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关节腔注射青藤碱对兔膝骨性关节炎血清NO等自由基代谢的影响
目的 观察关节腔内注射青藤碱(SIN)对兔膝骨性关节炎(OA)血清中自由基代谢的影响,以探讨其防治OA的作用机理.方法 将38只兔随机分为正常组(A)、模型组(B)、透明质酸钠组(C)和青藤碱组(D).A组不予任何处理,B,C和D三组通过关节腔注射木瓜酶法诱导OA模型后,分别用生理盐水、透明质酸钠和青藤碱干预,5周后检测并比较各组血清中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量.结果 B组血清NO和MDA含量分别为75.27±2.08 μmol/L和3.54±0.17 nmol/ml,均明显高于A组62.64±3.33 μmol/L和2.88±0.14 nmol/ml,差异有统计学意义(P值均＜0.01);而B组SOD含量205.74±22.08 U/ml明显低于A组267.59±17.09 U/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).D组血清NO和MDA含量分别为69.29±1.51 μmol/L和3.09±0.16 nmol/ml,均明显低于B组,差异有统计学意义(P值均＜0.01),低于C组72.69±1.84 μmol/L和3.33±0.22 nmol/ml,差异有统计学意义(P值均＜0.05);而SOD含量245.46±11.25 U/ml,明显高于B组,差异有统计学意义(P＜0.01),高于C组224.03士9.90 U/ml,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 关节腔注射青藤碱可以降低血清中NO,MDA含量,提高SOD活性,从而保护关节软骨,对OA起到防治作用.
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青藤碱对肠癌细胞的抑制作用
目的:观察青藤碱对肠癌细胞的抑制作用.方法:选取HCT116细胞分3组,分别用DMSO(对照组)、20μmol/L和40μmol/L的青藤碱以及6μmol/L的5氟尿嘧啶(5-FU)处理细胞.MTT检测不同浓度药物对HCT116细胞增殖的影响.PI染色技术和JC-1染色分别检测药物对细胞周期和凋亡的作用.通过Western blot检测青藤碱对HCT116细胞中Cyclin D1和bcl-2的影响.Transwell实验检测青藤碱对HCT116细胞迁移的影响.通过Western blot检测青藤碱对HCT116细胞中MMP2的影响.结果:与DMSO相比,20μmol/L和40μmol/L的青藤碱以及6μmol/L的5-FU作用于HCT116细胞24 h后对细胞的抑制率分别为:(33.16±6.01)％、(47.48±2.32)％和(62.31±3.26)％.青藤碱抑制G 1-S期转化,促进细胞凋亡.Western blot结果显示,青藤碱抑制Cyclin D1、bcl-2和MMP2在HCT116细胞中的表达.结论:青藤碱抑制HCT116细胞的生长和迁移.
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青藤碱抑制肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡影响的实验研究
目的:探讨青藤碱对肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡影响及相关作用机制.方法:青藤碱150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml作用于肺癌细胞株Calu-1,采用MTT、流式细胞术、RT-PCR及Westernblot检测经不同浓度青藤碱处理和空白对照组(0μg/ml),12h、24h、36h后肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡及MEK/ERK蛋白和iASPP基因表达情况.结果:ERK,p-ERK表达随处理浓度的增加而降低,MEK/ERK通路活化受到抑制,在第36h 250μg,/ml处理组p-ERK表达低,且此时iASPP-mRNA基因表达明显降低.不同浓度青藤碱均对肺癌Calu-1细胞株增殖呈现明显抑制并促进其凋亡,随青藤碱浓度增加和作用时间的延长,抑制率增加,促凋亡作用增强,在第36h 250μg/ml处理组抑制率达到(51.23±4.34)％.结论:青藤碱明显抑制肺癌细胞的增殖和凋亡.
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青藤碱诱导肺癌 NCI-H460 细胞凋亡及其机制的实验研究
目的:探究青藤碱( SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响；Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达；用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性；SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强；SIN与PBK/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P＜0.05).结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3 K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物.
