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青藤碱在小鼠心脏移植中的抗排斥作用
目的:探讨青藤碱在小鼠心脏移植中的抗排斥作用及其可能机制.方法:在小鼠心脏移植模型中,观察异系移植组、CsA治疗组、青藤碱治疗组移植心脏存活时间、术后7 d移植物排斥反应病理分级以及IL-2mRNA表达水平.结果:青藤碱治疗组移植心脏存活时间为(17.67±0.82)d,与异系对照组(11.00±2.10)d相比明显延长(P＜0.01);病理结果显示,排斥反应减轻,呈轻-中度变化;移植心脏中IL-2mRNA表达水平明显减低(P＜0.01).结论:青藤碱在小鼠心脏移植中具有抗排斥作用,作用机制可能为抑制IL-2等促排斥细胞因子表达.
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青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素-1β及白细胞介素-17和骨生长分化因子2的影响
目的 观察青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素 -1β(IL -1β)、IL-17和骨生长分化因子2 (GDF2)的影响,探讨其作用机制.方法 先将36只雌性家兔去卵巢建立骨质疏松模型,4周后再采用剪断 L1 -5椎体前缘的方法建立骨质疏松性压缩骨折模型,成模后分为模型组、青藤碱A组和青藤碱B组.青藤碱A组和青藤碱B组分别用10%青藤碱按2 mL/(kg·d)和4 mL/(kg·d)剂量灌胃,模型组灌等体积生理盐水,均1次/d,连续灌胃1个月.于灌胃10,20,30 d拍摄骨痂 X射线片对骨痂生长情况进行评分;灌胃前后采用双抗体夹心法检测耳缘静脉血 IL -1β、IL -17水平;灌胃结束后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测骨折处骨痂组织中 GDF2表达水平,采用 RT -PCR法检测骨折处骨痂组织中 GDF2 mRNA表达水平.结果 灌胃20,30 d后,青藤碱 A组和青藤碱 B组骨痂生长良好,断层边缘逐渐模糊或消失,骨密度增大,综合评分均明显高于同期模型组(P均 ＜0.05),青藤碱 A组和青藤碱 B组比较差异均无统计学意义(P均 ＞0.05).灌胃结束后,青藤碱 A组和青藤碱 B组血清 IL-1β、IL-17水平均明显低于模型组(P均 ＜0.05),GDF2、GDF2 mRNA表达水平均明显高于模型组(P均 ＜0.05),青藤碱 A组和青藤碱 B组比较差异均无统计学意义(P均 ＞0.05).结论 青藤碱可通过抑制IL-1β、IL-17介导的炎性反应,提高GDF2诱导成骨分化和骨形成能力,从而促进骨痂生长而加速骨折愈合.
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青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者IL-1,IL-17和TNF-α表达的影响
目的 研究青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎(RA)患者体内IL-1,IL-17和TNF-α表达的影响.方法 RA患者60例随机分为2组:对照组30例给予甲氨蝶呤治疗,治疗组30例给予甲氨蝶呤联合青藤碱治疗,观察2组治疗前后的体征和相关临床指标(如DAS28、ESR、RF、CRP)变化;采用qRT-PCR法检测治疗前后IL-1,IL-17和TNF-αmRNA的表达情况.结果 治疗后2组患者的体征、相关临床指标均有明显改善,治疗后治疗组外周血淋巴细胞中IL-1,IL-17和TNF-α mRNA的表达水平较治疗前及对照组更低.结论 青藤碱联合甲氨蝶呤治疗可通过调节外周血淋巴细胞的免疫功能而对RA患者起到显著治疗效果.
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从自然药物中提取免疫抑制剂的研究进展
免疫抑制剂在器官移植排斥反应的预防和治疗中起到了关键作用,免疫抑制剂的每一个新的进展都推动了临床器官移植的发展,但新型的化学免疫抑制剂其昂贵的价格限制了在临床上的应用,在一定程度上阻碍着我国器官移植事业的发展.故从自然药物中寻找提取廉价有效的免疫抑制剂成为移植学界和制药界的热点.近年来国内外在此方面进行了大量的研究并有了一定进展,现将有关研究综述如下.
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原花青素对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2表达和神经元凋亡的影响
目的 探讨原花青素(PC)对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2表达和神经元凋亡的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组,予相应药物灌胃1周,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.各组于缺血90 min再灌注24 h进行HE染色观察病理形态学变化,进行神经症状评分,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组化法观察大鼠额顶部皮质Bcl-2蛋白表达.结果 ①PC高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,PC高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.②PC高、低剂量治疗组神经功能缺损评分较缺血再灌注组降低(P<0.05).③与假手术组比较,缺血再灌注组凋亡细胞明显增加,Bcl-2表达增加.与缺血再灌注组比较,PC高、低剂量治疗组均显著减少凋亡细胞,Bcl-2表达增加;高、低剂量组间比较亦具有显著性差异(P<0.05).结论 PC对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用,其机制可能是通过增加Bcl-2表达,抗神经元凋亡.
