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雌激素对小鼠骨中原癌基因c-myc蛋白的影响
为初步探讨雌激素对骨的作用机制,以体外培养的小鼠胚胎长骨作为模型,通过免疫组织化学方法检测雌酚酮对骺板静止区、增殖区和肥大区c-myc蛋白表达的影响.结果显示,培养介质中雌酚酮浓度为10-9mol/L时,增殖区c- myc蛋白阳性细胞面积与对照组相比显著增加;浓度为10-8mol/L时,除增殖区外,静止区阳性细胞面积也显著增加;当浓度增至10-7mol/L时,3个区阳性细胞面积均显著增加.提示雌激素可通过促进长骨c-myc的表达促进软骨内成骨.
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雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用
目的:研究雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用及机制.方法:采用小鼠的蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡等腹泻模型及炭末推进法观察低、中、高剂量(14.87 mg/kg、29.74 mg/kg、59.48 mg/kg)的EA303对小鼠在体内胃肠道的作用.通过离体运动实验法分析不同浓度(10-5mol/L、3 × 10-5mol/L、10-4 mol/L)的EA303对家兔离体肠道平滑肌的作用.结果:EA303高、中、低3个剂量组灌胃给药后在不同时间段与生理盐水组相比可明显降低蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡所致的小鼠腹泻的腹泻指数;高剂量组与生理盐水组相比可明显降低正常小鼠的小肠推进率(58.53%±14.12% vs 78.41%±15.91%,P<0.01);高、中、低剂量组与生理盐水组相比均可明显延缓正常小鼠的排便时间(116.40±17.69 min,114.40±45.76 min,101.50±50.02 min vs 78.10±15.98min,均P<0.01);中、高剂量的EA303与未给药前相比能显著降低小肠平滑肌自主活动的振幅(43.26%±14.83%,16.70%±10.89%vs 100.00%±0.00%,均P<0.01),高剂量组与未给药前相比还显著降低小肠平滑肌自主活动的张力(58.94%±7.16% vs 100.00%±0.00%,P<0.01).结论:EA303具有抑制肠运动和抗腹泻作用,其作用机制可能是降低肠管平滑肌振幅和张力.
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抗骨质疏松药XW630对成骨细胞碱性磷酸酶mRNA表达的影响
目的研究新设计的抗骨质疏松药物XW630对成骨细胞碱性磷酸酶基因表达的影响,为其治疗骨代谢性疾病提供理论和实验依据.方法以成骨细胞MC3T3-E1为体外实验模型,用含有10-6mol/L浓度的XW630,雌酚酮,四环素及四环素加雌酚酮的细胞培养液DMEM培养细胞,24 h和72 h提取细胞总RNA并与碱性磷酸酶cDNA进行Northern杂交.结果 XW630对成骨细胞MC3T3-E1合成和分泌碱性磷酸酶具有明显的促进作用.结论 XW630具有明显的促进成骨作用.
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大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠骨质量的保护作用
目的 观察新型雌激素衍生物-大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠骨质量的保护作用及其对子宫的雌激素样作用,以评价大黄酸-哌嗪雌酚酮的抗骨质疏松活性.方法 6月龄Wistar雌性未孕大鼠48只,分为假手术组、去卵巢模型组、雌酚酮组、大黄酸-雌酮高、中、低3个剂量组,除假手术组外其余各组均行双侧卵巢切除,给药24 w后,测定大鼠全身及脊柱骨密度、骨矿盐含量、股骨生物力学及骨羟脯氨酸、骨钙含量和观察大鼠股骨远端和子宫的形态学变化.结果 大黄酸-雌酮3个剂量组大鼠全身及脊柱骨密度、骨矿物含量、大压缩载荷、大压缩应力、骨羟脯氨酸含量及股骨远端骺板下小梁骨体积均明显高于模型组(P<0.05或P<0.01);除骨体积少于雌酚酮组外,其余指标与雌酚酮组无明显差异;3组子宫重量、直径和内膜厚度明显小于雌酚酮组和假手术组,与模型组无明显差异.结论 大黄酸-雌酮在本实验剂量范围内与雌酚酮一样能显著改善去卵巢大鼠骨质量,而对子宫的刺激作用远远低于雌酚酮.