关键词： 青藤碱 NCI-H460 细胞 凋亡 -
青藤碱通过线粒体途径诱导肺癌 NCI －H460细胞凋亡的初步研究
目的：研究青藤碱（sinomenine，SIN）对人肺癌 NCI －H460细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法：四甲基偶氮噻蓝（MTT）法检测细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪 AnnexinV ／PI 双染法检测细胞凋亡，TdT 酶介导的 dUTP 缺口末端标记（TUNNEL）方法观察细胞的凋亡，罗丹明123（Rhodamine123）染色流式细胞仪检测线粒体膜电位（ΔΨm）。结果：SIN 对 NCI －H460细胞株生长具有抑制作用并诱导凋亡。Annex-inV ／PI 双染检测细胞的凋亡可见随 SIN 浓度增加，细胞凋亡增加呈浓度依赖性。TUNNEL 阳性的凋亡细胞呈棕黄色，细胞核片段化改变。罗丹明染色检测线粒体膜电位的结果提示在 SIN 作用于 NCI －H460细胞48h后，线粒体膜电位下降，SIN 浓度越高，膜电位下降越显著。结论：SIN 具有明显的细胞毒作用，能诱导 NCI －H460细胞凋亡，SIN 通过线粒体途径诱导 NCI －H460细胞凋亡。
关键词： 青藤碱 NCI-H460细胞 凋亡 线粒体途径 -
青藤碱对高糖处理下的血管内皮细胞功能的影响
目的:研究青藤碱(SN)对高糖处理的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)NF-KB和NO表达及细胞活力和凋亡的影响.方法:从新鲜脐带中分离培养HUVECs,观察不同浓度SN干预高糖处理的HUVEC的NO,NF-κB的表达以及细胞活力和凋亡的变化.结果:与基础状态相比较高糖可导致HUVECs释放NO改变、NF-κB的表达上调,细胞活力下降,细胞凋亡率上升,而SN在适当浓度可干预上述变化.结论:SN可抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞的损伤和凋亡.
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青藤碱对家兔血管平滑肌细胞增殖的影响
目的研究青藤碱对血管平滑肌细胞增殖作用及DNA合成的影响.方法采用内皮素刺激的离体家兔血管平滑肌细胞增殖模型,细胞计数,氚-胸腺嘧啶核苷掺入方法.结果青藤碱明显抑制血管平滑肌细胞增殖反应及DNA合成,呈剂量依赖关系.结论表明青藤碱具有抗血管平滑肌细胞增殖作用.
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青藤碱对细胞凋亡的影响研究进展
青藤碱是青风藤的单体提取物，临床广泛运用于内风湿关节炎和内风湿疾病，近来越来越多的文献显示青藤碱对细胞的凋亡有调节作用。本文就青藤碱对细胞的凋亡的影响作用做一综述。
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通痹化湿颗粒质量标准研究
目的：建立通痹化湿颗粒质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中青风藤、鸡血藤、千年健及威灵仙进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对处方中青风藤所含青藤碱的含量进行测定。Waters XTerra RP18（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱；甲醇-磷酸盐缓冲溶液（0.01 mol/L的磷酸二氢钠溶液，以1%三乙胺调节pH值至9.0）（58∶42）作为流动相；检测波长为262 nm。结果建立了青风藤、鸡血藤、千年健及威灵仙具有专属性的定性鉴别方法；青藤碱含量测定加样回收率为95.69%， RSD为0.79%。结论本方法简便可靠，重复性好，可用于该制剂的质量控制。
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青藤碱对肾缺血再灌注大鼠肾组织Fas/FasL蛋白表达水平影响的探讨
目的 探讨青藤碱对肾缺血再灌注大鼠肾组织Fas、FasL蛋白表达水平的影响.方法 选取健康雄性Wistar大鼠72只,体重180～220 g,随机分为假手术组(S组)、空白给药组(SS组)、肾缺血再灌注损伤模型组(I/R组)、青藤碱组(SIN组),每组18只.I/R组、SIN组游离双侧肾蒂,用无创动脉夹夹闭左肾肾蒂,使左肾缺血,45分钟后松开动脉夹再灌注,并即刻切除右肾,建立肾缺血再灌注损伤模型.S组、SS组仅游离双侧肾蒂,不夹闭左肾肾蒂.SIN组、SS组于缺血后15分钟(即再灌注前30分钟)向腹腔注射青藤碱注射液60 mg/kg,I/R组、S组于同一时间向腹腔注射等量生理盐水.再灌注后6小时(T1)、12小时(T2)、24小时(T3)穿刺心脏采血,用全自动生化分析仪检测血清Cr、BUN浓度;摘除左肾,光镜下观察肾组织病理学变化,用免疫组化法检测肾组织Fas、FasL蛋白表达水平,用TUNEL法检测并计算肾小管上皮细胞凋亡率.结果 S组与SS组大鼠在T1、T2、T3的血清Cr、BUN浓度,Fas、FasL蛋白表达水平,肾小管上皮细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与S组比较,I/R组、SIN组T1、T2、T3的血清Cr、BUN浓度升高(P<0.05),肾组织病理损伤加重,肾组织Fas、FasL蛋白表达水平升高(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡率升高(P<0.05);与I/R组比较,SIN组T1、T2、T3的血清Cr、BUN浓度降低(P<0.05),肾组织病理损伤减轻,肾组织Fas、FasL蛋白表达水平下降(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡率下降(P<0.05);与T2比较,I/R组和SIN组T3的Fas蛋白表达水平、 细胞凋亡率升高(P<0.05).结论 青藤碱可显著降低大鼠肾I/R病理过程中Fas、FasL蛋白的表达水平,从而减少肾小管上皮细胞的凋亡,有助于减轻I/R时肾脏的损伤.
