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绝对不应期电刺激对正常豚鼠和慢性心力衰竭豚鼠心室肌细胞动作电位及钠离子——钙离子交换的影响
目的:探讨绝对不应期电刺激(ARPES)对正常豚鼠和慢性心力衰竭(衰竭)豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)及钠离子-钙离子(Na+-Ca2+)交换的影响.方法:应用膜片钳技术中电流钳记录ARPES对AP时程的影响,再以不同的AP电压钳记录细胞膜Na+-Ca2+交换电流.结果:①ABPES延长AP时程,以APD30为显著(P<0.01),差异有统计学意义.②与正常豚鼠心室肌细胞比较,衰竭豚鼠心室肌细胞AP的平台期明显不同,表现在APD90变化(P<0.05)及APD50变化(P<0.01),差异有统计学意义.③分别以基础刺激(S1)下的AP(APS1)和ARPES下的AP(APARPES)为测试电压,记录AP电压钳下的细胞膜Na+-Ca2+交换电流,在正常豚鼠心室肌细胞,APARPES电压钳记录的单位膜电容下的外向电流强度的整合值高于APS1电压钳记录的相应值,而单位膜电容下的内向电流强度的整合值无显著变化.在衰竭豚鼠心室肌细胞,APARPES电压钳记录的单位膜电容下的外向电流强度的整合值明显高于APS1电压钳记录的相应值,而单位膜电容下的内向电流强度的整合值无显著变化.外向电流峰值的增加更为明显.结论:ARPES延长正常豚鼠和衰竭豚鼠心室肌细胞AP时程,对心室肌细胞膜Na+-Ca2+交换电流的影响可能是其增强整体心脏收缩功能的机制之一.
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神经介素 B 对大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道调节及机制研究
目的:研究神经介素 B(NeuroB)对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道的调节及信号转导机制。方法应用 RT-PCR 及 Western blot 方法研究 NeuroB 受体 mRNA 及蛋白在成年大鼠心室肌细胞中的表达。应用 ELISA 方法检测 NeuroB 对心室肌细胞中 cAMP 含量的影响。应用全细胞膜片钳技术研究 NeuroB 对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道电流(IL )的作用,并应用药理学方法阐明其信号转导机制。结果 NeuroB 受体在成年大鼠心室肌细胞中呈高表达。 NeuroB 对大鼠心室肌细胞 IL 具有量效依赖性的增加作用。蛋白激酶 A(PKA)阻断剂 KT-5720能够抑制 NeuroB对该 IL 的增强作用,但蛋白激酶 C(PKC)阻断剂 GF109203X 却无任何效应。 NeuroB 可浓度依赖性增加心室肌细胞中 cAMP 含量水平。结论 NeuroB 对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙通道 IL 具有剂量依赖性的增强作用,该作用是通过 NeuroB 受体激活及下游 PKA 激酶途径起效。
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缝隙连接蛋白43与心律失常的研究进展
缝隙连接是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,心室肌细胞中主要表达为连接蛋白43(connexin43,Cx43),缝隙连接蛋白在维持心肌细胞的连接通讯功能,电信号传导和正常的节律性的收缩中起重要作用;Cx43的空间分布、数量、结构的异常均能影响缝隙连接电荷耦联和代谢耦联的功能,导致心律失常的发生,提示Cx43可能成为心律失常治疗的新靶点[1]。本文就缝隙连接蛋白43与心律失常的关系做一综述。
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氨基末端脑钠肽前体与急性心肌梗死的究进展
脑钠肽(brain natriuretic peptide/B-typenatriuretic peptide,BNP)是利钠肽家族中研究为深入的一种神经激素,在心脏结构和功能的维持中起着重要作用.当心室肌细胞压力负荷增加时合成分泌含134个氨基酸残基的前脑钠肽原,其后被迅速剪切掉含有26个氨基酸残基的信号肽,形成BNP前体,随后前体在血液中分解成具有生物活性的BNP和无生物活性的氨基末端脑利钠肽前体(N-terminal pro-BNP,NT-proBNP ).
