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补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的ApoE-/-小鼠Toll样受体4及其下游主要元件的影响
目的:探究补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、核因子κB(NF-κB)表达的影响,讨论补阳还五汤对于动脉粥样硬化的防治机制.方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组,补阳还五汤组,每组10只,以10只C57BL/6J小鼠设空白对照组.除空白对照组正常饮食饮水外,每组给予高脂饲料喂养8周.空白对照组及模型组每日给予0.9％氯化钠溶液灌胃,阿托伐他汀组及加为补阳还五汤组每日以相应药物灌胃.第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDC-C)值.采用苏木素-伊红染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比.以荧光定量PCR检测TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB的mRNA表达;蛋白质印迹法测定其蛋白表达的变化.结果:血脂水平方面,与模型组相比,补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能降低ApoE-/-小鼠TC、TG、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平(P＜0.01);镜下观察补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能较模型组斑块有所减少,主动脉血管细胞排列较整齐,炎性细胞浸润减轻,小鼠的主动脉斑块在血管的占比均有不同程度的降低(P＜0.01).mRNA与蛋白水平上与模型组相比,补阳还五汤与阿托伐他汀组均能有效降低TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB的mRNA基因与蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:补阳还五汤对于AS的发生发展有预防作用,其机制可能与抑制TLR4及其下游信号转导通路主要元件有关.
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miR-146a激动剂对大鼠神经病理性疼痛行为学和IRAK1、TRAF6表达的影响
目的:探讨miR-146a激动剂(agomiR-146a)经鞘内给药对大鼠神经病理性疼痛的影响.方法:雌性SD大鼠16只,体重200～250g,采用随机数字表法随机分为对照组(n=8)和agomiR-146a组(n=8),两组均行双侧坐骨神经结扎手术,于手术当天及术后第3、5、7、10天分别经鞘内注射体积为15 μl的agomiR-对照组或agomiR-146a(5nmol溶于生理盐水),于术前及术后第1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应.实时定量PCR法检测术后第14天大鼠L4～6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中miR-146a、白介素1受体相关激酶(interleukin-1receptor-associated kinase 1,IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor-associated factor 6,TRAF6)的mRNA表达水平;Western-blot法检测IRAK1及TRAF6蛋白表达水平变化.结果:agomiR-146a组大鼠缩足反射热辐射潜伏期自建模后3天显著增加,而缩足反射机械刺激阈值在建模后7和14天比对照组明显升高(P＜0.05).与对照组相比,术后14天agomiR-146a组miR-146a表达显著上调(P＜0.05),IRAK1、TRAF6的mRNA表达水平下降(P＜0.05);agomiR-146a组IRAK1、TRAF6蛋白水平亦明显降低(P＜0.05).结论:miR-146a激动剂agomiR-146a经鞘内给药可以减轻大鼠神经病理性疼痛,可能为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点.
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TRAF6shRNA对LPS/TLR4信号传导通路的体外干预作用
目的:体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响,初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响.方法:构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体,转染RAW264.7细胞后培养48h,予以终浓度为100 ng/mL的LPS刺激,0、4、8h和16h后收集细胞上清,同时设空白对照及地塞米松阳性对照组,ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-lβ、TGF-β1,Real-timePCR方法检测TRAF6、IL-6、COX-2 mRNA,Western blot检测细胞核内NF-κB p65.结果:转染TRAF6-shRNA 48 h后,TRAF6mRNA及蛋白表达明显受到抑制,其抑制率分别为79.17%、68.74%.MTT法检测结果显示,重组质粒转染72 h内对细胞增殖无明显的抑制.LPS刺激后,TNF-0、IL-1β、TGF-β1表达量都有明显变化(P＜0.01),其中TNF-α、IL-1β在8h达高峰,TGF-β1在16h达高峰,TRAF6基因沉默后,以上细胞因子增长率明都显下降(P＜0.01).实验结果显示,TRAF6基因沉默明显能下调IL-6、COX-2 mRNA表达,并能抑制LPS激活的NF-κB核转位.结论:重组质粒TRAF6-shRNA能有效降低RAW264.7细胞中基因TRAF6 mRNA及蛋白的表达,并对内毒素炎症反应具有明显的抑制效应.
