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通痹灵、雷公藤多苷及青藤碱对CIA大鼠滑膜细胞凋亡与P53表达的比较研究
目的:研究通痹灵、雷公藤多苷及青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜组织细胞凋亡及P53蛋白表达的影响.方法:原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平,免疫组化法检测各组原代大鼠滑膜细胞P53的表达.结果:通痹灵高低组、雷公藤高低组、青藤碱高低组、MTX高低组滑膜细胞凋亡的数量上明显高于造模组;P53蛋白的表达方面,造模组远远高于各组,与细胞凋亡的结果几乎相反.结论:通痹灵、雷公藤多苷、青藤碱和MTX对RA滑膜细胞有较强的诱导凋亡作用,但并非通过对介导滑膜细胞P53的表达来诱导滑膜组织细胞凋亡.
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通痹灵、雷公藤多甙及青藤碱对实验性关节炎大鼠滑膜组织病理影响的比较研究
目的:研究通痹灵、雷公藤多甙及青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜组织病理的影响.方法:滑膜组织常规脱水、包埋、制片、HE染色,观察炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生及巨噬样A型细胞增生情况.结果:通痹灵组CIA大鼠滑膜组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞明显受抑制.四种细胞病理改变的总积分与造模组比较有非常显著的差异.结论:通痹灵治疗类风湿性关节炎的机理可能与抑制炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞增生有关.
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青藤碱对MsPGN大鼠血脂代谢及TNF-a的影响
目的:探讨SIN对MsPGN的血脂代谢及TNF-a表达的影响.方法:采用改良的慢性血清病性MsPGN模型,检测TC、TG及观察肾组织病理改变情况,检测TNF-a的表达并进行半定量分析.结果:2治疗组血清TC、TG明显降低(P＜0.01).病理学观察,2治疗组肾小球系膜细胞数明显减少(P＜0.01).SIN可下调TNF-a的表达,与模型组相比有显著差异(P＜0.01).结论:SIN能明显改善MsPGN大鼠的高脂血症状态,有效减轻肾脏病理损害,抑制肾小球分泌TNF-a,延缓疾病进展.
关键词： 青藤碱 系膜增生性肾小球肾炎 总胆固醇 甘油三酯 肿瘤坏死因子-a -
青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究
目的:通过青藤碱(Sinomeine,SlN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制.方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达.结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖.
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青藤碱“开玄府-通经络-息内风”防治动脉粥样硬化
王显从“玄府闭塞-气血失常-络风内动”新的视角认识动脉粥样硬化病机,为中医药防治动脉粥样硬化的实验研究与临床研究提供了新思路.青风藤具有祛风湿、通经络、利小便之功,属于风药范畴.笔者所在团队通过体内外实验研究发现,其生物碱提取物青藤碱可通过调节脂质代谢、改善炎性反应及干预免疫反应发挥防治动脉粥样硬化的作用.结合“玄府闭塞-气血失常-络风内动”的病机和青风藤性味功效的认识,青藤碱可能通过“开玄府-通经络-息内风”发挥防治动脉粥样硬化的作用.
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青藤碱微乳的制备及在大鼠体肠吸收的研究
目的 制备青藤碱微乳,并对青藤碱微乳及其普通混悬剂在体肠吸收特性进行对比.方法 以油酸、吐温80、无水乙醇分别为油相、乳化剂和助乳化剂制备青藤碱微乳.利用大鼠在体肠循环模型,采用HPLC法测定青藤碱微乳及其普通混悬剂在体肠吸收回流液中青藤碱的浓度.结果 青藤碱微乳组在大鼠小肠段的吸收明显高于普通青藤碱混悬液组.结论 微乳制剂对青藤碱在大鼠小肠内吸收有明显的促进作用.
