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扣带素--调节血管内皮细胞屏障功能的新靶点
血管内皮细胞间连接顶端的紧密连接是构成旁细胞屏障的重要结构。紧密连接由跨膜蛋白和胞浆蛋白组成,其中胞浆蛋白作为桥梁连接跨膜蛋白和细胞骨架蛋白,因此在决定紧密连接结构的完整性中发挥了重要的作用。然而目前,关于血管内皮中特异性表达的重要胞浆蛋白的研究仍十分有限。扣带素(cingulin)是1988年发现的一种紧密连接胞浆蛋白,已有研究表明 cingulin 在上皮细胞中参与调控紧密连接跨膜蛋白的表达以及细胞的增殖能力。然而,cingulin 在血管内皮中的作用尚不清楚。作者首先使用免疫组化和免疫荧光技术检测到人皮肤、脑和肺组织的血管内皮上存在 cingulin 特异性的表达,其与经典的紧密连接粘连蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)存在共定位。在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中过表达 cingulin 可增加紧密连接链的长度,增加跨内皮细胞电阻值,并降低分子量为376 Da 和70000 Da 荧光示踪分子的通透性;而在敲低 cingulin的小鼠内皮细胞中,低分子量荧光示踪分子的通透性显著增加,这提示 cingulin 可经促进紧密连接的形成进而增强内皮细胞的旁细胞屏障功能。进一步,作者在 cingulin 敲除小鼠中通过尾静脉注射生物素(作为旁细胞途径示踪分子)后发现,菱形窝下缘后区的神经元以及浦肯野细胞均呈现生物素阳性染色,提示在这些部位的血脑屏障受到了破坏。以上结果表明,cin-gulin 可调控血管内皮细胞的屏障功能,其机制与调节紧密连接结构的形成和稳定性有关,这为将来治疗脑和外周器官的血管渗透综合症提供了新思路。
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一种改良的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白分离方法的建立
目的 建立一种改良的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白分离方法,并对分离的蛋白组分进行分析和鉴定. 方法 分别用含不同盐浓度的裂解缓冲液和不同研磨次数提取核蛋白和胞浆蛋白,并利用针对不同组分特异性蛋白的抗体进行Western blot,分析分离效果. 结果 含50 mmol/L NaCl的裂解缓冲液和研磨100~150次为分离核蛋白和胞浆蛋白佳条件,恶性疟原虫醛缩酶胞浆蛋白和组蛋白3核蛋白的抗体Western blot、抗GFP抗体Western blot及活细胞免疫荧光检测均表明该方法效果良好. 结论 建立了一种快速、有效的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白的分离方法(裂解液盐浓度为50 mmol/L,研磨100~150次),为研究恶性疟原虫蛋白的胞内分布以及蛋白质/蛋白质/核酸相互作用提供了重要的技术手段.
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胞浆蛋白NOD1和NOD2在天然免疫中的作用
天然免疫系统存在于所有多细胞动物中,只有脊椎动物同时还具有获得性免疫系统.在微生物感染的早期,天然免疫反应为快速,能区别"自己"与"非己".但是病原体种类繁多,结构各异,而由胚系基因编码的识别分子数量有限,相对较少的识别分子较难识别众多的病原体.病原体在漫长的进化过程中保留着高度保守的结构基序,这些基序被称为病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP).PAMP可被有限的受体识别,这些受体称为模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRR).PRR识别PAMP后即启动天然免疫反应,并通过抗原呈递和共刺激信号为获得性免疫反应提供信号[1].因此,PRR在天然免疫中居于重要地位.
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Nrf2-Keap1抗氧化系统研究进展
Nrf2(NF-E2-related factor2)是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,生理状态下它与胞浆蛋白伴侣分子Keap1(Kelch-like ECH-associated protein1)结合使活性处于相对抑制状态.氧化应激源作用下,Nrf2与Keap1解偶连后转移入核,与抗氧化反应元件ARE(antioxidant response element)上GCTGAGTCA位点结合,启动ARE调控的第II相解毒酶及抗氧化酶基因表达,增加细胞对氧化应激的抗性.Nrf2缺失或激活障碍,可加重氧化应激源的细胞毒性,导致细胞功能障碍、凋亡甚至死亡.本文对Nrf2-Keap 1解偶连机制和Nrf2功能的新研究进展做一综述.
