异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究

目的 探索应用异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型,并初步阐明其机制.方法 昆明种小鼠50只,随机分为异烟肼正常剂量造模组(常量组)、2倍剂量造模组(2倍量组)、5倍剂量造模组(5倍量组)、8倍剂量造模组(8倍量组)和空白对照组,每组各10只.各造模组分别以90、180、450、720 mg/kg剂量的异烟肼灌胃,18 h后检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平并取肝组织进行光镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量.另取昆明种小鼠90只,随机分为单纯造模组(40只)、干预造模组(40只)和空白对照组(10只),各造模组以相对合适剂量异烟肼灌胃,其中干预造模组于造模前以甘利欣75 mg/kg体重连续灌胃5 d,18、36、54、72 h后分别检测血清ALT、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)水平,并进行肝组织光镜和电镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制.结果 在探索相对合适剂量实验中,2倍量组小鼠血清ALT、AST分别为(101.6±6.3)和(108.1±14.9)U/L,明显高于空白对照组的(30.1±3.6)、(35.3±6.5)U/L和常量组的(52.8±5.3)、(53.9±8.9)U/L,差异均有统计学意义(均P＜0.05),肝细胞出现广泛的脂肪变性和水肿,肝窦几乎消失;5倍量组小鼠死亡7只,8倍量组小鼠则全部死亡.在探索相对合适时间及发生机制实验中,应用2倍剂量异烟肼灌胃后18 h,单纯造模组小鼠血清ALT、MDA水平明显高于空白对照组,SOD、GSH-Px水平明显低于空白对照组,肝细胞广泛损伤,细胞超微结构显著变化.结论 应用2倍剂量(180 mg/kg)异烟肼灌胃可成功建立小鼠急性肝损伤模型.异烟肼所致急性肝损伤可能与自由基脂质过氧化反应密切相关.

再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞转化生长因子β1及Smad3表达下调的发病学意义

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)中转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad3的表达下调与再生障碍性贫血(再障)发生的可能关系.方法 取20例重型再障患者骨髓MSC,分离制备出Flk1+CD34-MSC后进行以下试验:①体外定向诱导MSC向脂肪细胞分化,倒置显微镜观察成脂分化情况,油红O染色法鉴定脂肪细胞,用实时荧光定量PCR检测分化过程中脂蛋白酯酶(LPL)基因的表达;②用蛋白质印迹法检测MSC中TGF-β1及Smad3的表达,用ELISA检测MSC分泌TGF-β1的能力;③观察不同剂量(0、5、10、15、20 ng/ml)TGF-β1对再障患者骨髓MSC成脂分化和增殖的影响.以7名健康成人的骨髓MSC相应检测为对照.结果 再障患者骨髓MSC经4 d培养后即分化为脂肪细胞,而健康成人骨髓MSC中仅见少量细胞出现脂肪滴.再障患者MSC培养4和8 d时LPL基因表达水平分别为0.091±0.028、0.142±0.033,均高于健康成人骨髓MSC(分别为0.021±0.011及0.049±0.010,均P＜0.01);而TGF-β1及Smad3表达水平明显低于健康成人骨髓MSC,TGF-β1分泌水平(3.4 μg/L±0.9 μg/L)也明显低于健康成人骨髓MSC(11.6 μg/L±1.2 μg/L,P＜0.01).在向脂肪细胞分化过程中,仅加入5 ng/ml的TGF-β1即可明显抑制再障患者骨髓MSC向脂肪细胞定向诱导分化,同时促进其增殖.结论 再障患者骨髓MSC中TGF-β1及Smad3表达水平的显著下调可能参与了再障的部分发病环节.

