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人免疫缺陷病毒感染的实验室检测
HIV感染的实验室检测在HIV感染的诊断、疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药监测中至关重要,目前临床检测内容包括HIV抗体、p24抗原、HIV病毒载量、CD+4 T淋巴细胞计数等.HIV的检测必须严格按照国家制定的<艾滋病检测工作管理办法>和<艾滋病检测技术规范>(2004版,以下简称<规范>)进行.
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艾滋病病原学诊断进展
艾滋病是高度依赖病原学诊断的传染病，因为无论是在感染早期或发病期，还是在较长的潜伏期，都只有通过病原学检验，找出其病原体——人免疫缺陷病毒(HIV）存在的证据，才能做出HIV感染或艾滋病的诊断。HIV检验要求绝对准确可靠，无论是假阳性还是假阴性都将造成十分严重的后果。因此，10多年来，艾滋病病原学诊断技术迅速发展，主要包括HIV病毒分离、HIV病毒载量测定、HIV核酸检测，以及检测病毒抗原（p24抗原）和检测病毒特异性抗体。其中抗体检测方法是常规使用的HIV病原学诊断方法，其他方法主要用于特殊情况（“窗口期”、婴儿诊断、HIV抗体检测结果为不确定等），或作为抗体检测方法的补充用作辅助诊断，或作为判断预后和指导治疗用药的依据（病毒载量的测定），一般不用作常规诊断。现将主要病原学诊断进展分述如下。
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病毒载量实时扩增检测技术的研究进展
近年来,运用基因扩增技术对病毒进行定性或定量检测已取得了巨大进步,尤其是定量检测技术的发展,使得临床能够更加有效地监测患者治疗效果、是否有耐药性发生等病情,并可依据病毒荷载量的变化合理地解释病情的变化[1-3].
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两种HBV DNA检测试剂的比较
目的 分析两种试剂在HBV DNA定量检测中的相关性,评价其在不同病毒载量时的检测性能.方法 用人AB型血清将WHO第2代HBV DNA国际标准品(编号:97/750)配制成不同浓度的10份样本,10份样本的浓度分别为1×106、5×106、1×105、5×104、1×104、5×103、1×103、5×102、1×102、1×101 kIU/L.采用深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBV DNA荧光定量PCR检测试剂(PG试剂)和美国罗氏公司生产的定量PCR试剂(罗氏试剂)检测78份HBV感染者血清、30份健康献血者血清和10份不同浓度范围的WHO标准品中HBV DNA含量.对两种试剂检测HBV DNA结果相关性进行分析;对试剂在不同病毒载量时的检测性能进行评价;并对漏检情况进行分析.两种试剂每批检测均设有阴性质控、弱阳性质控和强阳性质控.结果 两种试剂对WHO HBV DNA标准物质稀释血清均能正确检出,罗氏试剂能检出高稀释度样本浓度为2.00(kIU/L,lg),PG试剂能检出高稀释度样本浓度为3.00(kIU/L,lg);两种试剂检测结果存在线性相关(R2=0.938 7,P<0.01),罗氏试剂检测上限与理论值相符,大于检测上限的标本经稀释重复测定,罗氏试剂检测结果[(8.35±0.20)kIU/L,lg]高于PG试剂检测结果[(7.73±0.42)klU/L,lg],差异有统计学意义(t=3.776,P<0.05).两种试剂检测108份血清标本中HBV DNA含量,罗氏试剂检测值[(5.88±1.64)kIU/L,lg]高于PG试剂检测值[(5.25±1.55)kIU/L,lg],差异有统计学意义(t=12.297,P<0.01);检测高HBV病毒载量[(>5.00～≤7.00)kIU/L,lg和(>7.00～≤9.00)kIU/L,lg]组,两种试剂的相关性较高(R2分别为0.779 7、0.603 7,P均<0.01);对低HBV病毒载量(>3.00～≤5.00 kIU/L,lg)组,两种试剂的相关性较低(R2=0.417 3,P<0.01);病毒载量为>3.00～≤4.00 kIU/L,lg组,PG试剂的漏检率为33.3%(5/15);病毒载量为>1.08～≤3.00 kIU/L,lg组,PG试剂未检出.结论 PG试剂与岁氏试剂检测结果虽存在一定差距,但相关性较好.两种试剂低病毒载量标本的相关性要低于高病毒载量标本,PG试剂检测HBV DNA的线性范围较窄.
