首页 > 文献资料
-
X染色体STR荧光复合扩增体系的建立及多态性
目的 研究X染色体STR基因座的遗传多态性,建立群体遗传学数据.方法 利用荧光标记引物复合PCR技术,在同一反应管中同时检测 DXS6801、DXS9902、DXS6809、DXS6803、DXS6804 和DXS6799 6个X-STR 基因座,采用 ABI PRISM 3100 遗传分析仪电泳和 GeneMapper ID 3.1 软件进行基因分型.结果 用此体系同时分析6个 X-STR 基因座,检测264个广东汉族无关个体(男202人;女62人),DXS6801、DXS9902、DXS6809、DXS6803、DXS6804和DXS6799分别检出8、6、11、10、6和9个等位基因,多态性息含量(PIC)为0.662 3～0.837 6,女性个体识别率(PDF)为0.824 2～0.951 1,三联体非父排除率(MEC)为0.594 9～0.817 4.结论 本研究的6个X-STR基因座有高多态性和高个体识别率,在法医学个体识别和女孩的亲权鉴定中有重要应用价值.
-
五色荧光标记27个Y染色体短串联重复序列基因座复合扩增体系的建立
目的 建立27个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)基因座的复合扩增体系,评估其法医学应用价值.方法 采用五色荧光素标记技术,对27个Y-STR基因座进行复合扩增和毛细管电泳检测;检测体系的灵敏度、均衡性、一致性、特异性和稳定性,并观察混合、降解和脱落细胞检材的分型情况.结果 五色荧光标记复合扩增检测体系的阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥70％,同一荧光标志基因座间的均衡性≥50％,不同标志荧光素间的均衡性≥30％.灵敏度达0.125 0 ng,种属特异性高;混合、降解和脱落细胞检材的分型正确.结论 27个Y-STR基因座复合扩增体系分型效果良好,对建立Y染色体STR数据库、研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义.
-
前列腺癌膜联蛋白Ⅱ微卫星不稳定的荧光复合扩增研究
目的 探讨膜联蛋白Ⅱ微卫星的不稳定对前列腺癌早期诊断的作用.方法 使用荧光复合扩增的方法对16例前列腺癌组织、16例良性前列腺增生组织及16例正常人血样中的膜联蛋白Ⅱ的三个基因座进行扩增,检测PCR产物,分析其差异与疾病间的关系.结果 膜联蛋白Ⅱ的D15S1185,D15S1292两个正常基因座在前列腺癌组织、良性前列腺增生组织以及血液样本中扩增大小无差别;在AN2-di-repeat-NH的二核苷酸重复序列微卫星基因座区域表现差异,以扩增大小134 bp为分界线,前列腺癌组织与正常血液样本存在显著性差异(χ2=9.087,df=1,P=0.003),前列腺癌组织与良性前列腺增生组织之间显著性不明显(χ2=1.997,df=1,P=0.158),良性前列腺增生组织与正常血液样本之间有显著性差异趋势(χ2=3.405,df=1,P=0.065).结论膜联蛋白Ⅱ二核苷酸微卫星基因座AN2-di-repeat-NH的多态性有可能成为早期前列腺癌的预警指标.
-
用荧光复合扩增体系检测5个X染色体短串联重复序列基因座的多态性
[目的] 为了研究X染色体短串联重复序列(X-STR)基因座的遗传多态性,我们检测了DXS6803、DXS981、DXS6809、DXS6789和DXS7132 5个基因座在广东汉族人群中的多态性. [方法] 利用荧光标记引物PCR技术复合扩增上述5个基因座,并用ABI PRISM 3100毛细管电泳及GeneMapper ID3.1软件进行基因分型.[结果] 在363个广东汉族无关个体(男性:181个,女性:182个)中5个基因座共检出54个等位基因.多态性信息含量为0.6935 ～ 0.8177;女性个体识别率为0.8976 ～ 0.9562.三联体非父排除率为0.7805 ～ 0.8467.[结论] 这5个基因座多态性较高,在个体识别和亲权鉴定中具有重要的应用价值.