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青藤碱对大鼠肾移植排斥反应时细胞间黏附分子-1表达的抑制作用
目的研究青藤碱(SIN)的免疫抑制作用及其与环孢菌素A(CsA)的协同效应, 并探讨SIN免疫抑制作用的机制.方法建立48个大鼠同种原位肾移植急性排斥反应模型(WistarSD), 将其分为对照组、 SIN组、 CsA组、 S+C组, 每组12例, 每组随机抽取6例观察大鼠移植肾受者存活时间, 另6例于术后第6天处死, 取移植肾组织标本行病理观察及免疫组织化学方法检测ICAM-1表达并进行量化统计.分析SIN协同CsA对大鼠肾移植受者存活时间及对急性排斥反应时的肾组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平的影响.结果对照组受体大鼠均在术后9 d内死亡, 生存(7.83±0.75)d, SIN组为(9.67±0.52)d, S+C组为(25.00±4.65)d; 移植肾组织ICAM-1表达平均阳性面积单位在对照组为(37.63±4.47)%, SIN组为(23.48±2.88)%(P＜0.01), CsA组为(25.59±2.44)%(P＜0.01), S+C组为(38±2.35)%(P＜0.05).结论 SIN可能通过下调ICAM-1表达的机制对大鼠肾移植的急性排斥反应起到一定的抑制作用, 并与CsA产生显著的协同作用, 可减少CsA的用量, 从而减轻其对移植肾的毒副作用.
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青藤碱对类风湿关节炎患者滑膜细胞周期的影响
目的 探讨中药青藤碱(SN)治疗类风温关节炎(RA)的相关机制,研究SN诱导滑膜细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 姬姆萨染色光学显微镜下观察滑膜细胞凋亡形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期的表达.结果 光镜下可见细胞变圆、细胞质红染、核固缩等典型凋亡形态学变化.流式细胞仪结果 显示,SN诱导滑膜细胞凋亡并主要作用于细胞周期G1-S期.结论 SN可能通过诱导细胞凋亡而抑制滑膜细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来治疗类风温关节炎方案的合理设计.
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HPLC法测定风痛定胶囊中青藤碱的含量
目的 建立风痛定胶囊中青藤碱含量HPLC测定方法.方法 色谱柱为CenturySIL 5 μm C18-BDS分析(4.6mm×250mm,5 μm)柱,流动相为甲醇:[(乙二胺:水)(1:300)](62:38),流速为0.5mL/min,检测波长为262nm.结果 青藤碱在1.06～10.6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率93.38%,RSD为1.94%(n=5).结论 此方法准确可靠,简单易行,可用于该制剂的质量控制.
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青藤碱对神经病理性痛大鼠脊髓背角神经元凋亡的影响
目的 评价青藤碱对神经病理性痛大鼠脊髓背角神经元凋亡的影响.方法 健康成年雄性Wistrar大鼠108只,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和青藤碱组(SIN组).NP组和SIN组采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备神经病理性痛模型,S组仅分离坐骨神经但不结扎.SIN组于术毕即刻开始至处死前1d,腹腔注射盐酸青藤碱注射液40 mg/kg,1次/d,S组和NP组腹腔注射等容量生理盐水.每组随机取12只大鼠于术前1d、术后3、7和14 d(T0-3)时测定机械痛阈和热痛阈,于T1-3时测定痛阈后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用实时荧光定量PCR法检测脊髓背角caspase-3 mRNA和p38MAPK mRNA的表达,采用TUNEL法检测脊髓背角凋亡细胞,计算细胞凋亡率.结果 与S组比较,NP组和SIN组热痛阈和机械痛阈降低,脊髓背角caspase-3 mRNA和p38MAPK mRNA表达上调,细胞凋亡率升高(P＜0.05);与NP组比较,SIN组热痛阈和机械痛阈升高,脊髓背角caspase-3 mRNA和p38MAPK mRNA表达下调,细胞凋亡率降低(P＜0.05);与T1时比较,NP组和SIN组T2.3时热痛阈和机械痛阈降低,脊髓背角caspase-3 mRNA和p38MAPK mRNA表达上调,细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 青藤碱减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制p38MAPK信号传导通路,从而减少脊髓背角神经元凋亡有关.
