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青藤碱对红斑狼疮患者外周血T细胞的抑制作用及机制探讨
目的:观察青藤碱(SIN)对系统性红斑狼疮患者T细胞功能的影响,探讨其免疫抑制作用机理.方法:分离SLE患者的PBMCs,加入anti-CD3及不同浓度SIN,以ELISA和流式细胞仪方法分析青藤碱对T淋巴细胞活化和Th1/Th2细胞因子产生的影响.结果:SIN可抑制SLE患者外周血T细胞产生IFN-γ、IL-2和IL-4.SIN能够显著降低CD4+T和CD8+T细胞表面活化分子CD69和CD25的表达.结论:SIN可通过抑制T细胞的活化及细胞因子的分泌,发挥免疫抑制作用.
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青藤碱对人外周血单个核细胞IL-1β和IL-8细胞因子-基因表达的影响
目的:从细胞因子基因调控研究青藤碱抗炎抗风湿的作用机理.方法:分离正常人外周血单个核细胞体外加药培养,提取各组细胞总RNA,采用一步法、二步法RT-PCR技术,检测药物对LPS刺激状态下该细胞IL-Iβ、IL-8mRNA表达的影响.结果:一步法RT-PCR结果表明1 mmol/L青藤碱作用6 h,对IL-1βmRNA表达抑制率分别约为(15.70±5.52)%.二步法RT-PCR结果表明,1 mmol/L、100μmol/L的青藤碱对IL-1βmRNA表达抑制率分别约为(17.07±7.69)%、(25.99±12.84)%,对IL-8mRNA表达的抑制作用分别为(2.01±7.79)%、(16.04±7.55)%.结论:青藤碱能通过下词人外周血单个核细胞IL-1β、IL-8m-RNA表达发挥对类风湿性关节炎的治疗作用.
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青藤碱对T淋巴细胞活化及TH1类细胞内细胞因子表达的影响
目的:深入研究青藤碱对T淋巴细胞Th1类细胞因子表达的影响.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的青藤碱作用1小时后,加多克隆刺激剂PDB和离子霉素,继续培养4小时后收获细胞,进行细胞内细胞因子染色,以流式细胞术对T细胞Th1类细胞因子TNF-γ、炎症性细胞因子TNF-α分子表达情况进行分析;同时,观察药物对T细胞活化早期标志CD69表达的影响;结果:1 000 μmol/L(329.24 μg/ml)青藤碱能够抑制CD69表达,200 μmol/L青藤碱对CD69表达无影响;200、1 000、2 000 μmol/L青藤碱能够剂量依赖性地显著降低T细胞内细胞因子TNF-γ、TNF-α分子表达.结论:抑制T细胞活化异常可能是青藤碱治疗类风湿关节炎免疫药理机制之一,此抑制效应可能主要不是通过影响PKC而是与影响钙离子依赖的T细胞活化信号传导途径相关.
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青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 MyD88、TRAF－6表达的影响
目的：探讨青藤碱（Sinomenine，SIN）对TLR信号转导通路及髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88，MyD88）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（ Tumor necrosis factor receptor associated factor－6，TRAF－6）表达的影响，阐明SIN抑制类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis，RA）成纤维样滑膜细胞（ Fibroblast－like synoviocytes，FLS）增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法：体外培养RA－FLS细胞，分为对照组与（0．125、0．25、0．5、1 mmol／L） SIN组，通过检测各组细胞内碱性磷酸酶（ ALP）活性，确定体外用药佳药物浓度；CCK－8法检测0．5 mmol／L SIN组的细胞增殖率；荧光定量PCR法测定对照组与0．5 mmol／L SIN组MyD88和TRAF－6基因表达；Western blot法检测对照组与0．5 mmol／L SIN组MyD88和TRAF－6蛋白表达。结果：SIN各组ALP活性均低于对照组，其中以0．5 mmol／L SIN组的ALP活性为低（P＜0．01）。 CCK－8法检测，0．5 mmol／L SIN组RA－FLS细胞增殖率明显低于对照组（ P＜0．01），SIN诱导第4天细胞增殖率高，进入平台期，之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR和Western blot法检测，0．5 mmol／L SIN组的MyD88和TRAF－6基因及蛋白表达明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA－FLS细胞内MyD88和TRAF－6的表达，这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。