关键词： X-染色体短串联重复序列 荧光复合扩增 多态性 广东汉族 -
九个X染色体短串联重复基因座复合扩增体系的建立及遗传多态性
目的 发掘更多多态性高的X染色体短串联重复(X-chromsomme short tandem repeats,XSTR)基因座,以解决法医学实践中的特殊案例.方法 建立一组四色荧光复合扩增体系,同时检测DXS7133,DXS981,DXS7424,DXS6789,DXS7132,GATA165B12,DXS101,GATA31E08和DXS10011共9个X-STR基因座,采用ABI PRISM 3100遗传分析仪电泳和GeneMapper ID 3.1软件进行基因分型.结果 用此体系检测华南地区363个无关个体(251名男性,112名女性),9个基因座共检出111个等位基因,女性个体识别率为0.5837～0.9959;三联体非父排除率为0.4072～0.9511;多态性信息含量为0.4481～0.9531.结论 本体系中的基因座多态性高,高多态性的X-STR基因座复合扩增体系能为解决特殊的亲权鉴定案提供快速鉴定技术,是常染色体STR、Y-STR等鉴定方法的良好补充,在法医学实践和临床产前诊断中将有较好的实用价值.
-
4个X-STR基因座复合扩增体系的建立及应用
目的:建立DXS9902,DXS7130,DXS9898及DXS9895等4个X染色体特异性短串联重复(X-chromosome specific short tandem repeat,X-STR)基因座的复合扩增体系,调查其多态性并探讨在法医学实践中的应用.方法:复合扩增DXS9902,DXS7130,DXS9898及DXS9895 4个基因座,ABI PRISM 3100进行毛细管电泳检测,Genescan及Genetyper 软件进行检测结果分析及等位基因分型.结果:在中国北方汉族200名无关男性个体及200名无关女性个体中,4个基因座分别发现了6,12,8,6个等位基因.结论:这4个基因座的复合扩增系统有较高的多态性信息,在个体识别和亲权鉴定中有较好的实用价值.
-
X-STR体系在特殊亲子鉴定案中的应用1例
亲权鉴定的法医物证检验,一般的三联体(父亲-母亲-小孩)和二联体(父亲或母亲-小孩)能用常染色STR解决.当常染色STR发生1个或2个基因座违反孟德尔遗传规律,计算PI值＞10 000、W值＞0.9999时,提示这些违反孟德尔遗传规律的基因座是由于突变造成的.然而,当检测足够多的常染色STR基因座仍仅发现1个或2个基因座违反孟德尔遗传规律但其W值＜0.9999时,此时可能需要检验性染色STR来协助确定.
关键词： 法医物证学 X染色体短串联重复(X-STR) 荧光复合扩增 亲权鉴定 突变 -
10个Y-STR基因座复合扩增体系建立及应用
目的 建立DYF404Sl a/b、DYF399S1 a/b/c、DYF403Sl al-3/b、DYS576、DYS570、DYS627、DYS588、DYS447、DYS446、DYS449共10个Y-STR基因座的四色荧光复合扩增体系,调查河南汉族群体中的遗传多态性,评价其法医学应用价值.方法 采集500名河南汉族男性个体血液样本,用6-FAM、HEX和TAMRA荧光染料分组标记10个Y-STR基因座,PCR扩增产物采用ABI3130XL遗传分析仪进行分离,GeneMapper ID v3.2软件分型.结果 采用本文方法,检测的低基因组DNA量为0.05ng;群体调查在上述10个Y-STR基因座分别检测出8～28个等位基因,GD值在0.472 0～0.999 0范围之间,DP值在0.471 1～0.997 0之间.10个基因座所组成的单体型共观察到497种,其中仅出现1次的单体型有494种,HD值达到0.999 908 75,DC值为0.994 0.结论 建立的10个Y-STR基因座荧光复合扩增体系灵敏度较高,在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性,可以在相关研究和应用中选择使用.
-
19个常染色体与4个Y染色体STR复合扩增体系的建立
目的 建立19个常染色体STR及Amelogenin和4个Y染色体STR基因座复合扩增体系,并对其效能进行评估.方法 用五色荧光标记20+ 4Y-STR基因座,建立同步扩增检测体系,用ABI 3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型;检测体系的灵敏度、均衡性、稳定性、特异性、同一性和稳定性,并观察混合、降解及微量检材的分型情况.结果 采用本文体系,DNA模板量在0.05 ～ 1.00ng时,分型准确,均衡性、特异性好;混合、降解及微量检材分型正确.该19个常染色体STR基因座的累计个人识别率大于0.999 999 999,三联体累计非父排除率达0.999999985,Y-STR单倍型多态性为0.592.结论 本文建立的复合扩增体系分型准确,稳定,在法医学案件检验及数据库建设等方面有良好的应用前景.
