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脑缺血再灌注损伤大鼠Beclin-1与Bcl-xL、Caspase-2的表达及Cystatin C干预作用的影响
目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后自噬蛋白Beclin-1与凋亡蛋白Bcl-xL、Caspase-2表达的变化以及Cystatin C对其的干预作用.方法 Sprague-Dawley大鼠雄性60只随机分成假手术组(sham)、模型组(model)、Cys-tatin C低(low)、中(middle)、高(high)浓度组,每组12只.用线栓法制备大鼠右侧局灶性脑缺血2 h再灌注24 h模型.各组大鼠进行神经损伤严重程度评分(mNSS),Western Blot检测损伤区脑皮质组织中凋亡相关蛋白Bcl-xL、Caspase-2的表达;免疫荧光法检测Beclin-1蛋白表达的平均荧光强度;TUNEL法观察神经细胞的凋亡指数(AI).结果 与模型组相比,Cystatin C低、中浓度组中Bcl-xL的表达较模型组明显升高(P<0.05),Caspase-2的表达降低(P<0.05);而Cystatin C高浓度组Bcl-xL表达明显降低,Caspase-2的表达则显著上升(P<0.05);Cystatin C低、中、高浓度组Beclin-1的表达逐渐升高(P<0.05).结论 应用低、中浓度的Cystatin C干预脑缺血再灌注损伤大鼠后,自噬的增强能够促进Bcl-xL的表达,抑制Caspase-2的表达;而高浓度的Cystatin C使Caspase-2的表达增强,Bcl-xL的表达降低.
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caspase-2与p53在兔视网膜缺血再灌注损伤中的表达及rh-bFGF对其表达的影响
目的:探讨兔视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)中caspase-2、P53蛋白表达及重组人碱性成纤维细胞生长因子(Recombinant human basic fibroblast growth factor,rh-bFGF)对其影响.方法:将104只健康纯种大耳白兔随机分为正常组、缺血再灌注模型组、rh-bFGF治疗组,各组均将左眼作为实验眼.缺血再灌注模型组和rh-bFGF治疗组按照不同再灌注时间各分为1h、6h、12h、24h、48h、72h 6个时间段.后两组兔双眼做缺血再灌注损伤模型后,缺血再灌注模型组给予平衡盐溶液,rh-bFGF治疗组给予rh-bFGF药物治疗.免疫组织化学法检测视网膜组织中caspase-2、P53蛋白的表达变化.结果:caspase-2、P53在正常视网膜组织中几乎不表达,在缺血再灌注1h开始表达,24h达到高峰,48h开始减弱,后逐渐下降,rh-bFGF治疗组各时间点观察指标变化趋势与缺血再灌注模型组基本相似.rh-bFGF治疗组与模型组比较,两种蛋白表达均明显减弱,再灌注6-72h各时段差异有显著统计学意义(P＜0.05).结论:rh-bFGF通过抑制视网膜缺血再灌注时caspase-2、P53基因的表达减少视网膜细胞的凋亡,保护视网膜组织.
关键词： 重组人碱性成纤维细胞生长因子 视网膜 缺血再灌注 Caspase-2 P53 -
胰腺癌细胞ASPC-1凋亡过程中caspase 1和2的表达
目的:探讨细胞凋亡过程中caspase-1和caspase-2的表达及其意义. 方法:胰腺癌细胞系ASPC-1无血清培养24 h后加入IFN-γ,于6、12和24 h收集细胞,检测细胞凋亡情况(流式细胞法)和caspase-1和caspase-2蛋白质表达(western blot法),以不加IFN-γ的细胞为对照组. 结果:IFN-γ刺激可诱导ASPC-1细胞的凋亡,随着时间延长凋亡数量增多,24 h达9%.Caspase-1和caspase-2 表达随时间而增强,对照组轻度表达. 结论:Caspase-1和caspase-2在细胞凋亡过程中表达,是重要的凋亡调节基因.