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新型雌激素哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠骨代谢及骨生物力学的影响
目的 研究哌嗪雌酚酮(piperazinyl estrone,PE)对去卵巢小鼠骨代谢及骨生物力学的影响,并探讨其作用机制.方法 70只昆明种雌性小鼠,随机分为7组,Basal组,Ovx组,Ovx+PE 0.5mg·kg~(-1)·d~(-1)组,Ovx+PE 1.0 mg·kg~(-1)·d~(-1),Ovx+PE 2.0 mg·kg~(-1)·d~(-1),Ovx+E0.71mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃给药共42 d,处死小鼠,采用骨形态计量学、骨生物力学测定哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠的骨量及力学指标的影响.结果 去卵巢小鼠骨小梁面积明显减少63%,小鼠股骨结构力学和材料力学指标均呈现显著性降低,表现出骨吸收大于骨形成的高转换型骨质疏松;而哌嗪雌酚酮各剂量组的骨量均有不同程度增加,小鼠股骨的力学参数有不同程度提高;雌酚酮通过明显抑制骨吸收,轻度抑制骨形成增加骨量.结论 哌嗪雌酚酮中剂量组(1.0 mg·kg~(-1)·d~(-1))轻度抑制骨转换增加去卵巢小鼠的骨量,改善去卵巢小鼠股骨的生物力学特性.
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关键词：
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四环素-哌嗪雌酚酮上调骺板c-fos, c-jun的mRNA及其表达产物水平
目的:研究四环素-哌嗪雌酚酮(XW630)对软骨细胞c-fos和c-jun基因的mRNA及其表达产物水平的影响,初步探讨其对骨的作用机制.方法:用原位杂交法,测定体外培养小鼠胚胎长骨骺板c-fos和c-jun mRNA的水平,同时用免疫组织化学法,测定了相应的表达产物.结果:10-7 mol.L-1 XW630可显著上调骺板静止区、增殖区和肥大区c-fos和c-jun的mRNA及其表达产物水平,且其作用比雌酚酮强.结论:XW630可能通过上调软骨细胞c-fos, c-jun的表达,促进软骨细胞中含有AP-1位点的、与骨生长发育有关的基因表达,从而促进软骨内骨形成.
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蛇床子素对骺板TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响
[目的]考察蛇床子素对小鼠长骨转化生长因子-β1 (transforming growth factorβ,TGF-β1)及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制.[方法]取16d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10-6mol/L雌酚酮、1×10-7～1×10-4mol/L四个不同梯度浓度的蛇床子素.采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白.[结果](1)经不同浓度的蛇床子素和雌酚酮处理后,胎鼠长骨骨总长显著增加.与对照组相比,蛇床子素1×107、1×10-6、1×10-5 mol/L和雌酚酮1×10-6mol/L组有显著性差异(P＜0.01).蛇床子素1×10-4 mol/L组骨总长有增加的趋势,但无统计学意义(P＞0.05).(2)与空白对照组,蛇床子素和雌酚酮组骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白水平明显上调.当蛇床子素浓度由1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L逐渐升高时,各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达升高,而1×10-4 mol/L组各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达降低.与雌酚酮组相比,蛇床子素组除1×10-5 mol/L组外,其他各组长骨骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ表达与雌酚酮组相比有统计学意义(P＜0.05).[结论](1)蛇床子素能明显促进体外培养胚胎小鼠长骨生长.(2)培养基中加入蛇床子素可上调长骨TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ表达,提示可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关.
关键词： 蛇床子素 雌酚酮 长骨 转化生长因子-β1 转化生长因子β受体Ⅱ -
大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用
[目的]研究大黄酸.雌酮(LC-1)对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用.[方法]酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞;采取MTT法测定细胞增殖,磷酸苯二钠法(pNPP)测定细胞内外碱性磷酸酶(ALP)活性,研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响,并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较.[结果]给药3 d后,与空白对照组相比:10-6mol/L LC-1组、10-7 mol/L LG-1组和10-6mol/L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性(P＜0.05);大黄酸抑制成骨细胞增殖,其中10-6 mol/L组有明显差异(P＜0.05),同时有增加细胞ALP活性的趋势,但无统计学差异.[结论]大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化.
