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低浓度的哇巴因引起豚鼠心室肌细胞内钙增高的可能途径
目的 观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.方法 酶解分离豚鼠心室肌细胞,负载Fluo3-AM,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca2+]i的荧光密度,结果 用相对荧光强度(FI-FI0)/FI0(%)表示,其中,FI0:给药前的荧光密度值,FI:给药后的荧光密度值.结果 在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(1×10-9～1×10-6 mol·L-1)浓度依赖性地升高细胞内钙浓度,在正常台氏液分别为16.7±6.8(P＜0.01)、26.0±4.7(P＜0.01)、183.0±101.0(P＜0.01)、295.0±172.0(P＜0.01),而在无钙台氏液中OUA升高[Ca2+]i不如在正常台氏液中,分别为9.19±4.73(P＜0.05)、20.75±5.2(P＜0.05)、85.79+64.7(P＜0.05)、231.0±26.0(P＜0.05).肌浆网钙通道抑制剂理阿诺碱Ryanodine(1×10-5 mol·L-1)可部分抑制正常台氏液时OUA的效应5.3±2.1(P＜0.01).在无钠无钾台氏液中,OUA(1×10-9～1×10-6 mol·L-1)对心室肌细胞[Ca2+]i的影响分别为16.5±6.5、25.0±5.0、162.0+45.0、280.0±96.0与正常台氏液比较无差别(P＞0.05).蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST;1、10、50、100 μmol·L-1)可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的0UA效应,分别为17.5±3.1、14.2±8.9、0.8±7.6(P＜0.05)、-1.9±6.7(P＜0.01).L-型钙通道激动剂Bay K8644,肌浆网钙通道开放剂Ryanodine(1×10-7 mol·L-1)在正常台氏液中均可提高[Ga2+]i为13.3±3.2(P＜0.05)、6.4±5.6(P＜0.05).三羟异黄酮可取消其效应为-13.0+21.0(P＜0.01)、-1.6±5.9(P＜0.01).结论 低浓度的OUA升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度,此作用与其开放钙通道及促进内钙释放有关,且信号转导通过此二途径起作用.
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Dofetilide对成年豚鼠心室肌细胞钠钙交换的影响
目的研究dofetilide 对豚鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的影响.方法酶法分离成年豚鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳方式、斜坡电压刺激程序(从钳制电位 -40 mV 去极化至 +60 mV, 然后以90 mV/s的速率超极化至 -120 mV)记录Na+/Ca2+交换电流(Ina/Ca)及dofetilide 0.03～1.0 μmol·L-1对该电流的影响.结果 dofetilide 0.03～1.0 μmol·L-1浓度依赖性地增强Na+/Ca2+交换外向及内向电流,对外向电流的EC50(50%大效应浓度)为0.178 μmol·L-1(95%可信限为0.040～0.787 μmol·L-1),对内向电流的EC50为0.178 μmol·L-1 (95%可信限为0.038～0.842 μmol·L-1).结论 dofetilide对豚鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换外向及内向电流均有浓度依赖性的明显增强作用.
关键词： dofetilide 钠钙交换 心室肌细胞 膜片钳 -
药物相关性尖端扭转型室性心动过速性别差异的离子通道研究
目的探讨药物相关性尖端扭转型室性心动过速(TdP)发生率性别差异的离子流基础.方法♀、♂兔各20只,酶解法分得左室心尖部单个细胞,应用全细胞膜片钳技术记录APD、Ito、 IK、IK1和ICa,L.结果♀、♂兔心肌细胞膜电容差异无显著性(P>0.05).♀兔APD90(560.4± 26.5 ms,n=15)比♂兔APD90(489.0±20.7) ms ,n=14长(P<0.05).IK,tail、Ito、IK1和ICa,L在♀兔分别为(0.71±0.05) pA/pF、n=17,(8.28±1.03) pA/pF、n=18,(24.5±3.6) pA/pF、 n=12,(9.0±2.3) pA/pF、 n=15,在♂兔分别为(0.84±0.07) pA/pF、n=18,(8.60 ± 1.20) pA/pF、n=18,(25.9±4.5) pA/pF、n=14,(9.3±2.6) pA/pF、n=16.♀兔IK,tail明显低于♂兔(P<0.05),而Ito、IK1和ICa,L在♀、♂兔差异无显著性(P>0.05).结论♀兔IK,tail较低可能是♀兔APD90较♂兔长及更易发生药物相关性TdP的原因.
