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MicroRNA-132拮抗剂两种不同注射方式在匹罗卡品诱导的幼年大鼠癫痫急性期的差异
目的 探讨microRNA-132拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD大鼠内侧颞叶癫痫(mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)模型急性期的影响.方法 实验分为4组:microRNA-132拮抗剂侧脑室置管组;microRNA-132拮抗剂阴性对照置管组;microRNA-132拮抗剂直接注射组;microRNA-132拮抗剂阴性对照直接侧脑室注射组;实验各组药物干预在造模前24 h进行.利用氯化锂-匹罗卡品建立SD大鼠MTLE模型,通过行为学观察各组大鼠癫痫持续状态发作潜伏时长,Racine评分观察各组大鼠抽搐发作的严重程度,脑电图监测癫痫样放电的频率及波幅,并统计实验各组大鼠诱导SE的成功率及24 h后的死亡率.结果 在实验各组中,建模成功率无显著性差异,microRNA-132拮抗剂直接注射组幼年SD大鼠造模以后达到SE的潜伏时较其阴性对照组明显延长、癫痫发作的Racine评分明显下降、脑电图结果显示痫样放电的幅度及频率显著下降,死亡率降低,结果有统计学意义(P＜0.05).MicroRNA-132拮抗剂侧脑室置管注射组与microRNA-132拮抗剂侧脑室直接注射组结果无统计学差异(P＞0.05).结论 microRNA-132拮抗剂预处理SD大鼠能明显延长氯化锂-匹罗卡品诱导的SD幼年大鼠癫痫发作的潜伏期,减轻急性期抽搐严重程度及大脑样痫放电,降低大鼠癫痫持续状态后的死亡率.提示microRNA-132拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD大鼠MTLE的发生具有抑制作用,抑制microRNA-132有可能成为癫痫持续状态药物治疗的潜在靶点和新方向.
关键词： microRNA-132 拮抗剂 氯化 匹罗卡品 癫痫 -
结肠癌组织中microRNA-101 microRNA-132及COX-2的表达与病理相关性分析
目的 分析结肠癌组织中miRNA-101、miRNA-132及COX-2的表达与病理相关性.方法 收集2013年11月至2016年1月结肠癌病灶组织和癌旁正常组织各135例,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测组织中miRNA-101 mRNA、miRNA-132 mRNA和COX-2 mRNA的表达,并分析各基因的相关性及与结肠癌临床病理特征的关系.结果 与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中的miRNA-101 mRNA和miRNA-132 mRNA的表达水平显著降低,COX-2 mRNA显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中miRNA-101 mRNA、miRNA-132 mRNA和COX-2 mRNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期以及淋巴结转移有关;低中分化、TNM分期为Ⅲ期或Ⅳ期及淋巴结转移,结肠癌组织中miRNA-101 mRNA和micrRNA-132 mRNA的表达显著降低,COX-2 mRNA的表达显著提高(P<0.05);miRNA-101、miRNA-132与COX-2呈显著负相关(P<0.05).结论 结肠癌组织中miRNA-101和miRNA-132表达下调,COX-2表达上调与结肠癌的发展进程有关,可作为结肠癌治疗的潜在靶点.
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microRNA-132对肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质的调控作用
目的:探讨microRNA-132 (miR-132)对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)β1刺激后大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)的细胞外基质分泌的调控作用.方法:体外培养NRK-49F细胞株,经TGF-β1 (2、3、5 ng/mL)作用24 h,或细胞转染miR-132模拟物(rno-miR-132 mimics,50 ng/mL)作用24 h,或rno-miR-132 mimics与TGF-β1共同作用24 h,茎环实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测细胞miR-132表达,RT-qPCR法和Western Blot法分别检测细胞胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ,Co1 Ⅰ)mRNA和蛋白表达.结果:①不同浓度TGF-β1刺激后NRK-49F细胞miR-132和Co1 Ⅰ的表达显著升高(P＜0.01).②rno-miR-132 mimics (50 ng/mL)作用NRK-49F细胞Co1 Ⅰ表达显著升高(P＜0.01).③与TGF-β1 (3 ng/mL)阳性对照组相比,rno-miR-132 mimics (50 ng/mL)与TGF-β1 (3 ng/mL)共同作用NRK-49F细胞Co1 Ⅰ表达显著升高(P＜0.01).结论:miR-132可以促进TGF-β1诱导的NRK-49F细胞分泌细胞外基质.