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雌酚酮衍生物EA204对离体兔血管平滑肌的舒张作用
目的 探讨雌酚酮衍生物(EA204)对离体兔血管平滑肌的作用及其机制.方法 以离体兔主动脉条为标本,观察了EA204对去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)引起的兔主动脉条收缩的影响;对氯化钙(CaCl,2)累积收缩量效曲线的影响,并与维拉帕米(Ver)相比较.通过对比格列苯脲(10 μmol·L-1)孵育前后EA204对BaCl,2、Ka的舒张量效曲线,研究EA204对钾通道的作用.结果 EA204(10～3 mmol·L-1)可以剂量依赖性地抑制NE、KCl收缩的兔主动脉条;EA204(10 μmlol·L-1)或Ver(0.1μmol·L-1)都使CaCl,2累积收缩量效曲线呈剂量依赖性右移,但EA204孵育后CaCl,2量效曲线大反应基本不变,而Ver使大反应降低;加入格列苯脲(10 μmol·L-1)孵育后EA204对BaCl,2、KCl收缩的主动脉条的舒张量效曲线发生明显变化,EA204的舒张作用被抑制.结论 EA204具有舒张离体兔血管平滑肌的作用,其作用机制与其钙通道阻断作用和钾通道开放作用有关.
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雌酚酮衍生物EA303对家兔离体空肠平滑肌的舒张作用
目的 探讨雌酚酮衍生物EA303对家兔离体空肠平滑肌的作用及其机制.方法 以家兔离体空肠平滑肌条为标本,观察EA303对空肠平滑肌自主活动的影响;通过对比O.1 μmol·L~(-1)普萘洛尔孵育前后EA303对高钾液(KCl)和氯化乙酰胆碱的舒张量效曲线,研究EA303对β受体的作用及对氯化钙累积收缩量效曲线的影响,并与维拉帕米相比较.结果 10~100 μmol·L~(-1)1EA303可以剂量依赖性地降低家兔离体空肠平滑肌自发性收缩的张力和振幅;加入0.1 μmol·L~(-1)普萘洛尔孵育后,EA303对高钾液(KCl)和氯化乙酰胆碱收缩的空肠平滑肌的舒张量效曲线发生明显变化,EA303对KCl引起收缩的舒张作用被抑制,对氯化乙酰胆碱引起收缩的舒张作用被增强.1、3μmol·L~(-1) EA303或0.1 μmol·L~(-1)维拉帕米都使CaCl_2累积收缩量效曲线呈剂量依赖性右移,且大反应降低;EPC303和维拉帕米对氯化乙酰胆碱引起的第Ⅰ时相、第Ⅱ时相的收缩有明显影响.结论 EA303舒张空肠平滑肌作用与口受体有关;EA303 舒张作用与维拉帕米相似,可阻断电压依赖性钙通道和抑制细胞内钙释放.
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新型雌激素哌嗪雌酚酮对雌激素受体表达的影响及其对靶基因的转录激活作用
目的 探讨哌嗪雌酚酮对雌激素受体表达的影响及其对靶基因ERE的转录激活作用.方法 小鼠去卵巢后,每天灌服不同剂量的哌嗪雌酚酮(0.5、1 、2 mg·kg~(-1))以及雌酚酮(0.71 mg·kg~(-1)),连续42 d,采用免疫组织化学的方法观察哌嗪雌酚酮对去卵巢小鼠子宫中两种雌激素受体(Erα和Erβ)蛋白表达的影响;采用Tfx-50脂质体共转染目的 基因和报告基因于MCF-7细胞株,探讨哌嗪雌酚酮对ERE的转录激活作用.结果 与去卵巢模型组比较,哌嗪雌酚酮各剂量组能够上调子宫组织中两种雌激素受体亚型的表达(有剂量依赖性),对Erα亚型作用明显于Erβ;哌嗪雌酚酮能够激活雌激素受体的经典信号途径,与等摩尔剂量的雌酚酮相比仅表现出弱雌激素活性.结论 哌嗪雌酚酮能够上调子宫组织中Ers的表达;与雌酚酮比较,其对靶基因ERE的转录激活作用非常微弱.