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MSC移植对视网膜缺血再灌注损伤中p53和caspase-2表达的影响
目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemic-reperfusion injury,RIRI)后凋亡相关基因p53、caspase-2表达的影响.方法 将52只健康SD大鼠随机分为正常组(4只)、模型组(24只)、MSC移植组(24只).前房加压法建立大鼠RIRI模型.贴壁筛选法体外培养SD大鼠MSC,模型组于RIRI后1h予以玻璃体内注射PBS缓冲液,MSC移植组注射MSC.各组SD大鼠分别于RIRI后2h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h处死,免疫组织化学染色检测各组SD大鼠RIRI后p53及caspase-2的表达情况.结果 正常组各时间点未见p53及caspase阳性表达.RIRI后2h、6h、12 h、24 h、48h及72 h模型组p53阳性细胞数量分别为(20.50±1.71) mm-2、(26.98±4.23) mm-2、(31.74 ±0.58) mm-2、(50.63±0.67)mm-2、(48.02±0.69)mm-2、(38.90±0.95)mm-2,MSC移植组分别为(14.48±0.47)mm-2、(17.23±0.64) mm-2、(21.64±0.58)mm-2、(28.69 ±1.12) mm-2、(18.73±1.21)mm-2、(17.10 ±0.98)mm-2；模型组caspase-2阳性细胞数量分别为(9.20±0.54)mm-2 、(78.93 ±0.88) mm-2、(391.10±5.62) mm-2、(687.25±6.24) mm-2、(491.75±2.75) mm-2、(153.75±7.63)mm-2,MSC移植组分别为(4.23±0.36) mm-2、(58.03±5.48) mm-2、(282.25±56.82) mm-2、(588.75±9.07) mm-2、(389.75 ±8.18)mm-2、(121.75 ±3.59)mm-2；与各时间点模型组比较,MSC移植组p53及caspase-2的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 RIRI后行MSC玻璃体内注射,可抑制p53及caspase-2的表达,减少视网膜神经节细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 间充质干细胞移植 P53 Caspase-2 -
顺铂诱导卵巢癌耐药细胞系A2780/DDP凋亡的时间和剂量依从性
目的 探讨不同浓度顺铂作用不同时间诱导敏感和耐药卵巢癌细胞系发生凋亡变化规律和凋亡途径相关蛋白的表达.方法 选择卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP和敏感细胞系A2780为研究对象.在细胞培养基础上,运用MTT比色法、原位标记法、常规免疫组化和蛋白印迹等方法,观察不同剂量的顺铂(5、10、20、40μmol/L)和作用不同时间(24、48、72h)对A2780和A2780/DDP细胞凋亡的影响和此动态变化过程中半胱天冬氨酸蛋白酶-2(Caspase-2)和-3(Caspase-3)表达.结果 顺铂对A2780和A2780/DDP细胞系凋亡的诱导呈时间和剂量依从性.细胞凋亡蛋白Caspase-2和Caspase-3的活化促进顺铂诱导的凋亡,其表达呈现出对顺铂作用时间和剂量的依从性.结论 (1)在顺铂耐药机理中,药物在体内分布和代谢,对血药有效浓度的影响和细胞对药物排斥引起顺铂进入细胞存在一定的阻碍可能是降低顺铂敏感性的因素.(2)Caspase-2和caspase-3蛋白活化延后和活性降低可能是影响耐药A2780/DDP细胞凋亡的原因.
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Caspase-2与caspase-3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP凋亡中的表达
目的探讨Caspase-2和caspase-3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP凋亡中的作用和对A2780/DDP细胞系顺铂耐药形成的可能影响.方法用细胞培养方法,加入不同浓度(分别为0、5、10、20、40μM)顺铂共同培养卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP 24h、48h和72h,原位末端标记法(TUNEL)检测卵巢癌细胞系凋亡情况,用免疫组化SABC法观察此过程中Caspase-2和caspase-3蛋白表达.结果随顺铂作用时间延长和剂量增加,卵巢癌细胞系42780和A2780/DDP中凋亡逐渐增强(P＜0.01),caspase-2和caspase-3蛋白表达呈现出对顺铂作用时间和剂量的依从性(P＜0.01),两种蛋白在42780细胞中表达明显强于A2780/DDP(P＜0.01).结论Caspase-2和caspase-3蛋白活化促进顺铂诱导的卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP凋亡,其表达抑制可能是影响顺铂耐药的A2780/DDP细胞凋亡的原因.