关键词： 肾间质纤维化 microRNA-132 转化生长因子β1 -
睡眠剥夺对大鼠不同脑区microRNA-132microRNA-134表达的影响
目的 探讨睡眠剥夺(SD)对大鼠海马、下丘脑、皮质microRNA- 132(mir-132)、microRNA-134 ( mir-134)表达的影响.方法 将20只大鼠分为对照组(CON组)、睡眠剥夺组(SD组).用改良多平台法建立睡眠剥夺模型,用实时定量聚合酶链反应( Real time-PCR)方法检测正常睡眠、睡眠剥夺大鼠海马、下丘脑、皮质mir- 132、mir-134水平.结果 SD组大鼠海马脑区mir-132含量较CON组有所升高,差异有统计学意义(CON 51.87±8.13,SD 67.25±7.59)(P＜0.01)；SD组大鼠海马脑区mir-134含量较CON组有所下降,差异有统计学意义(CON 1.82±0.15,SD 1.45±0.12) (P＜0.01)；SD组大鼠皮质、下丘脑脑区mir-132、mir-134含量与CON组相比差异无统计学意义(P＞0.05),皮质mir-132水平分别为CON 1.57±0.10,SD 1.48±0.11,下丘脑mir-132水平分别为CON 1.37±0.09,SD 1.36±0.11；皮质mir-134水平分别为CON 98.26±5.17,SD 100.80±4.15,下丘脑mir-134水平分别为CON 97.56±6.28,SD 91.01 ±4.07(P＞0.05).结论 Mir-132、mir-134在睡眠剥夺模型大鼠海马的上升和下降提示这两种miRNAs在睡眠剥夺中可能起到了相反的作用,对这两种miRNAs在海马的含量测定有望为睡眠剥夺及其抗抑郁机制的研究找到新的线索.
关键词： 睡眠剥夺 microRNA-132 MicroRNA-134 -
MicroRNA-132拮抗剂对匹罗卡品诱导的幼年大鼠癫癎持续状态的影响
目的：探讨microRNA-132拮抗剂对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年Sprague-Dawley（SD）大鼠癫癎持续状态（SE）的影响。方法将3周龄SD大鼠分为癫癎模型组、microRNA-132拮抗剂组和microRNA-132拮抗剂阴性对照组，每组15只。MicroRNA-132拮抗剂及其阴性对照预处理在造模前24 h进行，利用氯化锂-匹罗卡品建立幼年SD大鼠SE模型。通过行为学观察各组大鼠SE发作潜伏期及SE诱导成功率；Lado幼鼠癫癎评分观察各组大鼠抽搐发作的严重程度；脑电图监测各组大鼠癫癎样放电的频率及波幅，并统计各组死亡率。结果在实验各组中，SE诱导成功率差异无统计学意义（P>0.05）；与microRNA-132拮抗剂阴性对照组和癫癎模型组比较，microRNA-132拮抗剂组大鼠造模以后达到SE的潜伏期明显延长（P<0.05），Lado幼鼠癫癎评分下降（P<0.05），脑电图显示癎样放电的幅度及频率显著下降（P<0.05），死亡率稍降低。结论 microRNA-132拮抗剂预处理对氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年SD大鼠SE发生和发展具有抑制作用，抑制microRNA-132有可能成为SE药物治疗的潜在靶点和新方向。
关键词： microRNA-132 拮抗剂 癫癎持续状态 大鼠 -
Micro RNA-132对结肠癌细胞生物学功能的作用
目的 探讨microRNA-132(miR-132)对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用.方法 通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验.以细胞计数检测(CCK-8)、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响.结果 LOVO细胞中,外源性过表达miR-132能够抑制其生长,且抑制率呈时间、浓度依赖性,50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后,抑制率达30％.流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡.miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力.体外平板克隆形成实验显示,miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21％降至7％.划痕修复实验结果显示,高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低.结论 miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖,还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力.
关键词： microRNA-132 凋亡 增殖 迁移 克隆形成 -
MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应
目的：探讨microRNA-132（ miR-132）通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法：向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照（ NC）、miR-132 inhibitor或inhibitor NC，转染后用脂多糖（ LPS）和（或）乙酰胆碱（ ACh）处理细胞；采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶（ AChE）的mR-NA表达；采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3（ STAT3）和磷酸化STAT3（ p-STAT3），以及细胞浆和细胞核中核因子κB（ NF-κB）蛋白的改变；采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变；采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果：上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平；上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低（P＜0.05），下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高（P＜0.05）。当给予LPS＋ACh作用时，miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强（P＜0.05），miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱（P＜0.05）；miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强（P＜0.05）。结论：miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE，抑制AChE对ACh的水解作用，从而增强 ACh的抗炎作用，抑制NF-κB 及STAT3的活化。
关键词： microRNA-132 乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱 -
microRNA-132在人脐静脉内皮细胞中调控作用的研究
目的：探讨 miR-132在人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelia cells,HUVEC)中的调控作用。
方法：体外低氧培养人脐静脉内皮细胞6h后继续常氧培养3、6、12、24h,利用Real-time PCR检测miR-132和PGC-1α mRNA表达变化,Western-blot检测PGC-1α蛋白表达变化,及观察各组与正常培养的细胞之间的表达差异。通过对人脐静脉内皮细胞转染 miR-132模拟物与拮抗剂后,再分别置于常氧和低氧环境中培养,利用 Real-time PCR检测不同氧条件下miR-132和PGC-1α mRNA的表达变化,Western-blot检测PGC-1α蛋白表达变化。
结果：miR-132和PGC-1α在细胞低氧培养后继续常氧培养3 h时蛋白与mRNA表达量高,与正常培养的细胞表达差异为明显( P<0.01)。细胞转染后可观察到miR-132和PGC-1α在低氧组表达量要高于常氧组,而两组中转染miR-132模拟物后的表达量要高于转染拮抗剂组( P<0.01)。
结论：miR-132在低氧时的人脐静脉内皮细胞中表达明显上调,对PGC-1α存在调控作用。