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小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达
目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6 -shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW 264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子6 RNA干扰 重组表达质粒 短发卡RNA -
肿瘤坏死因子受体相关因子6与骨代谢的研究进展
TRAF6是肿瘤坏死因子受体相关因子家族(TRAFs)中既可与肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族结合,又可与白细胞介素-1受体/Toll样受体(IL-1 R/TLR)超家族相互作用来传递细胞外信号的一种细胞内接头蛋白,在炎症反应、免疫应答、骨代谢中发挥着重要作用.本文现就TRAF6在骨代谢中的研究进展作一综述.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子6 破骨细胞 成骨细胞 骨质疏松 -
RANK信号调控破骨细胞分化与成熟的研究进展
破骨细胞来源于微环境造血前体细胞,它的生存、增殖、分化和激活需要巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)参与.RANKL与相应的RANK受体结合,从而刺激破骨前体细胞分化成为破骨细胞.这一过程由不同的调节蛋白和激酶来调控,并且依赖于RANKL-RANK信号.本文中,笔者总结了目前已知的在破骨细胞发生过程中调节RANK信号的机制.在早期阶段,RANK信号的调节通过募集调节蛋白如肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6),引起丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)以及转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的活化.活化的NF-κB进一步激活调节破骨细胞生成的重要因子-T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1).在信号传递的中间阶段,共刺激信号通过激活磷脂酶Cγ2(phospholipase Cγ2,PLCγ2)连同c-Fos/AP-1引起钙离子(Ca2+)振荡,同时Ca2+信号促进NFATc1的产生.在破骨细胞生成的晚期阶段,NFATc1入核诱导大量的破骨细胞特异性靶基因的表达,从而使细胞融合并发挥其功能.
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肿瘤坏死因子受体相关因子6基因沉默对成牙本质细胞增殖能力的影响
目的 研究小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的表达后,对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖能力的影响,以期构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型,并阐明TRAF6对成牙本质细胞增殖的调控作用.方法 将针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体pSUPER-TRAF6siRNA转染MDPC-23(转染组),空载体对照组采用pSUPER空载体质粒,空白对照组MDPC-23细胞不转染任何质粒,采用氨基糖苷类抗生素G418抗性筛选,挑选克隆株;反转录PCR (reverse transcription-PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测TRAF6的mRNA和蛋白表达;通过绘制细胞生长曲线、甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTr)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染前后细胞增殖能力的变化.结果 MDPC-23细胞转染pSUPER-TRAF6siRNA后,可以稳定表达克隆株,其TRAF6mRNA和蛋白表达水平与两个对照组相比均显著下降[mRNA:转染组为0.163±0.008,空载体对照组为0.778±0.017,空白对照组为0.782±0.004,P＜0.000 1;蛋白质印迹法:转染组为0.215±0.006,空载体对照组为0.964±0.007,空白对照组为0.973±0.013,P＜0.001];稳定转染TRAF6siRNA的单克隆株3、5d时,转染组A值为0.46±0.03和1.35±0.06,均显著高于相同时间点的空载体对照组和空白对照组(P＜0.01);转染组的细胞增殖指数(proliferation index,PrI)[(24.1±2.2)％]均显著高于空载体对照组[(11.2±1.0)％]和空白对照组[(10.5±0.7)％](P＜0.01).结论 稳定转染pSUPER-TRAF6siRNA后可以显著降低MDPC-23细胞中TRAF6的表达,表明构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型成功;TRAF6基因沉默可以使MDPC-23细胞的增殖能力增强,将影响成牙本质细胞形成和修复牙本质的能力,表明TRAF6是调控牙本质发育及损伤修复过程的重要信号分子.
