基因重组融合蛋白hNPY对小鼠前脂肪细胞增殖和分化影响的实验研究
摘要: 目的:前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞,如能找到可促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物,并在脂肪组织移植的同时使用,则有希望提高脂肪组织的移植效果,本实验探索一种新的人体肥胖关联基因和外周脂肪细胞激动剂一基因重组融合蛋白hNPY对小鼠3T3 - L1前脂肪细胞增殖和分化的影响及其分子调控机制.方法:采用基因工程技术设计hNPY基因上下游序列,经过PCR反应合成hNPY的cDNA后与pET28a+载体重组,再将已构建好、并经测序确认无误的重组质粒pET28a - NPY转导至大肠杆菌BL21 (DE3),再由IPTG诱导表达hNPY融合蛋白、并进行纯化;然后,将体外培养的小鼠3T3 - L1前脂肪细胞经由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和地塞米松进行联合诱导;诱导2d后,再将此细胞分为三组,即空白对照组(未加任何诱导剂组)、经典诱导组(胰岛素诱导)和实验干预组(hNPY融合蛋白干预),其中,实验干预组再按照hNPY融合蛋白浓度不同又分为高、中、低三个浓度组(10-8mol/L、10-9 mol/L和10- 10mol/L).分别于细胞培养的第7d和第12d用相差显微镜观察各组细胞的形态学变化,再于细胞培养的第12d用油红O染色观察脂肪细胞的分化程度;同时,采用MTT法检测该细胞的增殖状况;采用Western blot法检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ(PPAR -γ)、CAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP -α)蛋白的表达水平.结果:低浓度( 10 -10mol/L)的hNPY融合蛋白,无明显促进小鼠3T3 - L1前脂肪细胞增殖和分化的作用效果;中浓度(10-9 moL/L)的hNPY融合蛋白,可有效促进小鼠3T3 -L1前脂肪细胞增殖及细胞数量增多;而高浓度(10-8 mol/L)的hNPY融合蛋白,不仅能明显促进小鼠3T3 - L1前脂肪细胞的细胞增殖和分化,且能显著提高该细胞C/EBPα和PPARγ的表达水平、而明显降低INSIG -2的表达.结论:高浓度(10-8 mol/L)的基因重组融合蛋白hNPY能够明显促进小鼠3T3 - L1前脂肪细胞的增殖和分化,其促进3T3 -L1细胞增殖和分化的分子调控机制很可能与上调PPAγ、C/EBPα表达和降低INSIG -2表达水平有关,这提示:hNPY作为脂肪细胞膜上受体NPYR的有效促进剂或激动剂,未来很可能成为人体外周脂肪细胞一个新的作用靶点.
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替米沙坦治疗高血压临床研究进展
新型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦具有对血管平滑肌选择性高、组织半衰期长、降压效果好和作用持久等优点.它可逆转左室肥厚,对肾功能不全、充血性心力衰竭、血脂和血糖等均可产生有利影响.
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基质金属蛋白酶MMP-2与肺癌关系的研究进展
基质金属蛋白酶是一大组金属离子依赖的蛋白酶,它能降解细胞外基质中的各种蛋白成分,在恶性肿瘤的侵袭中具有重要作用,而基质金属蛋白酶的家族中,又以基质金属蛋白酶-2在肿瘤侵袭与转移中的作用为突出,本文综述了有关基质金属蛋白酶-2与肺癌的相关研究进展.
关键词: 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶组织抑制因子-2 肺癌 转移 侵袭 -
解偶联蛋白的生物学及其与冠心病的关系研究进展
解偶联蛋白与冠状动脉硬化性心脏病的关系表明,其可能具有冠心病保护作用,解偶联蛋白过表达可能导致胰岛索分泌不足或胰岛β细胞功能不全继而加重2型糖尿病患者病情.解偶联蛋白的综合作用还有待于进一步阐明,其治疗性应用是后续研究的重点.
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左心房功能的评价方法及影响心房功能的相关因素
左心房在整个心动周期中起着血液流动的管道、储存作用,在舒张晚期还有主动收缩功能.因此左心房功能的评价对心功能研究有重要意义.本文就目前已的对左心房功能的评价方法及各种影响因素的文献报道进行了综述.左心室舒张功能、年龄的增加、房颤发生以及左心耳功能改变均与左心房功能相关.
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冠状动脉无复流现象研究进展
冠状动脉无复流现象指的是血管造影无血管机械性阻塞的证据而冠状动脉循环所支配的节段心肌灌注不足的一种现象,与冠状动脉介入术和心肌梗死再灌注治疗密切相关.目前治疗上主要的是冠脉内血管扩张剂和抗血栓剂对症使用,近临床上血栓栓塞的病因研究进展,提供了一个防治的方向即远端保护装置的使用.
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小胶质细胞与阿尔茨海默病
小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞,在致炎因素作用下小胶质细胞被激活成反应性小胶质细胞.反应性小胶质细胞既具有保护神经元的作用,也能分泌细胞毒因子、补体蛋白而损害神经元.目前认为β淀粉样蛋白沉积引起的炎症反应是阿尔茨海默病的病理机制核心.免疫组化显示老年斑中含有急性期反应蛋白、炎性细胞因子、补体蛋白、反应性小胶质细胞等.
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阿尔茨海默病相关基因研究进展
本文归纳了目前认为与阿尔茨海默病密切相关的遗传因素,包括淀粉样蛋白前体、载脂蛋白E、早老素1和2、组织蛋白D、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和白介素1基因,这些基因本身的频率或突变在阿尔茨海默病病因上有重要意义.
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人组织激肽释放酶基因应用于高血压治疗的研究进展
人组织激肽释放酶通过缓激肽B1、B2受体引发机体合成前列腺素、NO和血管舒张因子等增多而引起血压降低,因此组织激肽释放酶及其基因可以应用于高血压治疗.目前应用人组织激肽释放酶基因进行高血压治疗主要从两方面人手:一是应用组织激肽释放酶基因进行高血压基因治疗,存在用药安全及降压效果问题;二是利用组织激肽释放酶基因进行生物工程制药,存在如何量化生产问题.
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神经干细胞及其应用研究进展
近10余年对神经干细胞的研究取得了巨大进展,已经从啮齿类动物和人等哺乳动物的胎脑和成脑的多个部位分离、培养出了神经干细胞,并建立了多个神经干细胞系,为帕金森病等退行性老年疾病、中枢神经系统遗传代谢性疾病、脑脊髓损伤的修复及基因治疗提供了新的途径.本文就神经干细胞及其应用研究进展作简要综述.
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血管性抑郁症的研究近况
"血管性抑郁症"假说已有越来越多的证据支持,以明显的临床症状及其和脑血管疾病的密切联系为特征,目前已成为国外研究热点.本文通过回顾过去5年的医学文献,就血管性抑郁症的概念、发病机理、临床特点及诊断治疗的研究近况作一介绍.