保护RGC.
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αB-晶状体蛋白在先天性白内障大鼠晶状体中免疫活性的变化
目的 观察正常以及先天性白内障大鼠晶状体中αB-晶状体蛋白的免疫活性变化,探讨其与白内障发病的关系.方法 分别摘取8周龄、10周龄、12周龄、14周龄正常对照组以及先天性白内障大鼠晶状体,应用抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法,观察不同时期大鼠晶状体中αB-晶状体蛋白的免疫活性变化.结果 αB-晶状体蛋白在各周龄正常大鼠晶状体上皮细胞及纤维部具有较高的表达.在8周龄、10周龄先天性白内障大鼠晶状体上皮细胞及纤维部可观察到与正常对照组相同的较强的免疫活性,而12周龄、14周龄鼠的白内障晶状体纤维部αB-晶状体蛋白的免疫活性明显低于正常对照组.结论 在12周龄、14周龄先天性白内障大鼠晶状体纤维部,αB-晶状体蛋白的免疫活性减弱,在白内障形成过程中αB-晶状体蛋白可能被一些蛋白酶水解分化,从而促进白内障的形成.
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热休克蛋白对短暂心肌缺血所致蛋白质聚集的影响
为了观察短暂心肌缺血后心肌中蛋白质聚集物的产生,探讨热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白对心肌中蛋白质聚集物的影响,采用雄性Wistar大鼠制备在体心缺血-再灌注损伤模型,通过乙醇磷钨酸电镜观察蛋白质聚集物产生,采用免疫电镜观察热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白对蛋白质聚集物的影响.结果发现:①缺血15 min再灌注30 min时,心肌细胞中开始出现形态不规则的蛋白质聚集物,聚集物主要分布在核周、线粒体周围及其两极.再灌注4 h,蛋白质聚集物达到高峰,24 h后逐渐减少,72 h基本恢复正常.②大鼠经热休克预处理及缺血预适应后, 15 min缺血及4 h或24 h再灌注所致的心肌蛋白质聚集物的产生明显减少,恢复速度加快,再灌注24 h已基本恢复正常.③通过免疫电镜观察,在假手术对照组,心肌中热休克蛋白70表达水平很低.大鼠经热休克预处理后,心肌中热休克蛋白70表达增多,经缺血15 min再灌注4 h后,热休克蛋白70与心肌中蛋白质聚集物共分布.在假手术对照组心肌中,αB-晶状体蛋白有一定量的组成型表达,并均匀分布于胞浆之中.经热休克预处理、缺血预适应后缺血15 min再灌注4 h心肌中,αB-晶状体蛋白向肌丝移位,主要位于Z线两侧的明带,且与蛋白质聚集物共分布.本研究首次揭示了缺血-再灌注损伤时心肌细胞中蛋白质聚集物的形成、空间分布及其动态变化规律;证实了热休克预处理及心肌缺血预适应可明显减轻缺血-再灌注所致心肌蛋白质聚集.
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αB-晶状体蛋白与凋亡相关蛋白相互作用抑制C2C12细胞凋亡
目的探讨αB-晶状体蛋白抗心肌细胞凋亡的分子机制.方法构建带6个串联组氨酸的αB-晶状体蛋白表达质粒(pcDNA3.1-aBC),经测序证实后,转染C2C12肌原细胞株,筛选稳定高表达αB-晶状体蛋白的细胞株.采用H2O2(0.5 mmol/L)诱导细胞凋亡,检测线粒体细胞色素C释放率和细胞膜磷脂酰丝氨酸细胞色素荧光强度作为细胞凋亡早期判断指标.提取细胞线粒体蛋白及胞浆蛋白,采用镍金属亲和层析分离αB-晶状体蛋白与其相互作用蛋白复合物,免疫共沉淀证实其蛋白质相互作用.结果①H2O2处理1 h后,转染αB-晶状体蛋白的细胞线粒体释放细胞色素C和细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻均较对照组明显减少.②经Western blot检测,发现αB-晶状体蛋白与其相互作用蛋白复合物中存在线粒体凋亡相关蛋白p53、核因子κB、细胞色素C和Smac.③经免疫共沉淀证实,H2O2诱导细胞凋亡时,αB-晶状体蛋白与p53、细胞色素C和Smac等促凋亡蛋白相互结合增多,而与抗凋亡蛋白核因子κB相互结合减少.结论αB-晶状体蛋白基因转染可早期抑制氧化应激所致的C2C12肌原细胞凋亡,其机制可能涉及αB-晶状体蛋白与上述凋亡相关蛋白之间的相互作用.