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选择性晚钠电流抑制剂在治疗房性心律失常中的应用前景
晚钠电流抑制剂具有抗室性心律失常作用,特别在心室肌细胞复极时间延长,相关的心律失常疗效明确,而且与传统钠通道阻滞剂(Ⅰ类抗心律失常药)相比,仅有较低的致心律失常作用。近年来的基础与临床研究表明选择性晚钠电流抑制剂在房性心律失常的治疗中也有疗效,单纯抑制晚钠电流的药物在治疗房性心律失常的同时,心室的安全性高,不增加心律失常性病死率,有可能成为未来房性心律失常治疗的新方向。
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二十二碳六烯酸对心室肌细胞离子通道的影响
近年来,n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFAs)对心血管的有益作用已受到广泛重视.大量研究表明n-3PUFAs具有抗心律失常作用,能降低冠心病的猝死率及心肌梗死后恶性心律失常的发生率[1].基于这些研究结果,在心血管疾病的一级和二级预防中,美国和欧洲等心脏病学会推荐每日摄入小剂量n-3PUFAs[2].目前,n-3PUFAs抗心律失常的机制仍不完全清楚.n-3PUFAs主要包括二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA).本文通过膜片钳技术探讨DHA对大鼠心室肌细胞静息电位(RP)、动作电位时限(APD)、延迟整流性钾通道电流(IK)及内向整流性钾通道电流( IKl)的影响,阐述DHA抗心律失常的可能机制.1.材料和溶液组成:Axopatch 700B膜片钳放大器、Digi-Data 1322型数/模(或模/数)转换器、pClamp 9.0脉冲发放和数据采集软件(美国Axon Instruments公司).DHA(美国Sigma公司)以无水乙醇配制成50 mmol/L的母液,分装避光保存于-80℃备用.使用时无水乙醇的终浓度<0.4%,以避免无水乙醇对离子通道的影响.牛血清白蛋白(BSA,美国Sigma公司)配制成2 mg/ml,4℃保存.
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硫酸奎尼丁对乳大鼠心室肌细胞Kv4.3基因mRNA水平表达的影响
目的 探讨硫酸奎尼丁对乳大鼠心室肌细胞Kv4.3基因mRNA水平表达的影响及其治疗Brugada综合征的分子机制.方法将乳大鼠心室肌细胞随机分为对照组及硫酸奎尼丁干预组,培养至24、48、72 h,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Kv4.3基因mRNA表达的变化.结果 干预至24 h对Kv4.3基因mRNA水平表达无明显影响;至48 h,各干预组较对照组显著降低(P<0.05),且5与10 μmol/L组较1 μmol/L组下调作用更为显著(P<0.05);至72 h,各干预组较对照组显著降低(P<0.05),而各干预组间差异无统计学意义.结论 硫酸奎尼丁可显著下调Kv4.3基因mRNA水平表达,且较长时间干预时低浓度与较高浓度下调的幅度相近.
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盐酸关附甲素对豚鼠心室肌细胞膜钠通道的阻断作用
目的 研究盐酸关附甲素(GFA)对分离的单个豚鼠心室肌细胞钠电流(Ina)的影响,旨在探讨其抗心律失常机制.方法 用急性酶解法分离获得单个豚鼠心室肌细胞.用标准的全细胞膜片钳技术记录离子通道电流,观察不同浓度的GFA对豚鼠心室肌细胞Ina的影响.结果 在测试电压-20 mV的条件下,50、150、500、750 μmol/L GFA使Ina峰值电流密度与用药前比较分别降低了24.24%±2.78%、42.84%±1.39%、61.23%±1.34%和100%±0,各浓度用药前后对比差异均有统计学意义,P<0.05;GFA对Ina半数抑制浓度(IC50)为184.38 μmol/L;150 μmol/L GFA使Ina的电流密度-电压(I-U)曲线上移,但不改变其激活、峰值和反转电位,不影响Ina的稳态激活曲线;150 μmol/L GFA使Ina的稳态失活曲线左移,即向更负的方向移动;150 μmol/L GFA使Ina的失活后恢复曲线明显右移,明显减慢钠通道失活后恢复过程;150 μmol/L GFA抑制Ina呈使用依赖性.结论 GFA在50~750 μmol/L范围内对Ina具有浓度依赖性阻滞作用,而且该作用具有使用依赖性;GFA对钠通道激活态无影响;GFA抑制Ina是作用于失活态而发挥作用;GFA减慢钠通道失活后恢复过程.GFA对Ina的阻滞作用为其抗心律失常作用的主要机制.
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L型钙通道在LQTl发病机制中作用的实验研究
目的 分析L型钙电流(IcaL)在犬三层心室肌细胞中的特点,探讨其在LQTl发病机制中的作用.方法 成年杂种犬14只,体重13~15 kg,雌雄不拘.分离犬三层心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP)和ICaL,依次用Chromanol 293B(50ìμmoL/L)阻断慢激活延迟整流性钾电流(IKs)模拟LQTl,用异丙肾上腺素(100 nmo/L)激活13肾上腺素受体(β-AR),观察AP和,ICaL的变化.分三层取少量心室肌组织,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测各层L型钙通道a1C亚单位的mRNA含量.结果 正常情况下,犬三层心室肌细胞ICaL电流密度差异无统计学意义[外层(4.253±0.782)pA/pF,中层(4.392±0.714)pA/pF,内层(4.182±0.665)pA/pF,P>0.05],而中层心室肌细胞动作电位时限(APD)较内层和外层的长[外层(721.48±26.59)ms,中层(911.80±31.24)ms,内层(783.52±25.27)ms,P<0.05];阻断IKs后ICaL电流密度没有变化,而APD均明显延长[(外层(835.21±27.34)ms,中层(1089.21±30.55)ms,内层(830.64±27.12)ms,与阻断IKs前相比,P<0.05)];β-AR兴奋使三层心室肌细胞ICaL显著增加,且三者变化差异无统计学意义[(外层(5.654±0.756)pA/pF,中层(5.458±0.702)pA/pF,内层(5.600±0.819)pAZpF,P>0.05].但β-AR兴奋使外层和内层心室肌细胞APD缩短,中层心室肌细胞APD延长,三者变化差异有统计学意义[外层(792.63±26.71)ms,中层(1127.85±32.10)ms,内层(811.32±27.52)ms,P<0.05].实时定量RT-PCR结果显示,三层心室肌细胞中alC亚单位的mRNA含量差异无统计学意义(外层0.112±0.019,中层0.077±0.018,内层0.109±0.012,P>0.05).结论 L型钙通道在犬三层心室肌中的分布没有差异,在LQTl模型中,Iso使三层心室肌细胞,ICaL均匀增加,推测ICsL本身没有引起LQTl复极不稳定.