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腺苷对模拟缺血再灌注豚鼠心室肌细胞动作电位的影响及其离子机制
目的研究腺苷(Ado)在模拟缺血缺氧时对豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙电流(ICa.L)和ATP敏感性钾电流(IK.ATP)的影响.方法在离体豚鼠心室肌和酶解法分离的单个豚鼠心室肌细胞上,分别应用细胞内微电极和全细胞膜片钳技术记录动作电位和电流.结果在模拟缺血缺氧状态下,Ado剂量依赖性的增大动作电位时程(APD)的缩短(P<0.05);抑制再灌注后APD恢复,而表现出迟后恢复.在缺血缺氧状态下,ICa.L受到抑制,Ado并不加重心肌细胞缺血缺氧时ICa.L的减小,而再灌注后ICa.L的恢复比较缓慢,但同对照组比较无差异.Ado可加速缺血缺氧时IK.ATP的激活,Ado(100 μmol*L-1)组在缺血缺氧时和再灌注后IK.ATP较对照组均明显增大.结论在缺血缺氧状态下,Ado可增大APD的缩短,抑制再灌注后APD的恢复,其机制主要在于在缺血缺氧状态下Ado增大了IK.ATP.
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藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响
目的研究藻酸双酯钠(PSS)对豚鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响.方法采用全细胞膜片钳记录技术.结果 PSS明显缩短动作电位时程(APD),50、100和200 mg*L-1浓度,分别使APD90缩短24.9%(P<0.05,n=6)、37.7%和47.7%(P<0.01,n=6),使APD50缩短21.1%(P<0.05,n=6)、45.0%和63.2%(P<0.01,n=6),呈明显的剂量依赖关系.PSS浓度依赖性减小L-型钙电流(Ica-L),50、100和200 mg*L-1浓度,分别使其峰值降低34.3%(P<0.05,n=6)、58.4%和74.9%(P<0.01,n=6).随着PSS浓度的增加,L-型钙电流的I-U曲线逐渐上移,但其大激活电压保持为0mV不变.结论 PSS明显缩短APD,抑制Ica-L,且呈浓度依赖关系.
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前列腺素E1对豚鼠心室肌细胞ATP敏感K+通道的影响
目的从离子通道水平,探讨前列腺素E1 (PGE1)对ATP敏感K+ (KATP)通道的作用.方法膜片钳制技术全细胞记录模式.结果PG E1可诱导KATP通道开放并呈浓度依赖关系.保持电位-40 mV,指令电位+20 mV,持续时间1 s条件下,,10 μmol@ L 1 PGE1使外向K+电流由给药前的(2.27±0.34)nA增加到(5.46±0.34)nA(n=6,P＜0.01),增加了(3.18±0.23)nA.并且增加的钾电流可被KATP通道特异阻断剂Glibenclamide ( 10 μmol@ L- 1 )抑制,抑制率是63%±7%(n=5,P＜0.01).结论 PGE1可开放豚鼠心室肌细胞KATp通道.
关键词： 前列腺素E1 ATP敏感性K+通道 心室肌细胞 膜片钳制技术 -
前列腺素E1预处理对豚鼠缺血/再灌注心室肌细胞钾通道的影响
ATP敏感钾通道和延迟整流钾通道在心肌缺血预适应及心肌电活动中分别发挥着重要作用,但这两个通道在前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)预处理抗心肌缺血/再灌注损伤的保护机制中有何作用未见报道,本实验应用全细胞膜片钳技术研究PGE1预处理对缺血/再灌注心肌细胞IK(ATP)和IK的影响,探讨其心肌保护作用机制.
