首页 > 文献资料
-
雷公藤抑制致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达及GATA3活性
通过对致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达和GATA3活性的观察,探讨雷公藤内酯醇(TP)对IL-5基因转录水平的调节机制,并与地塞米松(DM)的作用比较。 材料与方法(1)动物模型建立及分组:BALB/c小鼠24只,随机平均分为4组:正常对照组,以生理盐水代替卵蛋白(OVA)致敏和激发;致敏组,以OVA致敏和激发[1];TP组,每次激发前1 h腹腔注射TP 40 μg/kg体重;DM组,每次激发前1 h腹腔注射DM 10 mg/kg体重。TP组与DM组后一次激发后24 h再给药1次。(2)原位杂交(ISH):制备脾脏T细胞涂片。IL-5寡核苷酸探针序列:5′TCT CAA AGA ACC ACA TTA CTT GTG GCT CAC 3′。随机观察200个细胞,计数杂交阳性T细胞数。(3)凝胶电泳迁移率实验(EMSA):BALB/c小鼠30只,随机分为正常对照组(5只)和致敏组(25只),致敏方法同上。Panning法[2]分离CD+4T细胞,用丝裂霉素C处理的B细胞作为抗原呈递细胞(APCs)。将CD+4T细胞分为4组:A组:正常对照组,即正常小鼠CD+4T细胞;另3组分别为将致敏小鼠CD+4T细胞随机分成的B组:刀豆蛋白A(ConA)刺激组,C组:TP组和D组:DM组。各组加入OVA至终浓度0.2 g/L、ConA至终浓度25 mg/L、1×107个APCs,相应组加入TP至终浓度10-4mol/L,DM至终浓度10-5mol/L。B组取0.5 h、1 h、2 h和4 h时相点,其余组取2 h时相点。GATA3寡核苷酸序列:P1 5′CCT CTA TCT GAT TGT TAG CA,P2 5′ TGC TAA CAA TCA GAT AGA GG,末端标记[γ-32P] ATP。EMSA反应产物经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳3 h,-70℃放射自显影8 h。相同实验重复3次。(4)凝胶电泳迁移率竞争实验:特异性竞争抑制实验组:加入100倍和200倍未标记GATA3探针;非特异性竞争抑制实验组:加入200倍非特异性的其它未标记探针序列:P1 5′ATA AAA TTT TCC AAT GTA AA,P2 5′TTT ACA TTG GAA AAT TTT AT。
-
阿托伐他汀对血管平滑肌细胞PKB信号转导途径的影响
1材料与方法主要材料:阿托伐他汀(辉瑞制药有限公司),羟甲戊酸(Mevalonate,MVA,Sigma公司),鼠抗兔PKB/AKT多克隆抗体(Sant Cruz公司),蛋白A-琼脂糖(Amersham公司),γ 32PATP(北京亚辉公司),组蛋白H2B(Histon H2B,BM公司).细胞培养与计数:采用贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞.取生长状态良好的第5~6代血管平滑肌细胞(VSMC)制成细胞悬液(4×104/m1),接种于24孔细胞培养板中,每孔L0.5ml,孵育24h,换无血清培养液继续培养24h后,加10%胎牛血清,同时分组加入阿托伐他汀(1umol/L)、阿托伐他汀(1umol/L)+MVA(250 umol/L),培养3 d后计数.
-
MTT法测定鸦胆子对人瘢痕成纤维细胞生长的影响
采用MTT法测定不同剂量的鸦胆子粗提物对正常皮肤(NF)与增生性瘢痕(KF)成纤维细胞的抑制作用,探讨该药在治疗瘢痕增生的体外效果,为临床应用贴敷制剂提供依据。1 材料与方法1.1 材料:DMEM培养液,MTT(四氮甲基唑蓝),0.1g*ml-1鸦胆子仁乙醇溶液。1.2 细胞培养:取增生期瘢痕和正常皮肤进行培养,以第5代后对数生长期的细胞试验。 1.3 药物敏感试验:以细胞浓度为4×104ml-1接种96孔板,细胞贴壁后分为对照组和实验组,对照组只加细胞不加药物,实验组加入不同浓度的鸦胆子,每浓度4个复孔,C O2孵箱培养,48h后加入MTT,继续培养4h,测定吸光度A值。1.4 数据处理:生长抑制率=(1-用药组A/对照组A)×100%,以SPSS软件统计。
-
精液中炎性细胞对精子运动功能的影响
材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.