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高表达αB-晶状体蛋白对HaCaT细胞存活和凋亡的影响
目的:探讨αB-晶状体蛋白(αB-crystallin)高表达对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)存活和凋亡的影响.方法:构建αB-crystallin的真核表达载体,转染至HaCaT细胞中并筛选出稳定高表达αB-crystallin的HaCaT细胞株,MTF法和流式细胞术分别检测高表达αB-crystallin对HaCaT细胞的细胞存活率和细胞凋亡率的影响.结果:成功筛选出高表达αB-crystallin的HaCaT/CRYAB-1、HaCaT/CRYAB-2,该两者的αB-crystallin表达水平均较亲代HaCaT明显升高.αB-crystallin高表达的HaCaT细胞在H2O2处理后细胞存活率明显升高(t =5.23,P＜0.05),细胞凋亡率明显下降(t=15.09,P＜0.05).结论:αB-crystallin具有促人角质形成细胞存活和抗细胞凋亡的作用.
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αB-晶状体蛋白基因rs14133G/C和rs2070894G/A多态性在广西西部人群中的分布
目的 检测中国广西西部人群αB-晶状体蛋白(CRYAB)基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点多态性,并探讨中国广西西部人群αB-晶状体蛋白基因多态性与其他4个种族人群的差异.方法 通过聚合酶链式反应结合单碱基延伸技术和DNA测序方法检测199名广西西部健康人CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型,并与国际人类基因组单倍型图谱计划公布的欧洲人、非洲人、日本人、中国北京人的CRYAB基因多态性进行对比.结果 在199名广西西部健康人中,男女性组间CRYAB基因rs14133 G/C位点、rs2070894 G/A位点的基因型和等位基因型频率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).中国广西西部人群和欧洲人相比,CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型和等位基因型频率比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与非洲人、日本人、中国北京人相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CRYAB基因多态性分布具有种群和地域差异,这种差异可能是相同疾病在不同人群中临床表现不同的原因之一.
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αB-晶状体蛋白促进体外培养人RPE细胞的增殖
目的 测定αB-晶状体蛋白在体外培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)中的表达,探讨αB-晶状体蛋白对体外培养人RPE细胞增殖的影响.方法 传代培养人A-RPE19细胞系,免疫荧光技术检测αB-晶状体蛋白在RPE细胞中的表达.用不同稀释浓度(体积比分别为1/102、1/103、1/104、1/105、1/106)的αB-晶状体蛋白以及其抗体干预各组(对照组、蛋白组、抗体组)细胞,MTT方法检测不同时间点各组细胞光密度值,流式细胞术检测各组细胞不同时间点的周期及凋亡情况.结果 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达；在48 h,浓度为1/104～1/102时,3组细胞的光密度值差异有统计学意义(P＜0.05)；蛋白组与对照组相比,0～48 h蛋白组的G1期比例减小,S、G2期比例增加,抗体组与对照组相比,G1期比例增加,S、G2期比例减少(P＜0.05,P＜0.01)；48 h时3组之间凋亡细胞的构成比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达,并对体外培养人RPE细胞增殖起明显促进作用.
关键词： αB-晶状体蛋白 人视网膜色素上皮细胞 增殖 -
下调αB-晶状体蛋白的表达对应激条件下人皮肤角质形成细胞存活和凋亡的影响
目的 探讨下调αB-晶状体蛋白(αB-crystallin)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)在应激条件下的存活和凋亡的影响.方法 设计并筛选特异性靶向下调αB-crystallin表达的siRNA;噻唑蓝法检测siRNA下调αB-crystallin表达对过氧化氢(H2O2)处理的细胞相对存活率的影响;流式细胞术检测siRNA下调αB-晶状体蛋白表达对H2O2诱导的细胞凋亡率的影响.结果 筛选获得可有效下调αB-crystallin表达的siRNA(si-CRYAB-1);si-CRYAB-1下调αB-crystallin表达可降低H2O2处理后的HaCaT细胞存活率(P＜0.01),并明显增加H2O2诱导的HaCaT细胞凋亡率(P＜0.05).结论 下调αB-crystallin的表达后,人角质形成细胞在氧化应激条件下的存活能力明显减弱.αB-crystallin可能具有抗人角质形成细胞凋亡的作用.
