首页 > 文献资料
-
三种环境内分泌干扰物对前列腺癌细胞PC-3增殖的影响
[目的] 通过观察环境内分泌干扰物对-壬基酚(n-4-noniphenol,NP)、双酚A(bisphenol A,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对前列腺癌细胞PC-3增殖的影响,探讨近几年来前列腺癌发病率增加的原因.[方法] 前列腺癌细胞株PC-3在RPMI 1640培养液中采用开放式单层贴壁培养,培养条件为37℃,5% CO2,100%相对饱和湿度,采用MTT法、3H-TdR掺入法及流式细胞术对PC-3细胞的增殖情况进行分析.实验设溶剂对照组及每种受试物各四个剂量组.[结果] NP、BisA和DBP均可促进PC-3细胞增殖和细胞DNA合成并推进G0/G1期细胞进入S期,提高细胞增殖指数;随着培养时间的延长至96 h,在较低浓度条件下,0.5 μmol/L NP、0.5 μmol/L BisA和25 μmol/L DBP也能明显促进PC-3细胞增殖(P＜0.05),且其促进PC-3细胞增殖效应存在剂量-效应关系和时间-效应关系.[结论] NP、BisA和DBP可促进前列腺癌细胞株PC-3的增殖,提示环境中内分泌干扰物污染增加,可能是近几十年来前列腺癌发病率上升的原因之一.
-
人p27kip1可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达
目的:体外构建人p27kip1可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响.方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kip1 cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kip1基因腺病毒(Ad-p27kip1),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western 杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化.Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照.结果:构建的Ad-p27kip1病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western 杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用.结论:体外连接法成功地构建携带人p27kip1基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用.
-
Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响
目的 研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2, Bax, caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制.方法 体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后, 通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率; Western印迹技术检测Bcl-2, Bax, caspase-9蛋白的表达变化.结果 MTT法结果显示4 μmol/L, 8 μmol/L及12 μmol/L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01), 抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强.电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡; Western印迹技术的结果:经培养72 h后,随着药物浓度增大, Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax, 有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多.结论 Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并可诱导其凋亡.Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2, Bax, caspase-9介导.
-
IL11类似物c(CGRRAGGSC)与人前列腺癌PC-3细胞体外结合特性的研究
目的:探讨白细胞介素11(IL11)类似物环九肽c(CGRRAGGSC)与人前列腺癌PC-3细胞的体外结合特性.方法:采用荧光染料L5S670标记c(CGRRAGGSC)合成LSS670-c(CGRRAGGSC),流式细胞仪测定其与PC-3细胞体外结合的荧光强度,计算其竞争抑制试验中的半数抑制量(IC50)和平衡抑制常数(Ki),荧光显微镜观察LSS670-c(CGRRAGGSC)在PC-3细胞的定位;用<'99m>Tc标记c(CGRRAGGSC)合成<'99m>Tc-DTPA-c(CGRRAGGSC)与PC-3细胞进行放射受体结合分析,Scatehard作图法计算标记物与PC-3细胞结合的平衡解离常数(Kd)和每个细胞上的大结合位点数(Bmax).结果:L5S670-c(CGRRAGGSC)与人前列腺癌PC-3细胞的结合具有可饱和性,浓度与时间呈依赖性.未标记c(CGRRAGGSC)与LSS670-c(CGRRAGGSC)对PC-3受体具有竞争性抑制作用[IC50=(6.31±0.12)nmoL/L,Ki=(2.11±0.14)nmol/L].LSS670-c(CGRRAGGSC)荧光主要集中在PC-3细胞.膜上,Kd值为(0.11±0.02)nmol/L,Bmax为(230±34)fmol/mg pro.结论:c(CGRRAGGSC)符合特异性配体的标准.
关键词： PC-3细胞株 白细胞介素11类似物 核素 荧光染料 前列腺癌 -
Omi/HtrA2对前列腺癌细胞株PED/PEA-15表达及PC-3细胞凋亡的影响
背景与目的:促、抑凋亡因子间的相互作用与肿瘤的发生、发展密切相关.Omi/HtrA2是新近发现的一种凋亡调节因子,PED/PEA-15是一种广泛表达的抗凋亡蛋白.本研究旨在探讨Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和前列腺癌细胞PC-3凋亡的影响.方法:构建Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体,并用脂质体法分别将两载体转染至PC-3细胞中,Western blot和ELISA法检测Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和细胞凋亡的影响;Caspase-8检测试剂盒检测PED/PEA-15对Caspase-8活性的影响;Western blot、RT-PCR法检测Omi/HtrA2特异siRNA序列对其转录、翻译的影响,流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后PC-3细胞凋亡的变化.结果:酶切和DNA测序证实Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体构建成功.通过转染Omi/HtrA2表达载体高表达Omi/HtrA2可抑制PED/PEA-1 5表达,并增加肿瘤细胞的凋亡率;抑制PED/PEA-15的表达可提高Caspase-8活性.siRNA沉默Omi/HtrA2基因后PC-3细胞对顺铂的敏感性降低.结论:Omi/HtrA2可通过抑制抗凋亡蛋白PED/PEA-15表达而在PC-3细胞凋亡中发挥重要作用.
-
Rho GTP酶在ω-3多不饱和脂肪酸抑制人前列腺癌PC-3细胞转移中的作用
背景与目的:近年来,多不饱和脂肪酸对肿瘤发生、发展影响的研究备受关注.本实验主要观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3 PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对人前列腺癌细胞株PC-3转移的影响,并通过检测ω-3 PUFA对细胞内Rho GTP酶蛋白表达及细胞骨架重组影响,揭示Rho GTP酶在ω-3 PUFA抑制肿瘤转移中的作用.方法:MTT法观察ω-3 PUFA对PC-3细胞增殖能力的影响,体外粘附实验、侵袭实验和迁移实验观察ω-3 PUFA对肿瘤细胞转移的影响.Western blot法检测ω-3 PUFA对与细胞骨架重组相关的RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42蛋白表达的影响.免疫荧光细胞化学法标记微丝和微管,激光共聚焦扫描显微镜观察ω-3 PUFA对细胞骨架重组的影响.结果:EPA及DHA均能抑制PC-3细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加.与对照组比较,60μmol/L的EPA或DHA处理后的PC-3细胞体外粘附性、侵袭性和迁移性均显著下降(P＜0.05).ω-3 PUFA能显著下调Rac1、Rac2和Cdc42蛋白表达(P＜0.05),并能明显影响细胞内微丝和微管细胞骨架的结构和分布.结论:ω-3 PUFA能够通过下调Rho GTP酶基因表达,抑制Rho GTP酶对细胞骨架重组的调控,导致细胞骨架结构改变,削弱肿瘤细胞的粘附性、侵袭性和迁移性,抑制PC-3细胞的转移.