关键词： RNA干扰 转染 细胞增殖 肿瘤坏死因子受体相关因子6 -
肿瘤坏死因子受体相关因子6基因多态性对中风风痰瘀阻证发生风险及炎性反应过程的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因多态性与中风不同证型遗传易感性以及炎性反应相关数量性状的关联.方法 本研究采用病例-对照设计,纳入中风风痰瘀阻证者311例、气虚血瘀证者284例、性别年龄相匹配的对照组605例.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测了TRAF6 mRNA表达水平,运用Sequenom MassARRAY iPLEX平台对TRAF6基因rs5030411、rs5030416两个多态性位点进行基因分型,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定炎性细胞因子血清水平.用PLINK、SPSS软件进行统计学分析.结果 中风风痰瘀阻证、气虚血瘀证患者的TRAF6 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.050).TRAF6基因rs5030416多态性与中风风痰瘀阻证的易感性存在统计学关联(P=0.030),rs5030411多态性与中风易感性无统计学关联(P>0.050).携带rs5030411 CT基因型的风痰瘀阻证患者的白细胞介素-1b(interleukin-1b,IL-1b)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)血清水平显著高于其他基因型携带者.风痰瘀阻证患者的IL-1 b、IL-6血清水平显著高于对照组(P<0.050).结论 TRAF6基因rs5030416多态性可能影响中风风痰瘀阻证的发生,而rs5030411多态性可能参与调节风痰瘀阻证的炎性反应过程.
关键词： 中风 肿瘤坏死因子受体相关因子6 单核苷酸多态性 mRNA 炎性细胞因子 -
微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1和肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达
目的 观察转染微小RNR-146a(miR-146a)对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物(mimic)组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了(24.55±6.14)倍(t=-6.643,P=0.003).细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的(1.16±0.10)倍(t=2.701,P=0.054)和(1.19±0.16)倍(t=2.032,P=0.112).而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0％(t=-9.353,P=0.001)和64.1％(t=-6.839,P=0.002).结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.
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木犀草素对大鼠脑缺血后 TRAF6表达的影响及其保护作用机制研究
目的：观察脑缺血后肿瘤坏死因子受体相关因子6（ TRAF6）的表达变化，探讨木犀草素的脑保护机制研究。方法用线栓法制作大鼠大脑中动脉（ MCAO）闭塞模型。采用Western blot观察TRAF6蛋白变化，比较各组脑梗死体积、患侧脑水肿和神经功能缺损评分。结果脑梗死后24h，TRAF6的蛋白表达明显上调（2．14±0．05）；木犀草素可抑制脑梗死后TRAF6的表达（P＜0．05）；明显改善神经功能缺失、减轻脑水肿及减小脑梗死体积，（ P＜0．05）。结论木犀草素通过抑制TRAF6的表达起到了脑保护作用。
关键词： 脑缺血 肿瘤坏死因子受体相关因子6 木犀草素 -
IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究
目的 通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料.方法 原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定.取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达.结果 TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强.结论 IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关.
关键词： 牙周膜成纤维细胞 细胞培养 肿瘤坏死因子受体相关因子6 -
复肾颗粒对脂多糖诱导下人肾小管上皮细胞TRAF6表达的影响
目的:探讨复肾颗粒含药血清对脂多糖(L)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)的增殖及肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为正常组,LPS诱导组(10 μg/ml)、对照组(LPS 10 μg/ml+等体积正常组血清)、复肾颗粒小剂量组(LPS 10μg/ml+复肾颗粒100 μg/ml)、复肾颗粒中剂量组(LPS 10 μg/ml+复肾颗粒500 μg/ml)、复肾颗粒大剂量组(LPS 10 μg/ml+复肾颗粒1 mg/ml).培养6、12和24 h后,用MTT法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞上清中IL-6、TNF-α的含量,RT-PCR法检测α-SMA mRNA和TRAF6 mRNA的含量,Western bolt法检测α-SMA和TRAF6蛋白的表达.结果:LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平、胞质中IL-6和TNF-α的含量及α-SMA和TRAF6的表达水平均增加,而不同剂量复肾颗粒干预后细胞增殖水平、IL-6和TNF-α的含量以及α-SMA和TRAF6的表达水平均减低,呈现一定的浓度依赖性,结果差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论:复肾颗粒可抑制LPS诱导的HK-2细胞增殖水平和炎性因子的释放,发挥抑制肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转变的纤维化过程,其机制可能与抑制TRAF6蛋白的表达有关.