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多重实时PCR检测高危型人乳头瘤病毒感染
目的 调查不同宫颈病变组妇女生殖道13种高危型HPV(HR HPV)感染情况,分析HR HPV感染与宫颈病变的关系.方法 选择深圳市宝安区妇幼保健院宫颈专科门诊患者350例,利用TCT技术检测其宫颈上皮细胞学状况,根据细胞学结果分组.采用多重实时PCR(mRT PCR)检测其生殖道HR HPV感染情况和病毒载量,采用χ2检验或Fisher精确概率法比较各组间HR HPV感染率,采用Kruskal-Wallis或Wilcoxon秩和检验比较各组间HR HPV阳性者的病毒载量,采用Wilcoxon秩和检验比较HR HPV阳性和阴性组的年龄分布情况.结果 未见上皮内病变或恶性病变(NILM)组、意义不明的非典型鳞状上皮细胞增生(ASCUS)组、鳞状上皮细胞低度病变(LSIL)组、鳞状上皮细胞高度病变(HSIL)组的HR HPV阳性例数分别为10例(3.4%)、7例(20.0%)、11例(78.6%)和6例(6/6).NILM组HR HPV阳性率低于ASCUS组、LSIL组,ASCUS组HR HPV阳性率低于LSIL组,差异有统计学意义(χ2值分别为14.43、107.69、14.76,P均<0.01);NILM组低于HSIL组、ASCUS组低于HSIL组,差异有统计学意义(P值分别为0.000 1、0.000 4).NILM组、ASCUS组、LSIL组和HSIL组HR HPV阳性者的病毒载量分别为4.10 (3.38～6.27)、5.33 (3.63～6.66)、5.77 (4.01～7.01)和5.58 (4.19～5.85)(拷贝/ml,lg).将ASCUS组、LSIL组和HSIL组3组合并为宫颈细胞异常组,病毒载量为5.58(3.63～7.01)(拷贝/ml,lg)高于NILM组,差异有统计学意义(U=43.0,P<0.05).HR HPV阳性组平均年龄36(21～56)岁,与阴性组[33(21～58)岁]比较,差异无统计学意义(U=4 544,P>0.05).结论 HR HPV感染与宫颈病变有关;HR HPV病毒载量高低与宫颈病变程度无相关性,但病毒载量越高,存在宫颈病变的可能性越大.HR HPV阳性组与阴性组的年龄分布无差异.
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HAART治疗后病毒学治疗有效组和失败组患者血浆比较蛋白质组研究
目的 筛选AIDS患者血浆中与HAART疗效相关的特异性生物标志物,为临床疗效评估提供新型检测分子,指导AIDS治疗的预后判断.方法 收集2008年6月至2009年2月由上海市公共卫生临床中心感染一科收集的艾滋病患者血浆,包括病毒学治疗有效组10例(病毒载量＜ 50拷贝/ml)和病毒学治疗失败组11例(病毒载量＞50拷贝/ml),入组患者年龄22 ～ 63岁.血浆样品用Bio-rad公司血浆高丰度蛋白质去除试剂盒处理,去除血浆中的白蛋白和免疫球蛋白IgG.处理后的血浆蛋白质样品通过二维凝胶电泳(2DE)进行分离,采用ImageMaster软件分析获得的电泳图谱,找到与疗效相关的差异蛋白质.差异蛋白质点经过胰酶酶切后,通过在线纳升级反向液相色谱串联电喷雾离子阱质谱分析鉴定.结果 血浆经过高丰度蛋白去除试剂盒处理后,低丰度的蛋白质得到了有效的富集.共发现了6个在治疗有效组和治疗无效组血浆样品中表达差异的蛋白质点.这些差异蛋白质经液相色谱串联质谱分析得到准确鉴定,包括血清转铁蛋白、血清β纤维蛋白原等.结论 通过蛋白质组学研究发现,血清转铁蛋白等蛋白质在艾滋病患者血浆中表达水平与治疗过程中病毒载量相关,它们可能是评价抗病毒治疗疗效的潜在生物标志物.
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应用NucliSens Easy Q定量检测人类免疫缺陷病毒1型RNA
获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)而导致的一种致死性疾病.目前,检测HIV-1 RNA的病毒载量主要有3种方法:分枝放大技术(bDNA)、逆转录酶扩增技术(RT-PCR)和核酸序列扩增技术(NASBA).这3项技术具有很好的相关性、敏感性和准确性[1],但是这3项技术的操作较为复杂和费时,且不能实时动态对扩增过程监控.NucliSens Easy Q是一种新的检测HIV-1RNA病毒载量技术.它结合了NASBA的扩增特点和新的分子信标技术[2,3],在本项研究中,我们通过将Nuclisens Easy Q和NASBA对临床样本及其标准血清盘的检测比较,来对这种新方法进行初步评价.