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青风藤植物不同部位中青藤碱的含量测定
目的 测定青风藤植物不同部位中青藤碱的含量,为合理有效地开发青风藤中药资源提供依据.方法 采用高效液相色谱法,以Diamonsil-C18(4.6×250mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(50∶50)为流动相,检测波长为262nm,流速:1.0ml/min;进样量10μl条件下测定.结果 青藤碱在0.27μg～13.50μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.46%,RSD值为1.66%;青风藤根中青藤碱的平均含量为1.65%,藤茎皮为1.35%,茎为0.28%,叶为0.11%.结论 不同部位青风藤中青藤碱的含量具有较大差异,其中根中高,藤茎皮次之,茎和叶中较低.
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青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响
目的 观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)mRNA含量的影响.方法 培养人成纤维样滑膜细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,经青藤碱干预后,用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况,用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3 mRNA的表达.结果 经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制(P＜0.05),其中高剂量组的改变差异尤为显著(P＜0.01).MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降(P＜0.05),且高剂量组的差异尤为显著(P＜0.01).结论 青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达,推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理.
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青藤碱对兔膝骨关节炎模型软骨及滑膜血管内皮生长因子和神经生长因子表达的影响
目的：观察青藤碱关节腔注射对兔膝骨关节炎模型软骨及滑膜血管内皮生长因子（VEGF）和神经生长因子（NGF）表达的影响，探讨其相关机制。方法采用木瓜蛋白酶关节腔注射法诱导膝骨关节炎模型。40只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组和青藤碱组，空白组不予任何处理，模型组、透明质酸钠组和青藤碱组分别给予生理盐水、玻璃酸钠注射液和正清风痛宁注射液干预30 d，免疫组化检测兔关节软骨及滑膜 VEGF、NGF 的表达。结果与空白组比较，模型组软骨及滑膜 VEGF、NGF 表达显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，青藤碱组软骨及滑膜 VEGF、NGF 表达显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；青藤碱组软骨及滑膜VEGF、NGF 表达低于透明质酸钠组（P＜0.05，P＜0.01）。结论青藤碱膝关节腔注射可下调 VEGF 和 NGF在膝骨关节炎兔关节软骨及滑膜的表达。
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超高效液相色谱法测定青藤散中青藤碱含量
目的：建立超高效液相色谱法（UPLC）测定青藤散中青藤碱含量的方法。方法采用 UPLC，色谱柱为 ACQUITY UPLC HSS C18（2.1 mm×50 mm，1.8μm），流动相为乙腈-水-乙二胺（50∶50∶0.25），流速为0.2 mL/min，进样量为2μL，于检测波长283 nm 处对青藤碱进行含量测定。结果出峰时间在1 min 左右，青藤碱在34.2～2188.0 ng 范围内线性关系良好。结论本研究所建立的方法简便快速、稳定可靠，可用于青藤散中青藤碱的含量测定。
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利用微透析技术进行青藤碱贴剂的生物等效性研究
目的:研究不同制剂工艺的青藤碱凝胶贴剂的生物等效性,探讨微透析技术在生物等效性研究中的可行性和优越性.方法:以不同工艺制备青藤碱的普通凝胶贴剂和脂质体凝胶贴剂,以裸鼠为实验动物进行经皮给药后,分别采用组织匀浆法及微透析法对青藤碱的体内药量的进行测定.结果:组织匀浆法的测定结果显示出经过20 h以上的时间后,脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的皮肤局部剩余药量;而微透析法的检测结果则显示出在整个测定过程中,脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的皮肤局部瞬间药量,且皮肤局部药时曲线与国际上报道的大多数经皮吸收情况相符.结论:青藤碱的脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的局部生物利用度,且脂质体可能存在贮库效应;微透析技术可用于制剂的生物利用度及生物等效性研究.
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青藤碱微乳的制备及其体外经皮渗透研究
目的:筛选佳处方制备青藤碱微乳,考察青藤碱微乳对离体大鼠皮肤的经皮渗透特征.方法:以油酸-聚山梨酯80-无水乙醇-水作为微乳的组成进行伪三元相图研究,采用改进的Franz扩散池研究青藤碱微乳的透皮行为,筛选佳处方组成,并与青藤碱凝胶作透皮比较.结果:青藤碱微乳的透皮稳态流量大于青藤碱凝胶(P＜0.01),青藤碱微乳平均透皮速率为116.44 μg·cm-2·h-1,透皮吸收符合零级模式(r＞0.99).结论:青藤碱微乳有较强的透皮能力,有望成为青藤碱的新型透皮给药制剂.