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青藤碱通过抑制缺血诱导的异常自噬缓解MCAO模型大鼠脑损伤
目的:探究青藤碱(SM)对脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠脑缺血损伤的作用及机制.方法:线栓法复制大鼠MCAO模型,TTC染色检测脑梗死面积,免疫组化和Western blot检测增殖、凋亡及自噬标记蛋白的表达,ELISA检测脂质过氧化物及炎症因子的含量.结果:SM能显著减少MCAO大鼠脑梗死面积;免疫组化及Western blot结果显示,SM能明显促进MCAO大鼠增殖标记蛋白Ki67及凋亡标记蛋白Bcl-2的表达,降低Caspase-3和Bax表达水平.同时,SM还能明显降低MCAO大鼠血清脂质过氧化物(LDH、MDA)及炎症因子(NO、IL-6)的含量.此外,SM可明显抑制MCAO大鼠自噬标记蛋白Beclin1表达,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,促进p62的表达.SM处理后还能显著抑制mTOR/Ulk1通路蛋白Ulk1表达,升高mTOR表达水平.结论:SM可通过mTOR/Ulk1通路抑制缺血诱导的异常自噬,从而缓解MCAO大鼠脑缺血损伤.
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青藤碱对肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡的影响
目的 研究青藤碱(SIN )对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制,为SIN预防和治疗肺癌提供实验依据.方法 SIN高(1.0 mmol/L)、中(0.5 mmol/L)、低(0.25 mmol/L)剂量组及空白对照组分别处理体外培养的人肺癌细胞系A549细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测处理24、48、72 h后A549细胞的增殖活性;采用流式细胞仪测定各剂量组SIN作用48 h后细胞周期;采用流式细胞术和TUNNEL方法检测细胞凋亡.结果 高、中、低剂量组SIN处理A549细胞48、72 h后,细胞增殖明显受到抑制,且呈时间、剂量依赖性.SIN处理组G_1期细胞比例明显增加,与空白对照组比较有统计学意义.SIN处理组细胞凋亡率也较对照组升高,呈剂量依赖性.TUNNEL法可见凋亡细胞的阳性反应.结论 SIN在体外能有效抑制肺癌细胞生长,其机制与其阻滞细胞周期于G_1期、诱导细胞凋亡有关.
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青藤碱对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和caspase-3表达的影响
目的 探讨青藤碱(Sin)对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2及caspase -3蛋白表达的影响.方法 采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链佐菌霉素建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组.线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.Sin低(30 mg/kg)、高剂量(60 mg/kg)治疗组于术前30 min分别给予大鼠腹腔注射.用免疫组化法观察缺血90 min再灌注24 h大鼠额顶部皮质Bcl-2和caspase-3蛋白表达,并进行TTC染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化.结果 ①糖尿病大鼠脑缺血再灌注24 h,缺血再灌注组Bcl-2和caspase-3表达与假手术组比较增加(均P<0.05);与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组Bcl-2表达均显著增加,caspase-3表达减少,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).②Sin治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).③Sin高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,Sin高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.结论 Sin对糖尿病大鼠缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白表达有关.