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国产试剂与Roche COBAS TaqMan试剂对慢性丙型肝炎快速和早期病毒学应答的比较研究
目的 评价国产HCV核酸扩增荧光定量试剂(国产试剂)和Roche COBAS*9誖AmpliPrep*9誖/COBAS*9誖TaqMan*9誖48(Roche COBAS TaqMan)试剂对慢性丙型肝炎(丙肝)患者快速病毒学应答(rapid virological response,RVR)和早期病毒学应答(early virological response,EVR)判定的效果,探讨国产试剂在慢性丙肝治疗中的应用价值.方法 收集223例慢性丙肝抗病毒治疗前、治疗第4周和第12周的血清标本,分别采用Roche COBAS TaqMan试剂和国产试剂检测血清HCV RNA载量,比较和分析2种试剂对RVR和EVR的判定.结果 治疗前患者HCV RNA载量为(6.24±0.97) log10(Roche COBAS TaqMan检测).国产试剂判定RVR的假阴性率为37.3%(95%置信区间26.4%~48.6%),判定EVR的假阴性率为20.8%(95%置信区间4.6%~37.0%).治疗第4周时,国产试剂未检测到28例的HCV RNA,其治疗第12周的血清标本采用Roche COBAS TaqMan检测,27例未检测到HCV RNA,1例HCV RNA为2.78 log10.结论 抗病毒治疗第4周和第12周时,应采用灵敏度高的试剂检测慢性丙肝患者的HCV RNA载量.如果治疗第4周时采用国产试剂未检测到HCV RNA,则可判定患者能获得EVR,可根据EVR确定疗程.
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云南省成人与青少年HIV/AIDS患者抗病毒治疗10年结果分析
目的：回顾和总结云南省成人和青少年AIDS抗病毒治疗10年结果，讨论取得的成绩和存在的问题。方法利用《艾滋病综合防治系统———抗病毒治疗管理》数据库的数据进行统计分析。结果云南省的治疗人数和覆盖率都有了显著增长，在50241例进行过抗病毒治疗的患者中，截至2013年12月底仍然继续治疗的占82.3%；感染途径为静脉吸毒患者的失访、停药和病死率显著高于性途径感染者；患者的治疗基线CD4+T淋巴细胞计数越低，治疗期间的病死率越高；1年的治疗队列中，基线CD4+T淋巴细胞计数<350个/mm3患者的终止治疗率低于CD4+T淋巴细胞计数≥350个/mm3的患者；治疗第1年的患者治疗保持情况不佳，停药、失访和病死率较后期的高；治疗6个月以上的患者有82.9%达到病毒检测不到水平；耐药率低于5%；接受治疗患者的病死率逐年下降，已经低于2%。结论云南省抗病毒治疗取得了一定的成绩，但在扩大治疗的策略和目前情况下仍然面临着挑战。
关键词： HIV 获得性免疫缺陷综合征 抗病毒治疗 淋巴细胞计数 病毒载量 -
北京市731例初治AIDS患者疗效分析
目的：了解接受免费抗病毒治疗的AIDS患者的治疗效果和药物不良反应情况，为今后北京市AIDS防治工作提供依据。方法收集北京佑安医院艾滋病门诊2005年1月—2011年8月首次接受抗病毒治疗的731例AIDS患者临床相关信息，分析其治疗效果和药物不良反应情况。结果治疗开始后，病毒载量（viral load, VL）<50 copies/ml的患者所占比例逐渐增加，约为80%；治疗18个月时达到病毒学治疗成功的患者比例高达91.1%。治疗后CD4+T淋巴细胞计数呈逐步上升趋势，治疗3年后达到平台期。在治疗过程中常见的不良反应是消化道反应，药物不良反应也是治疗过程中换药的主要原因。结论传统的抗反转录病毒治疗具有较好的抗病毒疗效，能显著降低患者血浆中VL，提高外周血CD4+T淋巴细胞计数；药物不良反应是治疗过程中换药的主要原因。
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 HIV 淋巴细胞计数 病毒载量 -
不同形式的HIV DNA与疾病进展的相关性分析
目的：研究不同形式的HIV DNA与疾病进展之间的关系。方法采用实时定量PCR法来检测48例具有明确感染时间的患者总的、整合的及2个长末端重复序列（long terminal repeat, LTR）的环状HIV DNA。分析随着时间的变化，不同形式HIV DNA的动力学变化特点及其与疾病进展的关系。结果随着疾病的进展，总的及整合的HIV DNA增加。总的HIV DNA与病毒载量呈正相关。总的及整合的HIV DNA与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关。2个LTR的环状HIV DNA与病毒载量及CD4+T淋巴细胞计数无相关性。结论总的及整合的HIV DNA与疾病进展密切相关，2个LTR的环状HIV DNA与疾病进展无相关性。