-
紫杉醇联合IFNα-2b明显增强对K652细胞的诱导凋亡作用
紫杉醇是一种作用于微管的广谱天然抗癌药,目前主要用于治疗实体瘤,能缓解多种进展期实体瘤.但用于治疗髓系白血病效果较差.我们通过实验发现紫杉醇联合INFα-2b对K652细胞的诱导凋亡及杀伤作用均明显增强.实验的主要方法为:(1)将K562细胞浓度调为2×105/ml后接种于96孔板上,每孔100μl,分为4组,空白对照组不加药物,另设一组单独加入100u/ml INFα-2b作为干扰素INFα-2b对照组,均设4个复孔,A组加入浓度分别为20、50、100μmol/L的紫杉醇100μl,B组分别加入上述浓度的紫杉醇及1000u/ml的INFα-2b 100μl,A组及B组每浓度均设4个复孔.在细胞培养箱中设37℃、5CO2%培养48h待检测.
-
非常医改6+N
近日,随着北京师范大学医改课题组加入医改备选方案的队伍,第7套医改方案产生.与此同时,北京大学医改课题组(7套备选方案之一)内部出现了意见分歧,第8套备选方案或可产生.
-
非常医改6+N
近日,随着北京师范大学医改课题组加入医改备选方案的队伍,第7套医改方案产生.与此同时,北京大学医改课题组(7套备选方案之一)内部出现了意见分歧,第8套备选方案或可产生.
-
静脉滴注黄芪注射液致急性荨麻疹1例
[病例]男,60 a.因进行性吞咽困难伴刺激性咳嗽2 mo,诊断为食管中上段癌,于2002年4月11日住院治疗.查体:神志清,精神可,全身表浅淋巴结未及肿大,腹无压痛.治疗:①黄芪注射液(成都地奥九泓制药厂,批号 0111077,每支10 mL)40 mL+NS 250 mL;②林格氏液500 mL,10%氯化钾10 mL,③10%脂肪乳500 mL;④能量一组加入10% GS 500 mL,按顺序依次静脉滴注.当第1组液体滴至约15 min时,患者出现全身奇痒,烦躁不安,继则全身多处出现红色疹块,尤以四肢为重,皮疹高出皮肤,边缘清楚,大小不等,形态不一,部分相融成片,搔痒难忍,余查体同前.患者既往无药物过敏史,未曾用过黄芪注射液,自述近期未曾服过其他药物,故考虑黄芪注射液过敏.立即停用黄芪注射液,改输第2组液体,并予NS 10 mL,10%葡萄糖酸钙10 mL,iv,异丙嗪 25 mg,im,10 min后痒感逐渐消失,10 h后全身皮疹基本消退,无任何不适感觉.d 2未再予黄芪注射液,余治疗同前,未再出现类似反应.
-
ω-3鱼油脂肪乳在有创机械通气患者营养支持中的应用研究
目的 研究ω-3鱼油脂肪乳在有创机械通气患者营养支持中的作用.方法 32例机械通气患者随机分为研究组(17例)和对照组(15例),机械通气后的第2100053,北京,首都医科大学宣武医院呼吸科11 d,在常规治疗的基础上,分别给予10 d的等氮等热量肠外营养支持,其中研究组加入ω-3鱼油脂肪乳,对照组予常规营养支持.统计分析两组ICU住院时间、机械通气时间、呼吸机相关肺炎发生率、28 d病死率.结果 营养支持10 d后研究组ICU住院时间、机械通气时间、呼吸机相关肺炎发生率均比对照组降低(P<0.05),差异有统计学意义,研究组28 d死亡率较对照组下降,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 ω-3鱼油脂肪乳能有效减少有创机械通气患者的ICU住院时间及机械通气时间,降低呼吸机相关肺炎发生率.