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青藤碱关节腔注射对兔膝骨关节炎模型血清及滑液内脂素及抵抗素的影响
目的：观察青藤碱关节腔注射对兔膝骨关节炎模型血清及滑液中脂肪因子内脂素及抵抗素含量的影响。方法38只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组和青藤碱组。正常组不予任何处理，模型组、透明质酸钠组和青藤碱组通过木瓜蛋白酶关节腔注射法诱导膝骨关节炎模型后，分别用生理盐水、透明质酸钠和青藤碱干预，5 w后检测并比较各组血清及滑液中内脂素及抵抗素含量。结果各组间血清内脂素含量均无明显差异（P＞0.05）；模型组滑液内脂素含量较其他各组明显升高（P＜0.05），青藤碱组较透明质酸钠组低（P＜0.05）。模型组血清及滑液中抵抗素含量较其他各组均显著升高（P＜0.05），青藤碱组血清及滑液中抵抗素含量与透明质酸钠组比较无显著差异（P＜0.05）。结论青藤碱膝关节腔注射可降低兔膝骨关节炎模型滑液内脂素水平及血清、滑液中抵抗素水平。
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青藤碱对偏头痛模型大鼠血浆CGRP、SP含量及脑干5-HT表达的影响
目的 观察青藤碱对偏头痛模型大鼠血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)含量及脑干5-羟色胺(5-HT)表达的影响,探讨青藤碱治疗偏头痛的作用机制,为开发治疗偏头痛新药提供实验依据.方法 60只Wistar大鼠(雌雄各半)随机分为:空白对照组、模型组、舒马普坦组、青藤碱低、中、高剂量治疗组,建立硝酸甘油的动物模型.以舒马普坦为阳性对照组,用放免法测定大鼠血浆CGRP、SP含量；免疫组化SBAC法检测脑干5-HT阳性表达.同时观察大鼠的行为学变化.结果 (1)各组大鼠血浆CGRP、SP含量差异无统计学意义(P＞0.05)；(2)青藤碱各组和舒马普坦组脑干5-HT表达明显增多,与模型组和空白组相比较差异有统计学意义P＜0.01),而青藤碱中剂量组脑干5-HT表达和舒马普坦组相比较差异无统计学意义P＞0.05).(3)大鼠行为学观察显示,药物干预组对偏头痛模型大鼠行为症状随时间延长而逐渐消失.结论 (1)青藤碱对偏头痛模型大鼠具有镇痛作用,其机制可能是通过偏头痛发作时调节脑干5-HT能系统的活性,起到镇痛作用.(2)青藤碱对偏头痛模型大鼠行为症状学有改善作用.
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青藤碱对偏头痛模型大鼠脑干c-fos、c-jun表达的影响
目的 观察青藤碱对偏头痛模型大鼠脑于c-fos、c-jun表达的影响,了解青藤碱有无治疗偏头痛的作用.方法 60只健康Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、舒马普坦对照组和青藤碱低、中、高剂量治疗组.皮下注射硝酸甘油(NTG)复制实验性偏头痛动物模型,药物干预4h后断头取脑.免疫组化法检测脑干c-fos、c-jun表达水平,显微镜下计数阳性细胞数.结果 与空白对照组相比较,模型组脑干c-fos、c-jun表达明显增多,差异有显著统计学意义(P＜0.01)；与模型组相比较,青藤碱高、中、低剂量组和舒马普坦组脑干c-fos、c-jun表达明显减少,差异有显著统计学意义(P＜0.01)；与舒马普坦组相比较,青藤碱高剂量组脑干c-fos、c-jun表达无差异,无统计学意义(P＞0.05).结论 青藤碱可能通过某些作用机制治疗偏头痛,阻断疼痛刺激信号传入脑干,抑制脑干c-fos、c-jun表达,减轻颅内疼痛长时程反应.
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青藤碱对类风湿性关节炎PRR相关受体的研究进展
类风湿性关节炎(RA)以关节滑膜炎症和关节外病理改变为主的自身免疫炎性疾病,病理机制尚不明确,目前尚缺乏有效治疗方针.青风藤提取物青藤碱具有镇痛、抗炎、免疫抑制等多种药理作用,近年已用于RA治疗.天然免疫防线为人体第一道防线,越来越多的研究发现模式识别受体(Pattern Recognition Receptor,PRR)在RA的发病和进展中具有重要作用,本文就青藤碱对类风湿性关节炎PRR相关受体关系的研究进展.
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多指标正交优化复方粉背雷公藤凝胶剂的提取工艺
目的:优化复方粉背雷公藤凝胶剂的提取工艺.方法:采用正交试验设计和多指标综合评分法,以雷公藤甲素、青藤碱含量和千浸膏得率为指标,优化复方粉背雷公藤凝胶剂的提取工艺.结果:佳提取工艺为用8倍量的70％乙醇回流提取3次,每次1h.结论:多指标综合评价优化提取工艺符合中药多成分多靶点的作用特点,优化的提取工艺合理可行,稳定可靠.