-
10个STR基因座荧光复合扩增体系的研制
目的 建立10个STR基因座荧光标记复合扩增体系,并评价其法医学应用价值.方法 在北京、山西、广东汉族,辽宁满族、西藏藏族群体中调查STR基因座遗传多态性,筛选出9个具有高度多态性和法医应用价值的STR基因座及性别基因座.构建四色荧光素标记复合扩增体系,制备等位基因分型标准物,编制分析软件,并对体系的种属特异性、灵敏度、稳定性、混合样本等检测能力进行考察.结果 建立的复合扩增体系遗传稳定好,累积非父排除率可达0.99996,累积个体识别率可达0.9999999999993;与CODIS系统均不存在连锁遗传；各基因座间布局合理、无杂峰、扩增结果清晰易辨,并可实现检测分析自动化.体系种属特异性较好,灵敏度为0.1ng,稳定性好,混合样本检出范围在2∶8 ～8∶2之间.实际案例检材检测结果好.结论 本文建立的复合扩增体系在法医学实践中有较好的应用价值.
-
6个Y-STR荧光复合扩增系统的建立及应用
目的 建立6个Y-STR荧光复合扩增体系,评价其法医学应用价值.方法 设计DYS444,GATA-A7.2,GATA-A10,DYS390,GATA-A7.1,DYS443荧光复合扩增引物,扩增总体积20μL,内含模板DNA0.5～10ng,PCR产物用3130遗传分析仪电泳,Genemapper(R) ID v 3.2分析结果,根据等位基因标准命名各等位基因,并评价该系统的特异性、准确性、均衡性、灵敏度及对混合血样的分析能力.结果 当dNTP、Mg2+分别为200 μmol/L、1.5mmol/L时扩增效果佳,0.5～10ngDNA 模板量均能获得较好的扩增效果,各基因座分型结果清晰,扩增均衡,特异性强,重现性好,基本满足实际应用的性能要求.对湖北汉族群体进行遗传学调查,结果GD值0.580 3 ～0.722 3,共检出158种单倍型,其多样性为0.995 8.结论 本文6个Y-STR扩增系统分型可靠,配合常用Y-STR分型试剂盒,可进一步提高个体识别能力.
-
24个Y-STR基因座荧光标记复合扩增体系的建立
目的 构建包含24个Y-STR基因座的荧光标记复合扩增体系.方法 选择DYS531、DYS630、DYS622、DYS552、DYS510、DYS449、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS635、DYS587、DYS527a/b、DYS460、Y-GATA-A10、DYS520、DYS557、DYS522、DYS481、DYS570、DYS385a/b、DYS44424个Y-STR基因座,构建荧光复合扩增体系.检测该体系的特异性、同一性、灵敏度、扩增均衡性、抗干扰性和准确性,调查其在广东地区人群的基因多样性.结果 建立的复合扩增体系在检测的非人类及女性样本中未发现谱带,同一个体不同组织检测结果一致,0.1 ng以上标准品9948可检测获得完整分型结果.常见抑制物中体系内加入120~200μmol/L血红素、1.5~2.0 mmol/L钙离子时出现等位基因丢失,对靛蓝、腐殖酸、EDTA具有较强抗干扰性.通过146例无关个体与Yfiler系统平行检测比对,24 Y-STR检测体系分型准确.广东地区人群单倍型多样性(HD)为0.99972,优于Yfiler系统(HD=0.99858).结论 本研究建立的24个Y-STR基因座荧光标记复合扩增体系法医学应用前景广阔,可用于案件检验、亲权鉴定与Y-STR数据库建设.
-
X染色体STR荧光复合扩增体系的建立及其应用
目的 研究X染色体STR在法医学亲权鉴定中的应用. 方法 利用荧光标记引物复合PCR技术,在同一反应管中同时检测DXS6801、DXS99D2、DXS6809、DXS6803、DXS6804和DXS6799 6个X-STR基因座,采用3100遗传分析仪电泳和GeneMapper ID v3.1软件进行基因分型.结果 本体系同时分析6个X-STR基因座,结果清晰,灵敏度高,重复性好.结论 本研究的6个X-STR基因座复合扩增体系,在法医学个体识别特别是女性的亲权鉴定中有重要应用价值.
-
荧光复合扩增DXS6804、DXS6799和DXS7132基因座
应用分子克隆技术制备出DXS6804、DXS6799和DXS7132基因座的等位基因分型标准物,通过研究复合扩增技术,构建3个基因座X-STR复合扩增的荧光检测体系.