甘氨酸和Triton X-100对ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达影响的初步研究

目的 考察不同浓度的甘氨酸和Triton X-100对葡萄球菌蛋白质A ZZ亲和肽-增强型绿色荧光蛋白(ZZ-EGFP)融合蛋白在大肠杆菌分泌表达的影响.方法 研究设计为两因素三水平析因设计.向液体培养基中分别加入终浓度0、1%、2%的甘氨酸和0、1%、2%的Triton X-100(共9种组合方式,终浓度均为0者为对照组),诱导大肠杆菌周质腔内ZZ-EGFP融合蛋白泄漏到液体培养基中,以培养上清液荧光强度为观察指标,通过ZZ-EGFP融合蛋白浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中ZZ-EGFP融合蛋白表达量.结果 培养基中分别加入1%、2%甘氨酸或1%、2%TritonX-100培养后,培养上清液荧光强度分别为 283±11、711±19和622±25、733±25,与对照组(74±5)比较,组间差异均有统计学意义(甘氨酸:F=10.881,P=0.024;Triton X-10:F=12.848,P=0.018);而且甘氨酸与TritonX-100两者之间有交互效应(F=5.441,P=0.005),其中培养基中同时含有终浓度2%甘氨酸及1%Triton X-100时培养上清液荧光强度高(1854±45),ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达量达到10.4 mg/L,与对照组(0.94 mg/L)相比提高了11倍.结论 甘氨酸和Triton X-100能提高ZZ-EGFP融合蛋白在液体培养基中的分泌表达量.

抗癌生物活性肽对人乳腺癌nm231细胞的增殖抑制作用

目的 探讨抗癌生物活性肽(ACBP)对人乳腺癌nm231细胞的作用及其机制.方法 nm231细胞经不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.25 μg/ml)ACBP作用72h,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性.以0.25 μg/ml的ACBP分别作用于nm231细胞4、6、24、48、72 h,行光镜和透射电镜(作用48 h细胞)观察.应用DNA凝胶电泳和磷脂结合蛋白V(Annexin V,AV)/碘化丙啶(PI)双标记染色流式细胞术等方法,观察0.25 μg/ml的ACBP作用不同时间对nm231细胞凋亡发生及作用48 h对细胞周期的影响.以上各项检测均设以RPMI 1640培养液取代ACBP的对照组.结果 浓度为0.1 μg/ml的ACBP即对nm231细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率为10.3%,抑制作用具有浓度依赖性,ACBP浓度为0.25 μg/ml时抑制率达35.1%.光镜观察显示,经0.25 μg/ml的ACBP作用24 h,细胞出现凋亡特征;作用48 h,光镜及电镜下均可见大量的典型凋亡细胞.DNA凝胶电泳显示,经0.25μg/ml的ACBP作用24 h的细胞出现DNA断裂;作用48 h的细胞出现典型的梯形电泳图谱.流式细胞术分析显示,ACBP作用后AV(+)/PI(一)细胞和AV(+)/PI(+)细胞比例均随培养时间延长而增大;作用48 h的nm231细胞G0/1期细胞比例高于对照组(P＜0.01),而细胞增殖指数低于对照组(P＜0.01).结论 ACBP可抑制nm231细胞的增殖,其机制与抑制nm231细胞的DNA合成和诱导细胞凋亡相关.

国产和进口培养基发酵培养重组人SOD工程菌的比较研究

目的 以国产培养基替代昂贵进口培养基发酵培养重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)工程菌.方法 利用国产LB培养基对自行构建的含重组质粒pTK-rhSOD的基因工程菌E.coli DH5α通过摇瓶进行发酵培养,以SDS-PAGE分析方法考察不同菌体接种量(1%～5%)、菌体生长密度[波长600 nm处吸光度(A600)值]、诱导时间(1～8 h)、氨苄青霉素(Amp)浓度(终浓度150、200、250 μg/ml)及加入时机(分别于接种前和诱导前加入)、摇瓶装液量(10%～40%)和诱导温度(42、43、44、45℃)对rhSOD表达的影响,优选适培养条件,并与进口LB培养基进行比较.结果 对于国产LB培养基,采用3%～5%接种量,菌体密度生长至A600达0.38～0.63,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至200 μg/ml,于42～44℃诱导3～5 h,rhSOD表达量可达30%;对于进口LB培养基,采用2%接种量,菌体密度生长至A600达0.55～0.93,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至150 μg/ml,于42～43℃诱导2～4 h,rhSOD表达量可达30%.两种培养基摇瓶装液量对rhSOD的表达均没有明显影响.结论 国产LB培养基经条件优化后可获得与进口培养基相同的 蛋白表达量,可以替代昂贵的进口产品,为rhSOD进一步规模化生产降低发酵成本提供了实验依据.

