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抗早熟中药对青春期大鼠下丘脑相关基因的作用与影响
目的抗早熟中药对青春期大鼠下丘脑相关基因的影响.方法设立对照组,采用荧光定量PCR法,检测小、中、大三组不同剂量中药对于青春期大鼠下丘脑相关基因的影响.
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荧光定量聚合酶链反应检测多种泌尿生殖道病原体感染分析
性传播疾病(sexually transmitted diseases,STD)是一类以性接触为主要传播方式的泌尿生殖道感染疾病。STD病原体主要有以下几种:沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(Uu)、淋球菌(NG)、人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)、部分真菌等。其中CT、Uu、NG是3种常见的性传播疾病的病原体,我们将此3种病原体作为主要研究对象,通过多种实验方法检测,旨在了解本地区此3种性传播疾病病原体的感染人群,并对不同的实验诊断方法进行比较,报告如下。
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应用Taq Man荧光定量PCR技术建立HIV前病毒检测方法
目的:使用荧光定量方法PCR对HIV前病毒进行检测,并建立相应预防机制.方法:对8E5细胞实施培育,然后收集并计数,将其核酸进行提取,并通过荧光定量来对HIV前病毒的逆转录基因片段实施扩增.结果:通过实时PCR技术对HIV前病毒实施荧光定量检测,可达1拷贝的灵敏度,并取得较为稳定的扩增效果.结论:利用PCR技术能够做到系统检测HIV前病毒,有利于日后对潜伏感染细胞的鉴定筛选以及对抗HIV治疗的及时反馈.
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白细胞介素-18 mRNA在肺炎支原体肺炎患儿血清的表达及意义
肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae, MP)是儿童呼吸道感染的常见病原体之一,不仅引起呼吸系统症状,而且可并发多系统、多器官损害,发病率有逐渐增高的趋势[1].有研究显示,细胞因子表达异常与肺炎支原体肺炎(MPP)的发病有关[2].本研究采用荧光定量聚合酶链反应检测白细胞介素(IL)-18 mRNA在MPP患儿血液中的表达,从基因水平探讨其表达的临床意义.
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支气管哮喘患者外周血核因子-κB及IgE的表达及其意义
支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病,由肥大细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症,引起气道高反应性和广泛的、可逆性气流阻塞.支气管哮喘的发病非常复杂,可能与炎症、免疫学异常、遗传、感染、环境因素和Th1/Th2细胞亚群失衡等有关[1,2].本研究采用荧光定量聚合酶链反应检测外周血核转录因子(NF)-κBmRNA在支气管哮喘患者外周血中的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测患者血清中免疫球蛋白E(IgE)的水平,从基因水平探讨其表达的临床意义.
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HBV血清标志物与HBV-DNA定量结果对比分析
我国HBV感染者众多,其血清标志物(乙肝两对半)组合模式多种多样,致使临床上部分患者的HBV感染状态难以判断.而荧光定量PCR法的应用,能准确地反映HBV感染者所处状态、HBV-DNA的复制水平及其传染性.本文采用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对正常体检及门诊患者检测出的221例HBV不同感染模式的感染者进行HBV-DNA定量,并对结果进行了对比分析.现报告如下.
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血清HCVRNA荧光定量与丙型肝炎诊断意义
目的探讨血清HCVRNA荧光定量在丙型肝炎诊断中的意义.方法采用ELISA法和荧光定量PCR法检测292例慢性丙肝患者抗-HCV和HCVRNA.结果抗-HCV及HCVRNA检出率分别为71.9%(210/292)和51.3%(150/292);抗HCV(+)组和抗-HCV(-)组HCVRNA的检出率分别为75.9%(82/108)和10.5%(4/83).结论抗HCV(+)组HCVRNA检出率高于抗-HCV(-)组;血清HGVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据;抗-HCV诊断丙肝感染有漏诊现象.
关键词: 荧光定量 丙型肝炎病毒核糖核酸 丙型肝炎 诊断 -
沙眼衣原体DNA的荧光定量PCR检测
沙眼衣原体(CT)的实验室检测技术主要分为细胞培养观察包涵体的经典细胞生物学方法;免疫学方法和以核酸扩增技术为代表的分子生物学检测方法.