-
缺氧对星形胶质细胞表达P450 2c11表达mRNA的影响
应用细胞培养、免疫组化、逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,观察缺氧和/或谷氨酸对体外培养的星形胶质细胞表达细胞色素P450 2c11mRNA的影响,探讨大脑星形胶质细胞在缺氧性脑血管扩张反应中的作用.实验用新生2-3 d Wistar大鼠,取双侧大脑皮层组织进行星形胶质细胞原代培养.细胞长成单层后,传代,将第二代细胞经抗GFAP免疫组化鉴定后,随机分为4组:①对照组;②谷氨酸组;③缺氧组;④缺氧+谷氨酸组.每一组包括5个时相点:0h、3h、6h、12h、24h(以缺氧后开始记时).于②和④组加入100μmol/L的L-谷氨酸.③和④组用95%N2/5%CO2进行缺氧.到规定时间后,提取细胞总RNA,进行TR-PCR扩增,电泳,凝胶扫描,测定产物积分光密度.结果:1.对照组和缺氧组各时相点星形胶质细胞P450 2c11 mRNA的表达量无显著差异.2.谷氨酸组P450 2c11 mRNA 6h开始显著增高,以后更为显著(24h内).3.缺氧+谷氨酸组P450 2c11 3h开始显著增高,以后更为显著(24h内).4.缺氧+谷氨酸组增高的幅度显著高于谷氨酸组.结论:谷氨酸可促使体外培养的星形胶质细胞P450 2c11 mRNA表达增多.单纯缺氧对体外培养的星形胶质细胞P450 2c11 mRNA表达无显著影响,但可使谷氨酸对星形胶质细胞P450 2c11 mRNA表达的上调作用增强.这一结果提示,缺氧和谷氨酸协同作用,使P450 2c11 mRNA表达增强,后者催化化生四烯酸生成环氧二十三烯酸,这可能是缺氧性脑血管扩张的重要机制之一.
-
内皮细胞对鼠骨髓造血细胞的增殖和分化作用
探索内皮细胞对小鼠骨髓造血细胞的刺激和诱导分化作用. 人脐静脉内皮细胞取自剖腹产后12hr以内的脐带.按Jaffe法进行培养,建立内皮细胞体外培养模型,收集原代培养的内皮细胞上清液(HECS).按本室常规方法制备骨髓有核细胞.在造血细胞半固体和液体培养体系中加入不同组合的重组造血因子,分为三组 :①粒系培养组加GM-CSF(德国BM公司),终浓度为20ng/ml.②红系培养组加入IL-3(美国SIGMA公司)与EPO(德国BM公司),终浓度分别为20ng/m l和2u/ml.③实验组加入内皮细胞培养上清液,以RPMI-1640为对照组.将上述体系接种于24孔板中,每孔1ml,培养7d,收集细胞,作细胞计数,台盼蓝拒染活力检测.细胞表面标记分析:选用抗红系或粒系的单克隆抗体CD71和CD13(美国 Coulter公司)作细胞表面标记检测.培养后细胞经PBS洗涤,取细胞悬液2~5 ×105细胞),加抗体1μl,4℃孵育30min,用PBS洗去没有标记上的抗体和FITC,重新悬浮细胞,用流式细胞仪(Coulter Elite Esp,美国Coulter公司)进行分析.用T检验分析实验数据以x±SD表示.结果:HECS对小鼠骨髓细胞形成各类造血祖细胞集落具有明显的刺激作用,能够提高BF U-E,CFU-E,CFU-GM集落产率,分别为43.04±5.80,148.7 5±32.20,104.67±9.92(P<0.05);HECS诱导细胞7d后, 细胞表面表达CD13为93.75±5.38,CD71为59.95±7.10(P< 0.05).实验组与阳性对照组基本一致,阴性对照组无集落形成和抗体表达.内皮细胞不但能够促进造血干祖细胞的增殖并且能够诱导其定向分析.以往对骨髓细胞的体外培养均采用琼脂或甲基纤维素半固体培养的方法,在用流式细胞仪进行分析时,由于难以去除琼脂或甲基纤维素对实验的干扰,造成对细胞表面抗原标记的困难,影响了实验的准确性.本实验将小鼠骨髓细胞进行体外液体培养,同时加入不同组合的重组造血生长因子,诱导造血干祖细胞向红系和粒系分析,为流式细胞仪分析细胞特异性抗原的表达提供了新的途径.