关键词: 心室肌细胞 L型钙电流 慢激活延迟整流性钾电流 β肾上腺素受体 长QT综合征 -
兔心室肌细胞非特异性阳离子流的描述
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卡维地洛对豚鼠心室肌细胞离子流的研究
卡维地洛是临床上广为应用的非选择性β受体、选择性α1受体阻滞剂,在动物实验和临床研究中都显示具有抗心律失常作用,本研究系统地观察卡维地洛对豚鼠心室肌细胞离子流的直接影响,探讨其细胞电生理作用.
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Quinidine对豚鼠心室肌细胞Ikr抑制作用的研究
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兔急性心肌梗死后24小时心室肌细胞离子通道电流的变化
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急性低氧对家兔心室肌细胞钙通道及钾通道电流的影响
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心力衰竭患者抗β1肾上腺素能受体的自身抗体阳性血清对豚鼠心室肌细胞延迟整流性钾电流及其尾电流的影响
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缬草单萜氧化物对单个兔心室肌细胞钠通道的影响
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Quinidine对豚鼠心室肌细胞Iks抑制作用的研究
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动脉平滑肌细胞和心肌细胞钾通道的膜片钳全细胞记录技术
目的:介绍一种动脉平滑肌、心室肌细胞急性酶分离方法,并在该分离技术的基础上采用膜片钳全细胞记录方式研究细胞钾离子通道的特性.方法:采用胶原酶Ⅰ(1mg/ml)、木瓜蛋白酶(5mg/ml)消化分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞;用链霉蛋白酶E(1mg/ml)、胶原酶Ⅰ(1mg/ml)消化分离大鼠尾动脉平滑肌细胞;用链霉蛋白酶E(0.5mg/ml)灌流消化、分离得到豚鼠心室肌细胞.结果:以上分离的细胞数量多,形态正常,胞壁光滑完整,活性好.于4℃无钙液中保存,8h内可用于膜片钳全细胞记录.记录出的外向电流可被钾通道阻断剂CsCl及TEA所阻断.结论:用酶急性分离的动脉平滑肌和心室肌细胞应用于膜片钳研究中具有快速、经济、简便易行等优点.
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新型阻断剂KB-R7943对心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的影响
目的观察Na+/Ca2+交换蛋白的新型阻断剂KB-R7943对小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)的影响.方法采用打孔膜片钳全细胞技术,记录急性分离的单个小鼠心室肌细胞INa/Ca,观察KB-R7943对INa/Ca的作用.结果细胞外灌流含钙溶液,可引导记录出INa/Ca.该电流能够被5mmol·L-1 Ni2+阻断;且能被KB-R7943所抑制.KB-R7943对INa/Ca的抑制作用呈剂量依赖性,尤以外向电流敏感.在+50mV,0.3、1μmol·L-1的KB-R7943对INa/Ca的抑制率分别达到(63±5)%和(98±1)%(P<0.01).结论小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换的外向电流能够被KB-R7943抑制,且该抑制作用呈剂量依赖性,提示该药物能够抑制Na+/Ca2+交换蛋白的逆向转运活动,在预防和减轻细胞内的Ca2+超载中可能具有重要作用.
关键词: Na+/Ca2+交换电流 KB-R7943 心室肌细胞 膜片钳 -
缓慢型心律失常的治疗原则
正常情况下,人类心脏的起搏点位于窦房结,每天窦房结有规律地产生约计10万次的激动,并将其传导至左、右心房组织,经过结间束及房间传导束,将窦房结产生的激动传导至房室结区,该区是连接心房和心室的特殊部位,又称交界区,在房室结区激动传导速度减缓,而后经过房室束(希氏束)至室间隔肌部顶端,再传入心室,经左、右束支至与心室肌细胞相连的蒲倾野氏纤维,传达到心室工作细胞上,使心脏按一定节律收缩和舒张,维持人体正常的血液循环.在前述传导通路上任何部位出现生理性或病理性改变,都将出现不同类型不同程度的心律失常,本文主要介绍缓慢型心律失常的治疗.