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青藤碱对大鼠佐剂性关节炎治疗作用及机制的研究
目的:观察青藤碱对佐剂性关节炎的治疗作用和对继发性炎症区域一氧化氮(NO)及相关炎症介质的影响,进一步探讨其治疗类风湿性关节炎的可能作用机制.方法:用Freund's完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎,设立正常组、模型组、泼尼松组、青藤碱低、中、高剂量组(30,60,120mg·kg-1),记录各组大鼠足跖肿胀度和关节炎指数,检测大鼠关节浸液内NO,前列腺素E2(PGE2)及细胞因子白细胞介素1(IL-1),肿瘤坏死因子(TNF)水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠关节浸液内NO,PGE2及IL-1,TNF水平显著升高(P＜0.05);与模型组相比,青藤碱组大鼠佐剂性关节炎继发病变显著受抑制,佐剂性关节炎大鼠关节浸液内NO,PGE2及细胞因子IL-1,TNF水平显著降低(P＜0.05).结论:青藤碱对类风湿性关节炎的治疗作用与其抑制炎症局部区域细胞因子活性和降低炎症介质含量有关,其中青藤碱使NO水平下降可能是抗类风湿性关节炎的重要作用机制.
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青藤碱抑制H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡
目的:探讨青藤碱对H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:在原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量青藤碱(10,30,100 μmol·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性及NF-KB蛋白表达的影响.结果:H2O2组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.01),并随着时间的延长其凋亡率不断增高;青藤碱明显抑制H2O2所诱导各个时问段的心肌细胞凋亡率(P<0. 01),降低MDA含量,增加SOD,LDH活性,抑制NF-KB蛋白表达.结论:青藤碱对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化、抑制心肌细胞表达NF-KB有关.
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青藤碱对脂多糖诱导的神经细胞环氧化酶-2表达的影响
目的:了解青藤碱(sinomenine,Sin)对PC-12细胞增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)及合成前列腺素E2(PGE2)的影响,探讨Sin对神经细胞的作用机制.方法:采用NGF诱导培养PC-12细胞,用不同浓度的Sin(0,3×10-6,30×10-6,150×10-6mol·L-1)预处理后,加或不加脂多糖(LPS),分别用3H-TdR法、竞争ELISA、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法及Western-blot法,检测PC-12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2的水平、细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平.同时提取各组细胞蛋白,测定其核转录因子NF-κ B活性.结果:Sin对LPS诱导的PC-12细胞的COX-2 mRNA、蛋白表达具有不同程度的抑制作用,与Sin浓度呈明显正相关性,且对LPS激活的PC-12细胞的核转录因子NF-κ B活性有明显的抑制作用.实验未观察到Sin对PC-12细胞增殖的影响.结论:Sin可显著抑制LPS诱导的PC-12细胞COX-2的表达及其产物PGE2的合成,其作用机制可能是通过Sin抑制PC-12细胞核转录因子NF-κ B活性而实现.
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青藤碱抗炎机理--青藤碱对人外周血单个核细胞环氧化酶活性及其基因表达的影响
目的:研究青藤碱对人环氧化酶(COX)活性及其基因表达的影响,深入探讨青藤碱的抗炎药理机制.方法:应用细胞培养,放射免疫测定,RT-PCR 等方法,观察青藤碱等药物对LPS 刺激和非LPS 刺激的体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC)产生前列腺素E2C PGE2C 的影响,并深入研究其对COX-1 和COX-2 基因表达的作用.结果:青藤碱对LPS 刺激状态下正常人外周血单个核细胞PGE2 合成的抑制作用明显高于不加LPS 的状态,间接反映青藤碱对COX-2 的抑制作用较强.RT-PCR 结果表明青藤碱对人COX-1 及COX-2 的基因表达无明显影响.结论:青藤碱对COX-2 活性具有一定的选择性抑制作用,并可能主要是通过对COX 酶活性的直接作用来实现.