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针刺配合复方青藤碱注射液穴位注射治疗膝关节骨性关节炎的临床观察
目的：观察针刺配合复方青藤碱注射液治疗膝关节骨性关节炎的临床效果并对疗效进行评价。方法：将86例膝骨关节炎患者随机分成针刺穴位注射组及针刺西药组。针刺穴位注射组采用电针疗法，穴取血海、梁丘、犊鼻、内膝眼、阳陵泉、阴陵泉、阿是穴，在电针治疗后在犊鼻、内膝眼、阿是穴用复方青藤碱注射液给予穴位注射，电针每日1次，6次为一疗程，疗程间休息1天，共治疗2个疗程。第一疗程穴位注射每天1次，第二疗程穴位注射隔日1次。针刺西药组电针治疗同治疗组，并给予双氯芬酸钠口服，每天1次，每次75 mg，7天为一疗程，共服用2个疗程。以总有效率、WOMAC量表评分为观察指标，在治疗2周后、治疗后2周、治疗后1个月、治疗后3个月随访时进行疗效评估。结果：治疗2周后，两组疗效及WOMAC量表各项评分差异有统计学意义（ P＜0．05），针刺西药组疗效及关节功能优于针刺穴注组；安全性评价无明显差异（ P＞0．05）；治疗后2周，两组疗效及WOMAC量表各项评分差异无统计学意义（P＞0．05），针刺穴位注射组疗效及关节功能与针刺西药组相同；治疗后1个月、治疗后3个月随访时，两组疗效及WOMAC量表各项评分差异有统计学意义（P＜0．01，P＜0．05），针刺穴位注射组疗效及关节功能优于针刺西药组。结论：针刺配合复方青藤碱注射液穴位注射治疗膝关节骨性关节炎安全、有效，即时效果不如针刺西药组明显，但远期疗效明显优于针刺西药组。
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青藤碱提取工艺的优化
提取青藤碱过程中,碱化和精制是两个关键步骤,直接影响产品的纯度和生产效益.故在此方面进行实验,得出盐酸青藤碱的优化提取工艺,为提高产品纯度和生产工艺进一步改进提供参考.
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青藤碱对胶原诱导性关节炎小Toll样受体4/髓样分化因子88通路的影响
目的 探讨青藤碱(sinomenine,SN)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)信号通路诱导炎症的影响.方法 6周龄DBA/1小30只,随机分为正常对照组、CIA组及SN组,每组10只.其中CIA组及SN组小鼠尾根部初次免疫及加强免疫Ⅱ型胶原乳剂诱导CIA模型.小鼠初次免疫d28开始灌胃给药,SN组予SN治疗,正常对照组和CIA组予生理盐水作为对照.连续治疗20 d后处死小鼠,观察药物对小鼠关节肿胀的影响,收集膝关节滑膜及血清.Western blot法检测滑膜TLR4及MyD88蛋白表达,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平.结果 经治疗后,SN组小鼠关节肿胀情况较CIA组改善明显,差异有统计学意义[d41(5.50±1.38)比(9.67±2.34),P<0.05;d48(1.67±0.52)比(3.33±1.21),均P<0.05];TLR4、MyD88蛋白表达及血清炎性因子TNF-α均较CIA组下降,差异有统计学意义[TLR4/β-actin:(0.33±0.05)]比(0.62±0.05)];MyD88/β-actin:(0.10±0.02)比(0.33±0.03);TNF-α:(169.16±10.68)比(347.97±13.45),均P<0.05].结论 SN可改善CIA小鼠的关节炎症,该作用可能与其抑制TLR4/MyD88信号通路有关.