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HCV-RNA的荧光定量PCR检测
丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝炎的主要原因,据估计约80%的HCV感染者会发展为慢性化,其中近20%的患者有可能进一步发展成肝硬化,而肝硬化患者发展成肝癌的机率为1.5%~4%[1,2].因此,对于HCV感染的早期诊断和治疗非常重要.近几年采用荧光定量聚合酶链反应法(Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)对丙型肝炎的早期诊断、治疗期间抗病毒药物的疗效评价、感染人群的普查以及污染源的检测均有较高的使用价值[3,4].本研究应用FQ-PCR方法定量检则132例慢性丙型肝炎患者血清中HCV-RNA的水平并与丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度及抗-HCV滴度进行比较,以探讨HCV-RNA定量检测的实际应用意义.
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荧光熄灭法测定生物材料中微量锌
以碱性染料为显色剂的离子缔合物体系具有极高的灵敏度,广泛用于金属离子的比色法测定[1,2].本文在文献[1]基础上,利用碱性染料罗丹明B的荧光特性(λ-EM=578 nm),建立荧光法测定生物材料中微量锌.当罗丹明B与硫氰酸锌形成离子缔合物后(Zn+2+-SCN+--RhB),大荧光峰位不变,荧光定量猝灭,其荧光熄灭程度与锌含量成正比.本文研究了在阿拉伯胶存在下水相荧光熄灭法测定锌的佳条件,线性范围为(0.05~0.5)μg/25 ml.
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荧光定量PCR诊断结核性脑膜炎的临床价值
目的探讨荧光定量PCR检测脑脊液(CSF)结核分枝杆菌评估其临床意义.方法应用荧光定量PCR技术检测45例CSF结核分枝杆菌并与抗酸杆菌染色,结核抗体酶联免疫吸附试验(结核抗体ELISA,简称酶联OT)进行比较.结果荧光定量检测CSF结核杆菌的阳性率为11.1%,酶联OT为13.3%,抗酸杆菌染色为0%.结论荧光定量PCR用于检测CSF结核分枝杆菌不具有灵敏度,阳性率低,对临床诊断结核性脑膜炎(简称结脑)无多少价值,不值得在临床上推广应用,必须寻找更有价值的诊断方法.
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高危型人乳头瘤病毒阳性妇女240例的长期随访研究分析
目的:探究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)阳性妇女的长期随访研究分析结果.方法:选取我院2013年9月~2015年9月收治的820例行宫颈癌及癌前病变筛查异常的妇女,其中定量HR-HPVDNA荧光定量结果 为阳性,对宫颈液基细胞学检查(TCT)为阴性或宫颈病理检查正常的240例患者进行长期随访.结果:经随访两年调查,160例HR-HPV转阴,自然清除率为66.7%;80例仍为HR-HPV阳性,占33.33%.年龄≤35岁、性伴侣个数1~2个、无生殖道炎症、初病毒载量1~99、不吸烟患者的HR-HPV清除率显著高于吸烟患者、初病毒载量100~1000、存在生殖道炎症、性伴侣个数≥3个、年龄超过36岁的患者,并且P<0.05.结论:HR-HPV清除率与年龄、性伴侣个数、生殖道炎症以及病毒载量都存在一定关系,长期随访并随时关注HR-HPV转阴情况,合适情况下给予干预治疗.
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黄连乙醇提取物与盐酸小檗碱体外抗炎对比研究
目的:比较黄连乙醇提取物与盐酸小檗碱体外抗炎活性,探索体外抗炎机制.方法:通过脂多糖体外刺激小鼠单核巨噬细胞建立细胞炎症模型,给药干预后,LPS长时间刺激RAW264.7细胞,MTT比色法分析黄连乙醇提取物及盐酸小檗碱对RAW264.7细胞生长活性的影响.酶联免疫吸附法检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、前列腺素E2 (PGE2)含量.实时荧光定量RT-PCR法检测iNos、HO-1、TNF-α mRNA表达.结果:在5~80 mg/L范围内,黄连乙醇提取物及盐酸小檗碱对RAW264.7细胞无抑制作用;各浓度给药组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO、前列腺素E2 (PGE2)含量与LPS刺激模型组比较均有显著性(P<0.01),且浓度与剂量无效应相关.实时荧光定量RT-PCR结果显示,各浓度给药组均明显降低iNos、HO-1、TNF-α mRNA表达(P<0.05,P<0.05,P<0.01),且与浓度不呈效应关系.结论:黄连乙醇提取物具有体外抗炎作用,抗炎活性优于盐酸小檗碱,其作用机制可能与抑制TNF-α、NO等炎症因子的活化,进而影响花生四烯酸(AA)代谢有关.