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五藤胶囊的薄层色谱定性鉴别及其补骨脂素HPLC定量研究
目的:制定五藤胶囊的定性定量标准.方法:采用薄层色谱法,分别以化学对照品(芒丙花素、青藤碱、补骨脂素)、药材(鸡血藤、青风藤、补骨脂)为对照,鉴别样品中鸡血藤、青风藤、补骨脂等主要组成药物,并采用HPLC法测定其中补骨脂素的含量.结果:样品薄层色谱分别与化学对照品及对照药材薄层色谱在相应位置上显相同颜色的斑点.HPLC法测定样品中补骨脂素的含量,暂定胶囊内容物中补骨脂素的含量不得低于3 mg/g.结论:定性鉴别和定量分析为五藤胶囊的质量控制提供了科学依据.
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盐酸青藤碱关节腔注射联合刃针微创松解术治疗膝骨性关节炎临床疗效观察
目的:探讨盐酸青藤碱关节腔注射联合刃针微创松解术治疗膝骨性关节炎的临床疗效.方法:将兰州市中医医院124例门诊和住院的膝骨性关节炎患者随机分成治疗组和对照组. 治疗组给予盐酸青藤碱注射液35mg关节腔内注射,每日1次,共7天,配合刃针微创松解及火罐一周2~3次.对照组给予盐酸青藤碱注射液35mg关节腔内注射,每日1次,共7天.结果:治疗组临床缓解率和显效率优于对照组,两组总有效率无统计学差异(P>0.05). 结论:盐酸青藤碱关节腔注射联合刃针微创松解术,可提高膝骨性关节炎患者的临床症状和体征的改善程度,但相比对照组,总有效率无统计学差异.
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青藤碱替代激素治疗类风湿性关节炎疗效分析
目的 在甲氨蝶呤协同柳氮磺吡啶治疗的基础上,观察联合青藤碱或激素治疗类风湿性关节炎的临床疗效.方法 将72例门诊或住院的类风湿性关节炎患者随机分为治疗组(青藤碱+甲氨喋呤+柳氮磺吡啶)36例和对照组(强的松+甲氨喋呤+柳氮磺吡啶)36例.治疗组青藤碱采用静滴+关节腔注射,间隙期口服青藤碱缓释片,对照组采用口服强的松.临床疗效指标为晨僵时间、关节肿胀数、关节压痛数及疼痛VAS评分,实验室检验指标为类风湿因子、血沉、C-反应蛋白.治疗周期为3个月,治疗结束后判定疗效.结果 临床疗效两组治疗前、后组内比较4项临床疗效指标均明显改善(均P ＜0.05),治疗前、后两组组间比较均无明显差异;3项实验室检验指标两组治疗前、后组内比较均明显改善(均P ＜0.05),两组治疗前组间无明显差异,两组治疗后类风湿因子均下降,但差异无统计学意义,而治疗组血沉和C-反应蛋白的下降明显优于对照组(P＜0.05).结论 在甲氨蝶呤协同柳氮磺吡啶治疗的基础上,联合青藤碱治疗类风湿性关节炎的作用等于或略优于强的松.
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青藤碱对大鼠肝脏缺血再灌注后树突状细胞功能的影响
目的 观察青藤碱对大鼠肝移植缺血再灌注后肝脏树突状细胞功能的影响.方法 应用"二袖套法"建立大鼠肝移植模型,48只BN大鼠分为对照组、低剂量(40 μg/g)和高剂量青藤碱组(80 μg/g),每组16只,术后第3天切取肝脏,分离、纯化肝脏树突状细胞.流式细胞仪对树突状细胞OX62、主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complex Ⅱ,MHC-Ⅱ)和CD86等分子表型进行分析.RT-PCR测定细胞因子IL-12、IL-1、TNF-a mRNA表达水平,Western blot检测树突状细胞表达的Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4).结果 青藤碱处理组树突状细胞呈现不成熟的表型,树突状细胞表面MHC-Ⅱ和CD86表达显著下降.树突状细胞表达IL-12、IL-1、TNF-a mRNA和TLR4蛋白水平明显降低.结论 青藤碱能明显抑制大鼠肝移植缺血再灌注后肝脏树突状细胞成熟和免疫功能.