关键词： 复肾颗粒 人肾小管上皮细胞 细胞增殖 肾纤维化 肿瘤坏死因子受体相关因子6 -
RNAi对成牙本质细胞表达TRAF6干涉作用
目的 采用针对小鼠肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的siRNA真核表达载体,探讨其对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达TRAF6的干涉作用.方法 将构建成功的2个针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体( pSUPER-T和pSUPER-2T),通过脂质体介导瞬时转染MDPC-23细胞,RT-RCR和Western blot法检测其对转染后细胞中TRAF6的mRNA和蛋白表达干涉效果.结果 pSUPER-T和pSUPER-2T转染MDPC-23细胞后,RTRCR法显示2组TRAF6 mRNA表达下调、Westem blot结果表明2组TRAF6蛋白表达水平降低,其中pSUPER-2T转染组抑制TRAF6表达作用较强.结论 针对TRAF6的siRNA真核表达载体,在MDPC-23细胞中有效发挥了TRAF6表达干涉作用.
关键词： RNA干涉 肿瘤坏死因子受体相关因子6 MDPC-23细胞 -
不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达
背景：课题组以往研究证实，氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2的分化和功能都受到抑制，但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。
目的：实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律，探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。
方法：将破骨前体细胞株经质量浓度均为10μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞，然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%，7%，2%)条件下培养，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化，并分别在培养第1-7天收集细胞，通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子，肿瘤坏死因子受体相关因子6，抗酒石酸酸性磷酸酶，组织蛋白酶K基因mRNA的表达。
结果与结论：低氧条件下抗酒石酸酸性磷酸酶阳性的破骨细胞数显著低于组织氧和常氧培养时形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数(P<0.05)。不同氧环境下，破骨细胞中核因子κB受体活化因子mRNA的表达无明显改变，组织氧和常氧培养下肿瘤坏死因子受体相关因子6 mRNA的表达在培养第5天高(P<0.05)。随着氧浓度的降低，抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K mRNA表达时间延后，组织氧培养条件下此2者的表达可以保持在高水平。结果证实，与常氧和低氧条件相比，破骨细胞在组织氧培养条件下培养时更易促进其分化，从而维持其活性和功能。 -
膝骨性关节炎模型大鼠接受推拿治疗后软骨Toll样受体4/髓样分化因子88信号转导通路的变化
背景:研究表明,Tol样受体4/髓样分化因子88信号转导通路可诱导各类炎症反应,且膝骨关节炎的发生与Tol样受体4/髓样分化因子88信号转导通路密切相关,而推拿可以降低白细胞介素6及肿瘤坏死因子α等炎症因子的表达水平,起到消炎止痛的作用,且对膝骨关节炎防治有一定的疗效.目的:对建立的大鼠膝骨关节炎模型行推拿治疗,观察其软骨Tol样受体4、髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6、核转录因子κB p65 mRNA及蛋白表达,来探讨推拿治疗膝骨关节炎的效果及其机制.方法:采用随机化的原则,抽取10只大鼠为空白组,余下40只大鼠采用木瓜蛋白酶关节注射建立大鼠膝骨关节炎模型,待造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、推拿组、塞来昔布组、推拿加塞来昔布组,每组10只.空白组、模型组常规饲养,推拿组一指禅手法治疗,塞来昔布组塞来昔布灌胃,推拿加塞来昔布组予以上2种治疗,各组均治疗4周.结果与结论:①与模型组相比,推拿和/或塞来昔布治疗均能显著降低大鼠软骨Mankin评分;②与模型组相比,推拿和/或塞来昔布治疗均能明显下调大鼠软骨组织中Tol样受体4、髓样分化因子88、核转录因子κBp65以及肿瘤坏死因子受体相关因子6 mRNA与蛋白的表达水平,且推拿加塞来昔布组软骨组织中Tol样受体4、髓样分化因子88以及核转录因子κBp65 mRNA与空白组接近;③提示推拿防治膝骨关节炎的机制可能是通过下调Tol样受体4、髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6、核转录因子κBp65 mRNA和蛋白的表达,从而延缓膝骨关节炎的发展进程.