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快律宁胶囊及其含药血清对大鼠心室肌细胞钙离子浓度的影响
目的：研究快律宁胶囊（KLN）含药血清对大鼠心室肌细胞钙离子（Ca2＋）浓度的影响。方法将 SD 大鼠采用数字表法随机分为空白对照组、血清对照组、KLN 高、中、低剂量组，每组各6只，用酶解法急性分离大鼠心室肌细胞，采用 Fluo-3／AM荧光探针测定不同浓度的 KLN 及其含药血清对单个大鼠心室肌细胞内 Ca2＋浓度的影响，比较不同组别 Ca2＋浓度。结果与对照组比较，KLN 高、中、低剂量组在50 s、100 s、150 s、200 s、250 s 后胞浆 Ca2＋平均荧光强度分别为[（18．75±1．55）、（16．69±0．93）、（17．76±1．26）]，[（25．47±1．118）、（17．86±1．49）、（17．81±1．13）]，[（29．05±1．31）、（20．14±1．73）、（18．26±1．37）]，[（35．21±1．33）、（23．19±0．97）、（18．18±1．46）]，[（41．08±1．21）、（26．34±1．69）、（17．91±1．01）]，均明显高于对照组（F ＝5．556、7．007、8．816、10．208、12．232，均 P ＜0．01）。与对照组相比，KLN 高剂量含药血清组50 s、100 s、150 s、200 s、250 s 后胞浆 Ca2＋平均荧光强度分别为（17．85±1．69）、（18．95±1．73）、（21．85±1．39）、（23．01±1．48）、（24．07±1．42），明显高于血清对照组（t ＝3．642、4．406、6．074、7．402、8．625，P ＜0．01），中剂量含药血清组100 s、150 s、200 s、250 s 后胞浆 Ca2＋平均荧光强度分别为（18．01±1．42）、（18．76±1．22）、（19．73±1．37）、（21．04±1．16），明显高于血清对照组（t ＝3．902、4．033、4．126、4．326，均 P ＜0．01），而 KLN 低剂量含药血清组对 Ca2＋平均荧光强度的影响差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论 KLN 含药血清能促进心肌细胞自发的外钙内流，说明 KLN 含药血清具有抗心律作用且其与对 Ca2＋通道的作用有关。
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脑钠肽在血液透析患者心功能不全诊治中的价值
脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)是由心室肌细胞合成和分泌的一种多肽类激素.其具有保持血容量稳定状态的生理功能,是心血管系统生理功能的重要调节因子.本研究通过测定60例慢性肾功能衰竭伴有心功能不全者透析前后血清BNP的变化与心功能参数对照分析,旨在探讨BNP与慢性肾功能衰竭血液透析患者心功能不全的关系.
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无创机械通气对肺原性心脏病伴呼吸衰竭患者脑钠肽水平的影响
无创机械通气是指在不建立人工气道的条件下,通过使用面罩或者鼻罩来进行机械通气的一项技术,主要起到辅助通气泵的作用,可以在很大程度上使患者呼吸肌疲劳得到缓解.血浆脑钠肽(BNP)是一种主要由心室肌细胞合成分泌的一种激素,对于人体正常心血管系统的自身稳定起着重要的作用,主要对容量和压力的变化较敏感[1].本研究观察无创机械通气对肺源性心脏病伴呼吸衰竭患者脑钠肽水平的变化,现将结果报告如下.