蛇足石杉内生真菌2F09P03B产石杉碱甲发酵条件的研究

目的 研究发酵条件对蛇足石杉支项孢属内生真菌2F09P03B石杉碱甲生成的影响,并探讨发酵条件的优化.方法 通过测定2F09P03B生长曲线、石杉碱甲积累曲线和培养液pH值随时间的变化情况,了解该菌株的培养特性;考察不同碳源和氮源对石杉碱甲积累的影响.在单因素试验的基础上,利用正交试验优化培养基碳源、氮源组成;考察MgSO4、KH2PO4、NaCl、CaSO4对石杉碱甲生成的影响,确定无机盐组成;优化接种量、发酵时间、培养温度、摇床转速等发酵工艺条件.结果 菌株2F09P03B的佳培养基组成为:马铃薯150 g/L,玉米粉30 g/L,麦芽糖25 g/L,酵母膏10 g/L,麸皮30 g/L,KH2PO41.5 g/L,MgSO4 0.5 g/L,NaCl 0.3 g/L,CaSO4 0.3 g/L,pH自然;佳发酵工艺条件为:接种量8%,发酵时间10d,培养温度28℃,摇床转数140 r/min.在此条件下,发酵液中石杉碱甲含量为8.17 μg/L,高达到8.32 μg/L,约为其干重的0.07%左右.结论 发酵条件对菌株2F09P03B石杉碱甲产量有明显影响.优化后的发酵条件可使该菌株石杉碱甲产量明显提高,有望成为石杉碱甲新药源.

自噬及其在肿瘤中的作用研究

自噬(autophagy)是由Ashford和Porter在1962年发现细胞内有"自己吃自己"的现象后提出的,是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体(autophagosome),并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新[1].自噬在机体的生理和病理过程中都能见到,其所起的作用是正面还是负面的尚未完全阐明,对肿瘤的研究尤其如此,值得关注.

制备型高效液相色谱在生物医药制品领域的应用

制备型高效液相色谱(preparative high performance liquid chromatography,Prep-HPLC)是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法.应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法,因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用[1-3].本文就近年来Prep-HPLC方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述.

妊娠期基质金属蛋白酶的调控及其与胎盘发育的关系

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一类蛋白水解酶,可以降解多糖以外的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的多种成分,在组织塑型过程中影响着ECM的代谢、新生血管的形成等过程.在胎盘发育过程中滋养细胞的入侵包括细胞基质的溶解和重塑,其生物学行为与有着高度侵蚀性的肿瘤细胞相似,又被称为假恶性细胞.

聚乙烯亚胺用作基因转染载体的研究进展

基因载体问题以及与载体相关的免疫反应、细胞毒性和安全性等问题,是基因治疗领域亟待解决的关键问题之一.聚乙烯亚胺(PEI)是阳离子聚合物非病毒载体的典型代表[1],是一种很早便为人所知并予以应用的有机大分子.目前,以PEI阳离子聚合物与DNA形成的PEI/DNA复合物已成为非病毒基因载体的研究热点.本文就近年来这方面的研究进展作简要综述.

CpG寡核苷酸链作为新型佐剂的研究进展

1924年Ramon提出免疫佐剂的概念,80多年来,虽然进行了深入的研究,人用疫苗佐剂主要还是铝胶佐剂.直到近几年才上市了几种新型的疫苗佐剂,如MF59(高压条件下将鲨烯与Tween 80 和Span 85混合后进行微流化形成的均一小滴状乳液,应用于美国Chiron公司开发的流感亚单位疫苗),重组霍乱毒素B亚单位(rCTB,应用于瑞典SBL Vaccin AB公司研发的霍乱疫苗Dukoral),AS04(一种含有单磷脂A和皂角苷的油包水乳剂,应用于英国GlaxoSmithKline公司的乙型肝炎疫苗Fendrix)等,但应用范围较小.