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青藤碱在Beagle犬体内的药动学和绝对生物利用度研究
目的:研究青藤碱在Beagle犬体内药动学和口服绝对生物利用度.方法:采用双周期自身交叉设计,在10只Beagle犬中研究单次口服或静脉注射青藤碱10 mg·kg~(-1)的药动学参数和绝对生物利用度,用高效液相色谱法测定血药浓度,利用3p97软件计算药动学参数.结果:口服青藤碱后犬体内药-时曲线呈一室模型,主要药动学参数T_(max)(82.5±13.9)min,C_(max)(0.15±0.027)mg·L~(-1),t_(1/2)(87.6±28_3)min,AUC_(O～T)(28.43±3.48)m·min·L~(-1),静注青藤碱后犬体内药.时曲线呈二室模型,主要药动学参数t_(1/2β)(106.7±120.2)min,Auc_(O～T)(93.32±82.08)mg·min·L~(-1),青藤碱的口服绝对生物利用度为(30.46±4.24)%.结论:青藤碱口服绝对生物利用度较低,且在犬体内消除较快.
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青藤碱对SSNI模型大鼠镇痛效应和纹状体细胞外液单胺类递质的影响
目的:观察青藤碱对部分坐骨神经损伤(SSNI)诱导的神经病理性疼痛大鼠模型镇痛效应,并探讨其对纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法:雄性SD大鼠,随机分为假手术组、SSNI模型组、加巴喷丁组(100mg·kg-1)、青藤碱高、低剂量组(40,20mg·kg-1),采用Von Frey hairs和Cold Spray法评价机械痛敏和冷痛敏的程度.纹状体微透析采样,高效液相色谱-电化学法检测细胞外液中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)等神经递质及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量.结果:SSNI模型大鼠的机械痛阈、冷痛敏显著改变,脑内NE显著降低,DA,5-HT及其代谢产物明显升高.与模型组相比,青藤碱高剂量组在腹腔给药30～120min时机械痛阈显著提高(P＜0.01),在30～240min冷痛敏分值明显降低(P＜0.05)；在45～135 min内明显上调纹状体细胞外液NE含量(P＜0.05),45,75,135 min明显降低DA的含量(P＜0.05),45～135 min显著减少5-HT的含量(P＜0.01),并在45～135m in显著降低DOPAC(P＜0.01),45～75 min明显降低5-HIAA的含量(P＜0.05).结论:青藤碱对SSNI模型大鼠神经源性疼痛有干预作用,其机制可能与调节纹状体细胞外液单胺类神经递质紊乱相关.
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高效液相色谱法测定痹克冲剂中青藤碱的含量
痹克冲剂由青风藤、白蔹、九节茶、追风伞、排风藤、丹参、知母7味药组成,具有清热解毒、除湿消肿、活血止痛的功能,用于痹病(类风湿性关节炎)的湿热阻络证,瘀血阻络证表现的肌肉、关节肿痛.已被<贵州省药品标准>所收载[1],方中青风藤为君药,其有效成分为青藤碱,标准中该制剂项下仅有TLC鉴别,无含量测定项.本文用HPLC法测定痹克冲剂中青藤碱的含量,该法快捷、灵敏、准确.
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青藤碱研究新进展
查阅近10年来有关青藤碱的国内外文献资料,选取具有较大应用价值及学术意义的内容,从青藤碱的提取工艺、含量测定、药物化学研究、药理、毒理、药动学、临床应用等方面分别介绍,拟对青藤碱有进一步的认识.青藤碱是一种抗炎止痛效果好、副作用小的非甾体抗炎止痛药,并以期成为一种良好的戒毒药.