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芪参益气滴丸对急性心肌梗死大鼠脑钠肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽影响的实验研究
脑钠肽(BNP)主要起源于心室,由心室肌细胞合成和分泌,影响BNP分泌的关键在于心室容量负荷引起的心室压力及室壁张力的改变.本研究于2006年8月至2007年8月通过对大鼠急性心肌梗死AMI模型给予芪参益气滴丸早期干预治疗,观察治疗后脑钠肽(BNP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(P Ⅲ NP)的变化,
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豚鼠左心室不同区域细胞Iks电流对缺血反应的差异
目的:研究缺血时豚鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞缓慢激活延迟整流钾通道电流(Iks)的变化特性.方法:利用全细胞膜片钳技术观察豚鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks变化,利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境,观察Iks尾电流锋值的变化情况.结果:缺血时,三层细胞Iks均小于正常状态;指令电压小于0 mV时,三层细胞Iks同步减小,减少率无显著性差异,P>0.05.指令电压≥0 mV时,M细胞Iks减少程度明显高于心内、外膜细胞,P<0.05;而心内、外膜细胞减少率无显著性差异,P>0.05.结论:缺血时左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks减弱,而M细胞Iks减弱更为明显,这可能会增加心室壁电活动不均一性,诱发心律失常.
关键词： 心室肌细胞 缺血 缓慢激活延迟整流钾通道电流 心律失常 -
豚鼠M细胞缓慢激活型延迟整流钾电流对缺血的反应
目的:研究缺血对豚鼠心室M细胞缓慢激活型延迟整流钾通道电流(Iks)的影响.方法:利用全细胞膜片钳技术观察豚鼠心室M细胞Iks,利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境,观察Iks尾电流锋值的变化情况.结果:指令电压≥0mV时,缺血组电流显著小于正常组,P<0.05;指令电压小于0mV时,两组间无显著性差异,P>0.05.结论:缺血时M细胞Iks显著减弱,可能会增加心室壁电活动不均一性,促使心律失常的发生.
关键词： 心室肌细胞 缺血 缓慢激活延迟整流钾通道电流 心律失常 -
血清N端脑钠肽前体，心肌肌钙蛋白T及超敏C反应蛋白水平变化对心力衰竭患者诊断的临床意义
心力衰竭是由各种心血管疾病发展所致的终末期症状，主要表现为不同程度的肺循环及体循环淤血、呼吸困难、乏力、水肿及体力活动受限。患者的生活质量较差，死亡率较高，早期诊断和早期临床干预对于改善心力衰竭患者的预后有重要的临床意义[1]。N端脑钠肽前体(NT-proBNP)是心室肌细胞在受到牵拉或心室容量负荷增加时所分泌的一种多肽，由32个氨基酸组成，半衰期长，可在早期反映心肌损害[2]。血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)目前被广泛应用于急性心肌梗死和心肌炎的诊断，是心肌损伤的特异性生物标志物。另外cTnT表达水平的变化也可反映疾病的病理生理过程，在心力衰竭中也具有一定的诊断价值。超敏C反应蛋白(hs-CRP)是由肝脏合成的一种高敏感急性时相反应蛋白，在心肌损害发生早期即可出现表达升高，目前被认为是心血管事件的独立预测因子[3]。我们通过检测不同心功能分级患者血清中NT-proBNP、cTnT及hs-CRP的表达水平，探讨各项指标与心力衰竭严重程度的相关性，分析其在心力衰竭患者的分期及预后方面的临床应用价值。
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微量元素对心室肌细胞保护机制的研究进展
自1869年,锌被发现是真核生物所必需的微量元素以来,微量元素与机体组织细胞结构和功能的关系被人们重视,特别是近年来,人们对微量元素与机体生命活动之间的关系研究越来越多.现就微量元素与心室肌细胞间的保护作用综述如下.
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可达龙治疗心肌梗死并发室性心律失常40例疗效观察及护理体会
急性心肌梗死后心室肌细胞形成电重构,缺血区心肌细胞动作电位时程缩短,缺血区与非缺血区之间不同部位的心室肌之间可产生电不均一性,易致折返激动,使室性心律失常的发生率增加,此为心肌梗死后发生猝死的主要原因之一.