关键词: 黄连乙醇提取物 RAW264.7细胞 炎性因子 荧光定量 -
荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测生殖器疱疹病毒的对比研究
生殖器疱疹(GH)是由Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)感染引起的、以生殖器部位水疱、溃疡等为主要表现的一种性传播性疾病,需与其他表现为生殖器溃疡的疾病如龟头炎、宫颈炎和梅毒等鉴别.目前本病的诊断主要以临床经验为主,因此对一些不典型病例容易出现漏诊或误诊,借助实验室检查能够提供更加充分的诊断依据.本文分析了FQ-PCR和EIA法对GH患者HSV-Ⅱ的检测结果,现报告如下.
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荧光定量PCR检测 HBV-DNA、HCV-RNA室内质控物的制备及评估
荧光定量 PCR 法检测人血浆中乙肝 HBV-DNA、HCV-RNA具有较高的灵敏度和较强的特异性[1],但是检测的结果易受很多因素影响,因此严格的室内质量控制才能预防和控制检验误差,保证结果的准确性。目前,PCR检测试剂盒并未提供定值的室内质控品,且商用质控品的价格昂贵、不易获得,给常规 PCR 检测过程中室内质量控制带来不便。根据卫生部临检中心对质控品的相关规定,结合近年来临床PCR工作的基础,我们应用混合血清自制单一模式的混合血清实验室室内质控品,并根据《体外诊断试剂注册管理办法》(试行)等相关文件要求对其准确性、稳定性进行了初步评价,报告如下。
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乙肝携带产妇血清和初乳HBV-DNA定量检测及其临床意义
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区,约有1亿人,其中母婴传播是主要的传播方式之一,目前还没有能彻底治愈乙肝感染的药物,而母婴传播途径也较复杂,除了宫内、分娩中感染外,产后母乳喂养也是可能的传播途径.我国乙肝携带产妇所占比例较高[1],对阻断母婴的垂直传播已成为亟需解决的问题.HBV DNA是反映病毒在机体的复制和宿主传染性的直接指标[2],因而检测母亲体内的HBV-DNA含量,对乙肝病毒携带产妇的哺乳指导有着重要的临床意义.我们用荧光定量PCR技术检测乙肝病毒携带孕产妇血清及乳汁中HBV DNA含量,并对其相关性进行分析,为指导母乳喂养提供临床依据.现报告如下.
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应用荧光定量PCR检测急性白血病微小残留病的临床意义
对于完全缓解的白血病患者,体内存在的微小残留病(MRD)是复发的主要根源?本实验是通过双链DNA结合SYBR Green I的实时PCR方法应用免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排作为ALL微小残留病的检测靶基因,实验证明: MRD可以作为预后风险的一个独立指标.SYBR Green Ⅰ实时PCR是一种更适于临床应用的简单、快速、便宜、可行,特异性好、敏感性又高的技术方法.
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乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测同HBV复制关系的探讨
乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白(PreS1)由S基因的前S1区编码,PreS1含有数个能影响HBsAg分泌的调节序列,其特定氨基酸序列可参与HBV感染靶细胞的过程[1].而机体对PreS1免疫应答可为清除肝细胞内HBV及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用.本文以近年来发展起来的荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量测定HBV DNA,以此作为病毒复制和传染的直接依据,来探讨HBV感染者PreS1作为病毒复制标志物的意义.
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乙型肝炎患者血清中HBVDNA载量与肝功能改变的相关性研究
近年来建立的荧光定量PCR方法,为定量观察病毒水平提供了灵敏指标.为探讨乙型肝炎患者血清中乙肝病毒标志物与HBVDNA载量的关系,以及HBVDNA载量与肝功能改变的关系,我们采用这一方法对乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量进行了检测,并对以上所述的相关性进行了探讨.
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HBV DNA检测阳性病人其血清学模式分析
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染的血清标志物是目前临床诊断乙肝病毒感染和观察治疗效果的重要指标;随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应技术(PCR)被广泛应用,对HBV感染的诊断已从免疫学检测发展到核酸检测水平,患者血清的HBV DNA定量测定对临床诊疗及预后判断均具有重要意义.本研究采用HBV DNA荧光定量PCR和酶联免疫(ELISA)对2943份检测阳性的病人中血清学标志物常见模式分布情况,及HBV DNA拷贝数与血清学模式之间的关系.探讨两种检测方法之间的相关关系、及荧光定量PCR技术检测乙肝病毒DNA的临床意义.