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肺炎支原体患儿外周血单核细胞Toll样受体4、肿瘤坏死因子受体相关因子6、白细胞介素1β的表达水平及临床意义
目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平及临床意义,旨在为临床诊断及治疗小儿MPP提供新的靶点.方法 选取2016年2月-2017年2月该院收治的116例MPP患儿为研究对象,其中重症肺炎支原体肺炎(SMPP)患儿49例为SMPP组、普通MPP患儿67例为普通MPP组,另选取同期在该院体检的52例健康小儿为对照组,应用流式细胞仪检测细胞免疫T淋巴细胞亚群水平,采用特定蛋白分析仪检测体液免疫免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平,应用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平.结果 SMPP组、普通MPP组CD4+、CD3+、CD4+/CD8+水平明显低于对照组,CD8+水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且SMPP组CD4+、CD3+、CD4+/CD8+明显低于普通MPP组(P＜0.05),CD8+水平明显高于普通MPP组(P＜0.05),3组CD3+CD8+水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).SMPP组、普通MPP组IgM、IgG水平明显高于对照组(P＜0.05),且SMPP组IgM、IgG水平明显高于普通MPP组(P＜0.05),3组IgA水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).SMPP组外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平明显高于普通MPP组(P＜0.05),普通MPP组外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平明显高于对照组(P＜0.05);SMPP组急性期外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平明显高于同组恢复期及普通MPP组急性期(P＜0.05),普通MPP组急性期外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平明显高于同组恢复期(P＜0.05),SMPP组恢复期、MPP组恢复期、对照组外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MPP患儿外周血单核细胞TLR4、TRAF6、IL-1β水平升高,推测三者有望成为评估MPP严重程度的参考指标.
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TRAF6在食管癌中的表达及临床意义
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6 ( TRAF6 )在人食管癌组织中的表达及临床意义. 方法:收集2005年1月至2010年01月在本院接受首次手术治疗的食管癌患者78例,通过免疫组织化学方法检测TRAF6蛋白在食管癌及其癌旁组织中的表达,并探讨TRAF6的表达量与临床病理特征和患者预后的相关性. 结果:TRAF6在食管癌组织中阳性表达率为71.79%,明显高于癌旁正常组织中的10.26%;进一步研究发现TRAF6的表达量与食管癌患者的性别、年龄、分化程度及肿瘤大小无关( P>0.05 ) ,与临床分期和淋巴结转移呈正相关( P<0.05 ) ,进一步研究发现TRAF6的表达量与患者的五年生存率密切相关,高表达TRAF6蛋白的患者五年生存率显著低于低表达的患者( P=0.011 ). 结论:TRAF6在食管癌组织中的表达量明显升高,并与患者的预后密切相关.