Tet基因表达调控系统及其应用

基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要.哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关,如热休克蛋白(Hsp)启动子可在高温下被诱导,还有重金属、糖皮质激素诱导的启动子等,但这些系统均存在着诱导表达不具备特异性、系统处于关闭状态时表达有遗漏以及诱导剂本身具有毒性会对细胞造成损伤等缺陷.如果设置一种导入基因的"开关",能调控基因的表达,则有望大幅度提高基因治疗在临床应用的安全性.1992年,Gossen和Bujard[1]首次成功地利用原核基因调控元件构建了真核细胞基因表达调控系统--四环素基因表达调控系统(Tet系统),该系统能通过在培养基中加入或者去除四环素或其衍生物(如强力霉素)诱导或抑制所感兴趣基因的表达,故被广泛应用于基因表达调控、蛋白质功能和基因功能研究以及基因治疗研究中.本文就近年来Tet系统的研究进展等做一综述.

如何合理选择统计分析方法处理实验资料(Ⅳ)

编者按生物医学期刊是宣传和反映生物医学科研与临床研究成果的重要媒体,是培养年轻科研工作者的摇篮,也是一个国家科研实力的重要象征.期刊中学术论文的质量是期刊存在的重要保证,而学术论文质量高低的重要标志之一是科研设计和统计分析质量的高低.本刊在2007年中,拟邀请军事医学科学院生物医学统计学咨询中心主任、博士生导师胡良平教授,以"如何合理选择统计分析方法处理实验资料"为题,撰写6篇文章,每期发表1篇,较系统地介绍在生物医学论文写作中,如何正确地应用医学统计学知识,从而提高学术论文的质量.需要指出的是,论文中统计学应用正确,并不能说明科研课题做得一定正确.广大作者和读者更应高度重视科研工作之前的科研设计的质量.事实上,由一个错误的科研设计产生出来的实验结果,即使其论文写得再漂亮,统计分析方法用得再正确,对于一个国家科技事业的发展和人才培养都是有害无益的.

自体骨髓衍生干细胞动员:骨坏死干细胞疗法新希望

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞.骨髓衍生干细胞(bone marrow-derived stem cells,BMSC)不仅可以向多种组织细胞分化表现出形成不同细胞的可塑性,还具有广泛的迁移现象,参与各种组织的修复和再生.骨坏死是骨科疑难病症之一,其发病机制尚未明确,目前提出的有骨内高压学说、脂肪栓塞学说、微血管内凝血学说等.

人类基因组研究20年

人类基因组研究肇始于上世纪80年代后期,以1990年人类基因组计划实施为里程碑,迄今已届20载.20年来,人类基因组研究取得了举世瞩目的成就.回顾一下人类基因组研究为实现其主要目标和任务所走过的历程,有助于认识其今后的发展方向和趋势.

中国临床试验注册中心公告

让生命远离名利与平庸——记中国工程院院士王红阳

王红阳,中国工程院院士,第二军医大学国际合作生物信号转导研究中心主任,东方肝胆外科医院综合治疗二科主任,东方肝胆外科研究所常务副所长,上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室副主任,教育部"长江学者奖励计划"特聘教授,国务院学位办学科评审组成员,国家自然科学基金委员会杰出青年基金评审委员,全国政协委员.主持国家自然科学基金重点项目、国家杰出青年基金项目、国家高技术研究发展计划(863计划)课题和上海市重大科研计划等研究.曾以第一完成人获国家自然科学二等奖、军队科技进步一等奖、上海医学科技一等奖和何梁何利科技进步奖等.她的座右铭是:让生命远离名利与平庸.

新药临床试验过程中的项目管理

项目管理作为管理学的一个应用分支,已经越来越受到人们的关注,特别是在建筑、IT、制造等行业已经得到深入广泛的应用.由于项目管理特别适用于投资巨大、关系复杂、时间和资源有限的一次性工作任务,新药研发过程也需要借助项目管理.