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乳酸司帕沙星对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响
目的:观察乳酸司帕沙星(SPX)对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响.方法:采用酶消化方法分离单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IK,观察不同浓度SPX(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和1 000 μmol/L)对IK的影响.结果:除0.1 μmol/L外,SPX浓度分别为1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 000 μmol/L时IK的脉冲电流和尾电流较正常心室肌细胞脉冲电流和尾电流均减少(P＜0.05或0.01).SPX明显抑制了IK的脉冲电流和尾电流(P＜0.05),SPX的量效关系曲线显示SPX的IC50为14.89 μmol/L. 结论:SPX能浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞IK,提示高浓度SPX有引发心律失常的潜在不良反应.
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膜片钳技术研究中钙耐受的心室肌细胞分离方法
目的:探索并建立适合于膜片技术研究的心室肌细胞急性酶分离方法.方法:采用改进的自制的Langendorff心脏灌流系统,用无钙Tyrode液和酶解液逆行主动脉灌流之后,分次剪取心肌组织置于细胞保存液(KB液)中保存以供全细胞膜片钳方式记录膜电位和膜电流.结果:分离所得80％～ 90％的细胞呈杆状,边缘清楚,表面光滑,纹理清晰,可记录到典型的动作电位.结论:控制好分离心室肌细胞的实验条件以及熟练掌握实验操作的方法,是分离出适合于膜片钳实验的心室肌细胞的重要因素.
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发育和成熟大鼠心室肌细胞α-actinin和myomesin的表达及意义
目的 观察发育和成熟大鼠心室肌细胞中α-辅肌动蛋白(α-actinin)和myomesin分布、强度和面积百分比增龄变化,探讨其生物学意义.方法 选择胎鼠(孕约19 d)、新生(9 d)、青年(8个月)、老年(14个月)的SD大鼠,采用免疫组织化学技术研究不同年龄段大鼠心室肌细胞中α-actinin和myomesin表达部位和强度差异,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理.结果 从发育到成熟阶段,α-actinin逐渐由肌浆中均质弥散分布转变为短棒状分布,新生鼠阳性表达强度和面积百分比与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);Myomesin表达部位及特点与α-actinin相似,新生鼠表达强度与青年和老年鼠相比筹别具有统计学意义(P<0.05),新生鼠阳性面积百分比与其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠心室肌组织发育和成熟过程中,α-actinin和myomesin逐渐由胞浆内弥散分布转变为有规律的点状分布,不同年龄段表达强度和密度不同,这可能与肌组织行使功能和机体血流动力改变相关.
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藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用
目的:观察藻酸双酯钠(Polysaccharide sulfate,PSS)对豚鼠单个心室肌细胞离子流的影响.方法:采用Ⅰ型胶原酶分离单个豚鼠心室肌细胞的方法,利用全细胞膜片箝记录技术,在不同箝制条件下,记录并分析了PSS对L型Ca2+电流(ICa,L)、内向整流K+电流(k1)的影响.结果:①PSS使Ica.L的激活时间常数变大,电流幅度减小,I-V曲线上移.在箝制电位为+10 mV时,PSS在6～9 min内使Ica.L的激活时间常数从(0.92±0.10)ms增加到了(1.15±0.11)ms(n=5,P＜0.052);Ica.L的电流幅度从(16.80±1.71)pA/pF下降至(13.86±1.67)pA/pF(n=5,P＜0.01).②PSS可使Ik1的内向成分和外向成分均增加.当箝制电位在-170 mV时,PSS能使IK1内向电流幅度从(224±16.17)pA/pF增加至(257±17.36)pA/pF(n=7,P＜0.01);箝制电位在-50 mV时,PSS使Ik1的外向电流幅度从(8.89±0.86)pA/pF增加至(10.38±1.18)pA/pF(n=7,P＜0.05).在反转电位附近时(-70～-120 mV),PSS的作用不明显.PSS能使Ik1的激活时间常数减小,当箝制电位在-160 mV时,激活时间常数从加药前的(1.05±0.11)ms减小到了加药后的(0.78±0.90)ms(n=7,P＜0.01);同时,IK1的电导值变大,从(2.53±0.17)nS/pF增加到了(2.82±0.20)nS/pF(n=7,P＜0.05).结论:PSS对L-型Ca2+电流有抑制作用,对内向整流K+电流有加强作用.