关键词： 食管癌 肿瘤坏死因子受体相关因子6 病理 预后 免疫组织化学 -
TRAF6在卵巢癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6 ( TRAF6 )在卵巢癌及癌旁正常卵巢组织中的表达与临床意义. 方法:收集2001年8月至2009年12月在我院接受手术治疗的102例卵巢癌患者的肿瘤标本及相对应的癌旁正常卵巢组织标本,所有肿瘤组织均经术后病理学检测结果证实,通过免疫组织化学方法检测TRAF6蛋白在卵巢癌及癌旁正常组织中的表达,并探讨TRAF6的表达量与临床病理特征和预后的相关性. 结果:卵巢癌组织中TRAF6的阳性表达率为68.6%,显著高于癌旁正常卵巢组织中的20.5%( P<0.05 );进一步研究发现,TRAF6的表达量与卵巢癌患者的年龄、肿瘤大小、有无腹水、组织学类型和病理分级无关( P>0.05 ) ,与患者有无淋巴结转移及临床分期相关( P<0.05 );TRAF6阳性表达的患者五年生存率显著低于阴性表达的患者( P<0.001 ). 结论:TRAF6在卵巢癌组织中的表达显著降低,其可能在卵巢癌的发生、发展和侵袭中发挥重要作用.
关键词： 卵巢癌 肿瘤坏死因子受体相关因子6 预后 -
青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 MyD88、TRAF－6表达的影响
目的：探讨青藤碱（Sinomenine，SIN）对TLR信号转导通路及髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88，MyD88）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（ Tumor necrosis factor receptor associated factor－6，TRAF－6）表达的影响，阐明SIN抑制类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis，RA）成纤维样滑膜细胞（ Fibroblast－like synoviocytes，FLS）增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法：体外培养RA－FLS细胞，分为对照组与（0．125、0．25、0．5、1 mmol／L） SIN组，通过检测各组细胞内碱性磷酸酶（ ALP）活性，确定体外用药佳药物浓度；CCK－8法检测0．5 mmol／L SIN组的细胞增殖率；荧光定量PCR法测定对照组与0．5 mmol／L SIN组MyD88和TRAF－6基因表达；Western blot法检测对照组与0．5 mmol／L SIN组MyD88和TRAF－6蛋白表达。结果：SIN各组ALP活性均低于对照组，其中以0．5 mmol／L SIN组的ALP活性为低（P＜0．01）。 CCK－8法检测，0．5 mmol／L SIN组RA－FLS细胞增殖率明显低于对照组（ P＜0．01），SIN诱导第4天细胞增殖率高，进入平台期，之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR和Western blot法检测，0．5 mmol／L SIN组的MyD88和TRAF－6基因及蛋白表达明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA－FLS细胞内MyD88和TRAF－6的表达，这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。
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miR-146a下调小鼠TRAF-6并减少胸腺基质细胞凋亡率的实验研究
目的 探讨miR-146a在胸腺发育及增龄性萎缩中的作用.方法 转染miR-146a模拟物到小鼠胸腺基质细胞(thymic stromal cell,TSC)中,48 h后使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术测其含量,观察有无成功过表达;72 h后使用Western blot检测其靶基因肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF-6)含量,并采用流式细胞仪观察TSC凋亡率的变化.结果 在转染48 h后TSC中miR-146a含量明显升高(mimics组为192.95±54.64,对照组为1,P<0.05);72 h后其靶基因TRAF-6在mimics组中含量相比对照组明显降低(mimics组为0.50±0.25,对照组为1,P<0.05);转染组胸腺基质细胞72 h凋亡率较对照组降低(mimics组为13.90％ ±1.84％,对照组为22.83％ ±3.43％,P<0.05).结论 miR-146a随年龄在胸腺基质中含量下降与胸腺萎缩是相关性,考虑其对靶基因的抑制减弱所引起,并且与靶基因TRAF-6能促进细胞凋亡有一定关系.
关键词： 胸腺 胸腺基质细胞 miR-146a 肿瘤坏死因子受体相关因子6 凋亡