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青藤碱对神经病理性痛大鼠脊髓背角P2X3R mRNA及COX-2 mRNA表达的影响
目的 评价青藤碱对神经病理性痛大鼠脊髓背角P2X3受体(P2X3R) mRNA及环氧化酶-2(COX-2) mRNA表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠54只,6～8周龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=18):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和青藤碱组(SIN组).采用慢性坐骨神经压迫损伤法建立神经病理性痛模型.SIN组于术毕即刻腹腔注射盐酸青藤碱注射液40 mg/kg,S组和NP组注射等容量生理盐水,1次/d,连续注射14 d.于术前1d、术后3、7和14 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足反应潜伏期(TWL),测定痛阈后处死,取L4-6节段脊髓,采用RT-PCR法检测脊髓背角P2X3R mRNA及COX-2 mRNA的表达.结果 与S组比较,NP组和SIN组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角P2X3R mRNA及COX-2 mRNA表达上调(P＜0.05);与NP组比较,SIN组MWT升高,TWL延长,脊髓背角P2X3R mRNA及COX-2 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 青藤碱减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与抑制脊髓背角P2X3R mRNA及COX-2 mRNA表达有关.
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薄层扫描法测定北豆根中青藤碱的含量
目的:建立薄层扫描测定北豆根中青藤碱含量的方法.方法:采用双波长薄层色谱扫描法,扫描方式为反射式锯齿扫描,以苯-乙酸乙酯-二乙氨(7:3:1)为展开剂,测定波长λS=275nm,参比波长λR=320nm.结果:北豆根中青藤碱含量在1.06-5.30μg范围内线性关系良好,r=0.9993;平均回收率为98.8%,RSD=2.7%.结论:本研究建立的薄层扫描测定北豆根中青藤碱含量的方法简便、快捷,结果准确可靠,重现性好,可用于北豆根中青藤碱的含量测定方法.
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青藤碱新剂型研究进展
青藤碱是从中药清风藤中提取的生物碱单体,药用多为其盐酸盐.青藤碱具有抗炎、免疫抑制、镇痛、降压、抗心律失常等药理作用,已有正青风痛宁片、盐酸青藤碱注射液、毛青藤总碱片等制剂应用于临床.本文利用国内有关文献,对青藤碱新剂型的研制、释药特性等作一概述.
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中药透皮特性研究的思路与方法
传统的外治方法和药物剂型历史悠久、品种繁多.近年来,随着制药技术的进步和药用新辅料特别是高分子药用材料的应用,研制开发出了涂膜剂、膜剂、巴布剂、喷雾剂、贴膏、贴片等经皮给药新剂型;并根据现代经皮给药系统(Transdermal Delivery System,TDS)研究要求,开始对中药经皮给药透皮特性、影响因素和吸收机理等进行了研究,以揭示中医经皮给药这一古老给药方式的客观、科学的内涵,赋予其新的生命力,拓展中医外治法的发展空间.本文拟通过作者对部分中药透皮特性实验研究结果的分析,探讨研究思路与方法如下.
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青藤碱对肿瘤坏死因子-α诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达影响初步研究
目的 进一步研究青藤碱(SIN)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管细胞黏附分子(VCAM)-1表达的影响.方法 从新鲜脐带中分离培养HUVECs.用TNF-α诱导HUVECs表达VCAM-1,实验组加入不同浓度的SIN(0.25、0.0和1.0 mol/L)或地塞米松(1.0×106mol/L)分别进行或联合进行干预,用流式细胞仪检测细胞表面VCAM-1表达.结果 与TNF-α刺激组相比,SIN干预组细胞表面VCAM-1表达下降,抑制作用以1.0 mol/L为显著.联合地塞米松(1.0x106 mol/L)进行干预,可加强SIN对TNF-α诱导的VCAM-1表达的抑制作用.结论 SIN可抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达.青藤碱与地塞米松对TNF-α诱导的VCAM-1表达的抑制有协同作用.
关键词： 青藤碱 血管细胞黏附分子-1 人脐静脉内皮细胞 -
青藤碱对胶原诱导型关节大鼠滑膜细胞增殖及凋亡影响的研究
目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径.方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组、甲氨蝶呤(MTX)治疗组和青藤碱(SINO)治疗组,采用容积法和计分法分别评价后肢肿胀度和四肢关节炎症程度;左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生和纤维组织增生的情况;对足肿胀和病理各项指标进行回归性分析.碱性磷酸酶标记法检测大鼠滑膜细胞凋亡;免疫组织化学法检测突变型p53的表达.比较MTX和SINO灌胃治疗后各项指标的差异.结果 CIA大鼠造模后,炎症迅速发展,1周内即可达到肿胀高峰,然后逐渐消退,在第21～25天后又出现第2个炎症高峰.药物治疗17d后抑制CIA肢炎症的作用逐渐显现出来.MTX和SINO都可明显抑制第2个炎症高峰,后肢肿胀度和四肢肿胀积分在35d与造模加生理盐水组差异有统计学意义(P＜0.01);病理结果中,CIA大鼠关节表现为单个核炎症细胞浸润(包括中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润),滑膜细胞增生、纤维组织增生;足肿与淋巴细胞浸润,滑膜增生呈直线回归关系,其中以滑膜增生为主(P＜0.01).MTX和SINO都可明显抑制CIA滑膜细胞增殖(P＜0.05),SINO还可抑制浆细胞的浸润.造模后CIA大鼠关节滑膜细胞凋亡增加,突变型p53表达增多,MTX和SINO治疗组滑膜细胞凋亡数与CIA组比较明显增加,同时突变型p53的表达被显著抑制(P＜0.05).结论 SINO可通过下调突变型p53来抑制滑膜细胞增生和诱导细胞凋亡,终减轻CIA大鼠的关节炎症,本研究为青藤碱抗RA提供了实验依据.