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雌酚酮衍生物EA303对家兔离体血管平滑肌的舒张作用
目的 研究雌酚酮衍生物EA303对家兔离体血管平滑肌的作用及其机制.方法 家兔离体主动脉条为标本,观察EA303对去甲肾上腺素(NE)、高钾液(KCl)引起的主动脉条收缩的影响;对氯化钙(CaCl2)累积收缩量效曲线的影响,并与维拉帕米(Ver)累积收缩量效曲线相比较.通过对比钾通道阻断剂格列苯脲孵育前后EA303 对KCl、NE 的舒张量效曲线,研究EA303 对ATP敏感性钾通道的作用.结果EA303(3×10-5~10-3mol·L-1可以剂量依赖性地抑制NE、KCl引起的兔主动脉条的收缩; EA303(10-5mol·L-1)使CaCl2 累积收缩量效曲线呈剂量依赖性右移,这与Ver (10-7mol·L-1)进行孵育的结果十分相似;加入格列苯脲(10-5mol·L-1 )孵育,EA303舒张KCl 、NE 引起收缩的量效曲线发生与未孵育相比变化明显,格列苯脲抑制了EA303对KCl 、NE引起的舒张作用.结论EA303具有舒张家兔离体血管平滑肌的作用,其作用机制与阻断钾通道和以抑制内钙释放的方式阻断钙通道有关.
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雌酚酮衍生物EA303对家兔离体降结肠平滑肌的舒张作用研究
目的 探讨雌酚酮衍生物(EA303)对家兔离体降结肠平滑肌的舒张作用及其机制.方法 以家兔离体降结肠平滑肌为标本,观察EA303对家兔离体降结肠平滑肌的影响及可能的作用机制.结果 EA303(10-5～10-4 mol·L-1)可以剂量依赖性降低家兔离体降结肠平滑肌自发性收缩的张力和振幅;加入格列苯脲(10-5 mol·L-1)孵育后,分别由BaCl2、KCl引起收缩的EA303的舒张量效曲线均发生明显变化,EA303的舒张作用被抑制;EA303(10-6、3×10-6 mol·L-1)或维拉帕米(10-7 mol·L-1)都使CaCl2累积收缩量效曲线呈剂量依赖性右移,大反应降低且对ACh引起的第Ⅰ、第Ⅱ时相的收缩有明显影响.结论 EA303舒张结肠平滑肌作用与ATP-敏感性钾通道开放有关;其舒张作用与维拉帕米相似,可阻断电压依赖性钙通道和抑制细胞内钙释放.
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大黄酸-雌酮对骺板TGF-β1及其受体TβRⅡ蛋白表达的影响
目的 考察新型雌激素衍生物--大黄酸-雌酮对小鼠长骨转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TβR Ⅱ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制.方法 取16 d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10 -6mol/L大黄酸-雌酮、雌酚酮、大黄酸及雌酚酮+大黄酸混合物.采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TβR Ⅱ基因表达产物.结果 与空白对照组相比,雌酚酮组、大黄酸-雌酮和雌酚酮+大黄酸混合组骺板各区TGF-β1和TβR Ⅱ蛋白水平明显上调.大黄酸组仅肥大区TβR Ⅱ上调,其他各区TGF-β1和TβRⅡ蛋白水平均无明显改变.与雌酚酮组相比,大黄酸-雌酮组静止区和增殖区TGF-β1和TβRⅡ的表达均增强.结论 培养基中加人大黄酸-雌酮可上调长骨TGF-β1及其受体的表达,并可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关.
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Ⅰ型胶原在胎鼠骺板的表达及其与雌激素的关系
目的研究胚胎小鼠骺板Ⅰ型胶原的表达情况及雌激素对其表达的影响.方法采用免疫组织化学方法,研究体外培养胚胎小鼠长骨骺板静止区、增殖区和肥大区Ⅰ型胶原蛋白表达情况,同时观察10-7、10-8、10-9 mol/L雌酚酮对其表达水平的影响.结果正常对照组骺板各区均有Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞.当培养基中雌酚酮浓度为10-7 mol/L和10-8 mol/L 时,各区Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积与对照组相比均增加.当浓度降至10-9 mol/L时,则与对照组差异不显著.随浓度升高,静止区和肥大区阳性细胞面积呈逐渐增加趋势.除10-7 mol/L浓度下, 静止区阳性细胞数与对照组相比增加外,各实验浓度下,各区阳性细胞数与对照组相比差异不显著.结论在体外培养条件下,胚胎小鼠骺板静止区、增殖区和肥大区可表达Ⅰ型胶原蛋白,且表达水平可被雌激素上调.
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雌酚酮3-醚衍生物的合成与生理活性初探
目的合成雌激素3-醚化合物以观察雌激素活性.方法以雌酚酮为原料,在3位与碱性侧链相连,合成了4个化合物,其中2个未见文献报道,并进行亲子宫和抗子宫活性测定.结果经初步生理活性测定其雌激素活性明显小于母体化合物.结论雌激素3-接上碱性侧链对生理活性有影响.