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Cav1.2钙通道GST-CT1蛋白片段与胞浆钙调蛋白提取纯化的比较
目的 对比分析心肌Cav1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同.方法 将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入E.coli BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯化,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定目的蛋白及其相对纯度,Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白和CaM蛋白的生物学活性.结果 采用超声破碎法,应用N-laurylsarcosine和Triton X-100处理后提取的GST-CT1融合蛋白浓度和纯度显著高于未用两者处理的对照组,而N-laurylsarcosine和Triton X-100对胞浆蛋白CaM的提取和纯化无明显影响.结论 细胞膜通道蛋白GST-CT1的提取和纯化方法与胞浆蛋白CaM存在明显差别.
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淋巴细胞胞浆蛋白1在免疫系统和肿瘤中的研究进展
细胞通过细胞骨架来运动、极化、分化和维持多细胞组织形态。而肌动蛋白是构成细胞骨架的基石,它可以被超过100种的肌动蛋白结合蛋白( Actin binding proteins ,ABPs)所不断地重构。淋巴细胞胞浆蛋白1( Lymphocyte cytosolic protein 1, Lcp1)作为一种肌动蛋白结合蛋白,主要通过与肌动蛋白互相作用来调控细胞运动,是直接控制细胞运动的主要细胞骨架结合蛋白之一;此外,其还参与宿主防御、免疫突触的形成、 T细胞的激活等。正常情况下,淋巴细胞胞浆蛋白1主要在造血来源的细胞中表达,而其却在多种恶性肿瘤细胞内存在异位高表达。淋巴细胞胞浆蛋白1在肿瘤细胞内的异位高表达同肿瘤的侵袭、转移密切相关,并且其表达高低等指标还可协助评估肿瘤患者的预后。本文主要对造血系细胞以及肿瘤细胞内淋巴细胞胞浆蛋白1的研究进展做一综述。
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转接蛋白是免疫信号转导中的重要调节子
转接蛋白(Adaptor)通常被定义为具有蛋白-蛋白或蛋白-脂质相互作用结构域,而不具备酶活性的分子,这些结构域通常指Src同源结构域2(SH2)、Src同源结构域3(SH3)和PH(Pleckstrin Homology)等.但许多酶也可被认为是转接蛋白分子,因为它们除具有酶活性外,也含有蛋白或脂质的结合域,如Src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)中的LYN既具有酶活性,也具有一个SH2和SH3结构域.此外,某些辅助受体,如配对的免疫球蛋白样受体B(PIRB)和CD19,也含有胞浆蛋白-蛋白相互作用域,因此也能被认为是转接蛋白.本文仅对几个新近发现的经典定义的转接蛋白分子做一概述.
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NOD1和NOD2:介导天然免疫的两种胞浆蛋白
NOD1和NOD2是新发现的一类参与天然免疫的胞浆蛋白质家族--核苷酸结合寡聚域样受体(the nucleotide binding oligomerization domain-like receptor, NLRs)中的两个重要蛋白受体,它们通过识别外源病原菌的模式抗原分子而激活NF-κB等核转录因子,启动相关细胞因子的基因表达,释放炎性因子和抗菌肽等, 其介导的信号通路在宿主抵御病原体感染的天然免疫中发挥着重要作用.