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青藤碱对炎性刺激下体外培养关节软骨细胞的保护作用
目的体外培养脂多糖(LPS)诱导的初生小牛关节软骨细胞炎症损伤模型并以青藤碱(SN)干预，从而研究SN对关节软骨细胞的保护作用。方法无菌分离并体外培养初生小牛的膝关节软骨细胞，以不同浓度组LPS刺激细胞诱导炎症损伤模型，比色法检测培养液上清中的一氧化氮(N0)生产量，MTT法检测不同浓度SN对正常培养细胞活力的影响，从而选择合理的造模及给药剂量;以低、中、高3种剂量的SN干预LPS诱导的软骨细胞炎症损伤模型，并设立模型对照组、空白对照组，检测各组细胞培养液上清中的NO丙二醛(MDA)产生量，检测一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性，分析SN对细胞炎症损伤模型的干预作用。结果 各浓度LPS均能剂量依赖性地促进软骨细胞产生NO，依次为(11.0±0.4)、(16.7±0.5)、(21.0±0.7)、(26.3±0.6)、(42.4±0.5)、(52.4 ±0.9)、(72.3±0.5)μmol/L，分别与空白组比较，差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。MTT法检测各浓度SN作用下软骨细胞相对活力，OD值分别为0.44±0.01、0.43 +0.02、0.44±0.01、0.43±0.02、0.43±0.02，分别与空白组差异均无统计学意义(P值均＞0.1)。未加SN干预LPS组与对照组NO、MDA、NOS、SOD比较差异有统计学意义，t值分别为-135.0、-16.1、-150.4、32.3，P值均＜0.01。加入各浓度SN的LPS组分别与不加SN的LPS组比较NOS释放量SN组较低，t值分别为-74.7、-33.5、-43.4，P值均＜0.01;分别比较NO释放量SN组较低，t值分别为-11.4、-7.1、-5.5，P值均＜0.01;分别比较SOD活力SN组较高，t值分别为-105.5、-40.3、-20.5，P值均＜0.01;分别比较MDA产生量SN组较低，t值分别为21.5、10.7、17.7，P值均＜0.01，差异有统计学意义，且呈一定的剂量依赖性。结论SN能对抗LPS诱导的脂质过氧化及炎性损伤，提高软骨细胞的超氧化物歧化酶活性，提高氧自由基清除水平，对软骨细胞具有保护作用。
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青藤碱抑制人宫颈癌的研究
目的:研究青藤碱(Sinomenine, SIN)对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其机制,为SIN在宫颈癌的预防和治疗上提供实验依据.方法:不同浓度SIN分别处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测处理24h、48h、72h后Hela细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.结果:1. 0.1、0.2、0.4、0.625、1.25、2.5mmol/L SIN处理Hela细胞24h、48h、72h后,细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性特点;2.流式细胞仪细胞周期分析表明,SIN处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,两组比较有统计学意义;3.细胞凋亡分析表明,SIN处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;结论:SIN在体外能有效抑制宫颈癌细胞生长,其机制可能与其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关,SIN有望应用于宫颈癌的辅助治疗.
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哈乐联合青藤碱治疗前列腺炎的临床观察
目的:观察哈乐联合青藤碱治疗前列腺炎的疗效.方法:将90例符合入选标准的前列腺患者,随机分为联合治疗组和对照组.对照组给予哈乐0.2 mg;联合治疗组在此基础上给予青藤碱口服,一日3次,前期一次2片,一日3次；三日增至一次3片,一日3次.治疗4周,观察疗效和比较两组患者前列腺液中TNF-α、IL-6表达.结果:联合治疗组总有效率显著优于对照组(P＜0.05),前列腺液中TNF-、IL-6表达明显低于对照组.结论:哈乐配合青藤碱,能增强其对前列腺炎的疗效.
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青藤碱对慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠炎症反应及P38Mapk信号通路的影响
目的:观察青藤碱对慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠炎症反应及P38Mapk信号通路的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组、青藤碱高、低剂量组.对照组组给予生理盐水灌胃,青藤碱低、中、高剂量组分别给予青藤碱40、80、160mg/kg灌胃,28天后处死.realtime RT-PCR法和western blot法检测肿瘤组织中TNF-、IL-6 mRNA和TNF-、IL-6、p-P38 MAPK蛋白的表达.结果:青藤碱能明显降低慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠前列腺组织中TNF-、IL-6 mRNA和TNF-、IL-6、p-P38 MAPK蛋白的表达.结论:青藤碱能抑制慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠前列腺炎症反应,其机制可能与抑制P38MAP信号通路有关.
关键词： 青藤碱 前列腺炎 TNF- IL-6 P-p38 MAPK -
青藤碱及其衍生物的研究进展
青藤碱是从传统中药青风藤中分离得到的异喹啉类生物碱,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等活性,临床主要用于治疗类风湿性关节炎.青藤碱存在半衰期短,用药剂量大,有胃肠道等副作用,因而限制了其广泛应用.本文对青藤碱类衍生物的构效关系进行综述,为青藤碱的进一步研究和应用提供科学的依据,有助于推动青藤碱的深入研究.