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青藤碱对肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响
目的:探讨青藤碱干预炎症介质诱导的肾小管上皮细胞转分化及其相关基因的表达作用.方法:IL-1β(10 ng/ml)诱导体外培养的小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),同时用青藤碱(10 μmol/L、100μmol/L、500μmol/L和1000μmol/L)进行干预.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)和纤连蛋白(Fn)的基因表达.结果:结果:IL-1β能够显著诱导肾小管上皮细胞α-SMA的基因表达上调,同时伴随着TGF β和Fn的基因表达显著上调;而青藤碱各个浓度均具有显著抑制肾小管上皮细胞转分化作用,TGF-β和Fn的基因表达也随之下调.结论:青藤碱可显著抑制IL-1β刺激下的肾小管上皮细胞转分化标志物和细胞外基质的基因表达,其机制可能与部分下调TGF-β的表达有关.
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青藤碱对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎症因子表达的干预作用
目的:通过抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、炎症介质细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)表达的影响,探讨其防治肾间质纤维化作用及其机制.方法:实验采用小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素受体抑制剂蒙诺作为对照.肾脏病理用HE和Masson染色;肾组织α-SMA表达采用免疫组化;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.结果:UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及肾组织α-SMA的表达较假手术组显著增高,肾小管间质中炎细胞浸润亦较假手术组显著增强;青藤碱各治疗组肾间质纤维化程度、α-SMA和ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达均显著低于模型组;蒙诺治疗亦可显著降低肾间质纤维化程度和肾组织α-SMA的表达,但对于炎细胞浸润和炎症因子抑制作用显著较青藤碱弱.而且未见其具有抑制ICAM-1表达的作用.结论:抗风湿药青藤碱可显著抑制肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚,可能与其显著抑制肾组织炎症因子的表达及炎细胞浸润有关.
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高效液相色谱法测定豹骨活络丸中药材青风藤中青藤碱的含量
豹骨活络丸由木瓜、当归、白芷、青风藤等12味药材组成,具有舒筋活络、散风祛湿止痛的作用.用于腰膝疼痛,筋骨无力,步行艰难,手足麻木.该成药原属地方标准,无含量测定指标,因此不能有效地控制该产品的质量.该成药中青风藤主要含多种生物碱,如青藤碱、异青藤碱、青风藤碱等.参照中国药典2005年版一部中药材青风藤质量控制的标准,我们对该产品中的药材青风藤中青藤碱进行了含量测定的方法学研究,以便为该产品提供更加严格的质控标准.
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风湿宁胶囊的质量控制研究
目的:建立风湿宁胶囊的鉴别方法及含量测定方法.方法:鉴别采用薄层色谱法,含量测定采用高效液相色谱法.结果:独活、青风藤、血竭与肉桂的薄层鉴别图谱中,斑点清晰,阴性无干扰;血竭及青风藤的HPLC测定方法,血竭素线性范围0.116μg~0.581μg,Y=3×106X-13854(r=0.9996),平均回收率为100.86%,RSD为2.14%(n=6);青藤碱线性范围0.2μg~1.6μg,Y=18.13X-0.0055(r=0.9991),平均回收率为100.96%,RSD为2.34%(n=6).结论:鉴别及含量测定方法专属性强,重复性好,准确度高,可用于风湿宁胶囊的质量控制.
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青藤碱对佐剂性关节炎大鼠Toll 样受体2 mRNA 及 MyD88 mRNA 表达的影响
目的：探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠Toll样受体（TLR）2mRNA及MyD88mRNA表达的影响。方法清洁级SD大鼠40只，随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型，正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9％氯化钠注射液。各组分别干预4周后，取膝关节滑膜，采用实时聚合酶链反应（PCR）法检测TLR2mRNA，MyD88mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肿瘤坏死因子（TNF）-α。结果模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR2mRNA，MyD88mRNA表达及TNF-α均较正常对照组明显升高，差异有统计学意义（均为P＜0．01）。经青藤碱治疗后，TLR2mRNA，MyD88mRNA表达及TNF-α均较模型组明显下降，差异有统计学意义（均为P＜0．01）。结论青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症，该作用可能与抑制TLR2通路有关。