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自噬在干细胞衰老过程中的研究进展
自噬是一种细胞通过囊泡吞噬自身胞浆蛋白或细胞器形成自噬体,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解包吞的内容物成为氨基酸等基础物质的过程。细胞在饥饿、缺血缺氧或胞浆中出现变性的蛋白、衰老损伤的细胞器、活性氧( ROS)的累积时,都可诱导自噬的发生,通过消化回收代谢废物,实现细胞的自我调节和胞内物质的循环利用。干细胞具有增殖和分化成各种体细胞的潜能,是组织器官修复再生的基础,组织器官会随着成体干细胞的衰老出现生理功能的衰退,抑制干细胞的衰老将有利于延缓机体衰老。近年来多项研究发现,自噬在干细胞衰老的过程中具有重要的调节作用。本文将针对自噬在干细胞衰老过程中的作用及机制作一综述。
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FADD研究进展
FADD又名Mort1,它是一种死亡域蛋白,与Fas胞浆区呈特异性结合,故名Fas相关死亡域蛋白(Fas-associated with death domain protein)[1]:FADD是一种胞浆蛋白,死亡受体配体或激动抗体与细胞表面死亡受体结合后,募集FADD,构成信号复合体,转导凋亡信号,因此它在凋亡信息转导过程中起着中断作用,故认为它是一种适配子蛋白或连续蛋白(Adapter protein)[2].
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血清CKN和CEA对肺癌的临床诊断价值
血清细胞角质蛋白18片段(CKN)是存在于单层上皮细胞内的一种酸性胞浆蛋白,也是近两年研究较活跃的新的肿瘤标志物[1,2]。我们采取与癌胚抗原(CEA)平行对照方式探讨血清CKN检测对肺癌,特别是对肺鳞癌的临床诊断价值。
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不同固定方法对细胞免疫荧光染色结果的影响
目的 比较不同的固定方法对细胞内胞浆蛋白Vigilin和核蛋白CTCF的免疫荧光染色结果的影响.方法 在免疫染色前,分别采用四种方法对HepG2细胞进行固定及通透:①纯甲醇-20℃处理8min后,再用80%丙酮—20℃处理1min.②甲醇;丙酮的1∶1混合溶剂-20℃处理10min.③在方案2的基础上,再用0.1% Triton-X-100冰上通透10min.④4%多聚甲醛室温固定10min后,用0.1%%Triton-X-100冰上通透10min.结果 采用方案①、②、③、④得到的胞浆蛋白vigilin在细胞内的大致分布无明显差异,但用方案④处理后,染色效果更为清晰而能更好地观察到细胞的细微结构;另外,采用方案①和方案②处理细胞后,对核蛋白CTCF进行免疫染色,可见CTCF分布于胞浆;方案③中,在纯甲醇固定后,若用0.1 %Triton-X-100通透,则CTCF显示主要分布于细胞核内,胞质内亦有阳性染色;方案④的通透条件下,CTCF特异性分布于细胞核,胞质内几乎无阳性染色.结论 不同的固定及通透方法对免疫染色的结果影响很大,应针对抗原特点,采用适宜的固定方法,以得到正确的实验结果.
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不同龄SD大鼠脑和肝脏胞浆蛋白质含量的比较研究
细胞浆内的蛋白质既是细胞的结构组分,又是细胞的功能组分.随着年龄的变化细胞的功能发生改变,胞浆内蛋白质的含量也有所改变.金国琴等[1,2]报道SD大鼠5月龄和24月龄肝脏胞浆蛋白含量后者显著低于前者,但未见其他组织胞浆蛋白含量变化的报道.我们测定了幼年、成年和老年SD大鼠大脑皮层、小脑、脑干和肝脏细胞浆内蛋白质的含量,以观察其变化.
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病理妊娠与细胞凋亡
细胞凋亡(apoptosis)是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式,又叫细胞程序性死亡(programmed cell death, PCD).它是由膜受体和细胞浆蛋白所执行的一系列级联反应事件,于1972年由Kerr等[1]首次提出这个概念.目前人们对凋亡的认识已经达到分子和基因水平,涉及凋亡的分子和基因繁多,调控机制复杂.细胞凋亡与组织器官的发育和机体正常生理活动的维持有关,在正常妊娠孕卵的着床和胚胎的发育方面起着重要作用.已有研究表明,细胞凋亡的出现及异常表达可能导致病理妊娠,如妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertention, PIH)、流产、胎儿宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation, IUGR)等[2].本文就细胞凋亡与妊娠之间的关系综述如下.