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β-七叶皂苷钠对大鼠缺血-再灌注损伤视网膜iNOS及Caspase-2表达的影响
目的:观察β-七叶皂苷钠对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及Caspase-2表达的影响,探讨其对缺血-再灌注视网膜保护作用可能的机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、缺血-再灌注模型组、β-七叶皂苷钠组.通过前房灌注法建立视网膜缺血-再灌注损伤模型.分别于术后12、24 h行免疫组化、实时荧光定量RT-PCR检测iNOS的表达,免疫组化检测Caspase-2的表达.结果:免疫组化、RT-PCR均显示与相同时间点模型组比较,β-七叶皂苷钠组iNOS表达显著降低(P＜0.01),免疫组化显示与相同时间点模型组比较,β-七叶皂苷钠组Caspase-2表达显著降低(P＜0.01).结论:β-七叶皂苷钠可能通过抑制iNOS的表达,减少视网膜神经细胞的凋亡,对视网膜缺血-再灌注损伤发挥保护作用.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 iNOS β-七叶皂苷钠 Caspase-2 -
促红细胞生成素对视网膜缺血再灌注神经元凋亡和caspase-2表达的影响
为研究促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对视网膜缺血后caspase-2蛋白表达的影响,并探讨其对视网膜缺血保护的可能机制,我们采用升高眼内压的方法制作实验性视网膜缺血大鼠模型.将Wistar大鼠随机分为正常组、生理盐水组及EPO组.缺血前24 h,生理盐水组腹腔注射生理盐水,EPO组注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)5000 U/kg.观察缺血再灌注后不同时间段生理盐水组及EPO组视网膜组织学变化、TUNEL检测及caspase-2蛋白的表达.结果发现:(1)视网膜缺血再灌注各时间段,H.E.染色EPO组大鼠视网膜内层厚度均较生理盐水组厚,且内核层细胞数多于生理盐水组(P<0.01);(2)TUNEL法凋亡细胞测定显示,正常组无阳性细胞,缺血再灌注24 h,EPO组内核层的凋亡细胞比生理盐水组少(P<0.01);(3)caspase-2蛋白表达的测定显示,正常组无阳性细胞, EPO组及生理盐水组在缺血再灌注12 h检测到caspase-2蛋白阳性表达,但EPO组阳性蛋白表达量比生理盐水组少(P<0.01).以上结果提示:EPO预处理可以促进视网膜缺血再灌注后细胞的存留,减少细胞凋亡,caspase-2蛋白表达的抑制可能参与了这种保护机制.
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大鼠视网膜缺血再灌注损伤后脑源性神经生长因子对细胞凋亡及caspase-2和caspase-3表达的影响
目的:探讨caspase-2和caspase-3在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及脑源性神经生长因子对其的影响及对视网膜的保护作用.方法:实验于2007-02/2007-07在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,28只大鼠随机分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组(BDNF玻璃体腔注射),手术组又按照再灌注后不同时间段分为1,6,12,24,48,72h组.光学显微镜观察并计数视网膜神经节细胞的数量.应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜神经节细胞凋亡、免疫组织化学法(SABC)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测视网膜组织中caspase-2和caspase-3的表达情况.结果:正常视网膜未见凋亡细胞表达,缺血后6～24 h可见大量凋亡细胞表达,48h开始下降.凋亡细胞在缺血后24h达到高峰,caspase-2缺血6h后逐渐增加,24h达高峰,然后在48至72h下降.caspase-3表达改变与caspase-2改变基本一致.BDNF治疗组各观察指标表达变化规律与缺血组基本一致,但能明显抑制凋亡细胞的表达,同时使caspase-2和caspase-3的表达降低.结论:视网膜缺血再灌注损伤诱导了神经节细胞的凋亡;BDNF可抑制caspase-2和caspase-3的表达,减少神经节细胞凋亡,对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用.