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青藤碱对类风湿关节炎细胞因子影响的研究进展
类风湿关节炎为自身免疫性疾病，有着极高的致残率，且严重影响患者的身心健康。青风藤自古以来作为治疗痹病的常用中药，具有清热镇痛、祛风除湿、活络通经等功效。青藤碱是青风藤的主要有效成分，已广泛应用于临床。就青藤碱在治疗类风湿关节炎的基础研究方面进行简要综述。
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RP-HPLC法测定北豆根药材中4种生物碱的含量
目的:采用RP-HPLC法同时测定巾药材北豆根中青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱和粉防己碱4种牛物碱的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇(A)-乙腈(B)-0.05%三乙胺的水溶液(C)为流动相,梯度洗脱[0～20 min,B-C(20:80);20～40 min,B-C(20:80)→A-B-C(5:40:55);40～60 min,A-B-C(5:40:55)→B,保持10 min];流速1.0 mL·min-1;检测波长为262 am(0～20 min),282 am(20～70 min).结果:青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱和粉防己碱4种生物碱的线性范围分别为0.09～0.43μg(r=0.9997)、0.62～3.09μg(r=0.9995)、0.78～3.88μg(r=0.9996)与0.12～0.57μg(r=0.9997);加样回收率(n=5)分别为98.3%,97.6%,98.O%,97.8%.结论:该方法简便、快速、准确,重复性好,可以用于北豆根药材及其制剂的质量分析.
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RP-HPLC法测定青风藤中青藤碱的含量
目的:建立青风藤药材中青藤碱的反相高效液相色谱测定方法.方法:色谱柱为Dikma DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(5 mmol·L-1磷酸氢二钠溶液,以5 mmol·L-1的磷酸二氢钠调节pH至8,再以1%三乙胺溶液调节pH至9)(55:45),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为262 nm,柱温为25℃.结果:青藤碱的线性范围为1.02～10.18μg,r=1.000,加样回收率为100.5%,平均值为101.0%(n=11).结论:方法简便,重复性好,便于操作.
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HPLC法测定追风活络胶囊中青藤碱的含量
目的:测定追风活络胶囊中青藤碱的含量.方法 :采用高效液相色谱法.色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS(5 μm,150 mm×4 .6 mm);流动相为:甲醇-水-乙二胺(500∶500∶0.05);流速:1.0 mL*min-1 ;检测波长264 nm;柱温:室温.结果:青藤碱在0.247 6～1. 238 μg范围内具有良好线性关系,平均回收率为99.8%,RSD＜2.1%.结论: 该法可用于追风活络胶囊中青藤碱的含量测定.
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RP-HPLC法测定北豆根药材中5个生物碱的含量
目的:采用RP-HPLC法同时测定中药材北豆根中青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛诺林碱、蝙蝠葛新诺林碱和蝙蝠葛碱5种生物碱的含量.方法:采用色谱柱Welchrom-C18(250 mm×4.6 nm,5mm),以甲醇(A)-乙腈(B)-0.4％二乙胺水溶液(C)为流动相,梯度洗脱[0～13 min,A-B-C(18:20:62);13～45 min,A-B-C(18:20:62)→A-B-C(37:20:43)；45 ～60min,A-B-C(37:20:43)];流速1.0mL·min-1；检测波长为285 nm.结果:青藤碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛诺林碱、蝙蝠葛新诺林碱和蝙蝠葛碱5种生物碱的线性范围分别为0.016～0.2μg(r=0.9995),0.029 ～0.363μ g·mL-1(r =0.9996),0.09～1.125μg·m L-1(r=0.9996),0.336 ～4.2 μg·mL-1(r =0.9997)与0.172～2.15 μg·mL-1(r =0.9996)；加样同收率(n=6)分别为99.2％,98.5％,102.2％,96.5％和98.4％.结论:该方法简便、快速、准确,重复性好,可以用于北豆根药材及其制剂的含量测定.
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毛细管电泳高频电导法测定北豆根药材中粉防己碱和青藤碱的含量
目的:建立用毛细管电泳高频电导法测定北豆根中生物碱含量的方法,并比较不同提取方法中各组分含量差异.方法:以融硅毛细管(150μm×60 cm)为分离柱,1 mmol·L-1 HAc+2 mmol·L-1NH4Ac+10 mmol·L-1β-CD+2 mmol·L-1SDS缓冲液为电泳介质,分离电压14.0 kV,用高频电导检测法测定了北豆根药材中粉防己碱和青藤碱的含量.结果:粉防己碱和青藤碱的线性范围分别为12.5～900 μg·mL-1和25.0～1.00×103μg·mL-1,平均回收率分别为96.1%和95.6%.结论:本法可用于北豆根药材中有效成分的定量分离和检测.