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182例HIV/AIDS实施高效抗反转录病毒治疗的疗效评价
目的：分析182例HIV/AIDS实施高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy, HAART）的效果及其影响因素，为进一步有效治疗提供依据。方法采用回顾性调查方法，对我院接受规范HAART的182例HIV/AIDS患者的CD4+T淋巴细胞绝对计数和病毒载量进行分析。结果182例中，157例治疗后CD4+T淋巴细胞计数增加，且在治疗后前6个月内增加速度快，随着治疗时间延长则较为缓慢。病毒载量在治疗后的6个月内下降快，大部分降至血浆检测不到的水平，6个月后比较稳定；但随着治疗时间延长，部分患者的病毒载量出现反弹，可能与患者服药依从性差和病毒耐药性的出现有关。治疗前后CD4+T淋巴细胞计数差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素logistic回归分析表明年龄和病毒载量是影响HAART疗效的危险因素，基线CD4+T淋巴细胞计数和按时服药是保护因素。结论 HAART能明显增加CD4+T淋巴细胞计数，降低病毒载量，有效控制机会感染，治疗效果显著。影响HAART疗效的因素是多方面的，在治疗过程中应综合考虑各种可能影响因素以提高疗效，对符合条件的患者应尽早进行规范的抗病毒治疗。
关键词： HIV 获得性免疫缺陷综合征 抗逆转录病毒治疗 高效 病毒载量 -
HIV临床检测技术进展及应用
HIV感染的实验室检测在AIDS防治中至关重要.为提高HIV相关检测的灵敏度和特异度,陆续出现了可同时检测HIV抗原和抗体的第四代试剂、用于病毒载量检测的实时荧光定量PCR技术、新近感染检测的IgG捕获BED酶联免疫法等方法.这些方法不断接受临床评估及验证.
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血清乙型肝炎病毒载量与抗病毒药物疗效关系的研究
乙型肝炎的治疗是十分棘手的问题,目前公认对HBV有效的药物α-干扰素(IFN)及拉米夫定(LAM)总体应答率仍然不高,为了提高上述2种抗病毒药物的抗病毒治疗应答率,我们对HBV不同血清含量的患者分组治疗,发现各组的疗效有明显差异,现将结果报告如下.
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HIV-1病毒载量检测常用技术及研究进展
病毒载量检测是HIV-1感染后需要长期观察的重要指标,在基础研究、早期感染的诊断、药物治疗学研究和流行病学监测方面都有特殊的意义.目前普遍使用的HIV病毒载量检测主要是测定血浆中病毒RNA的量,采用的方法包括荧光定量PCR技术、核酸等温扩增技术以及分支DNA杂交技术等.检测的样本包括血清、分泌物及全血制备的干血斑等多种类型,检测的靶点也会涉及到细胞基因组中整合的病毒DNA的应用.反转录酶法检测技术和其他等温扩增技术等许多技术已用于实验检测,一些交叉学科技术正进行着实验性探索.我国已有HIV-1病毒载量检测实验室140余家,3种经典的检测技术均有涉及.各种技术特点不同,但在病毒载量检测工作中均发挥巨大的作用.
关键词： HIV-1 病毒载量 分支DNA信号扩增试验 综述 -
148例AIDS患者抗病毒治疗疗效分析
目的 观察云南省大理地区高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)对AIDS患者的疗效.方法 148例AIDS患者应用HAART 2～42个月(平均15.52个月)后进行病毒载量检测及分析.结果 148例患者中,HIV RNA水平＜50 copies/ml、50～500copies/ml、＞1000 copies/ml者分别占67.57%、24.32%、8.10%.结论 云南省大理地区AIDS患者应用HAART疗效较好,有效率高达91.89%;67.57%的患者达到了病毒学治疗目标,但仍有8.10%的患者治疗无效.提高患者对HAART的认识和保证服药依从性是取得疗效的关键.对于不能达到病毒学治疗目标的患者须进行耐药检测.
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HAART后血液及精液中HIV水平的比较研究
目的高效抗逆转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy, HAART）6个月后，对HIV感染者血浆及精浆中的HIV RNA水平进行比较研究，对外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）及精液细胞中的HIV DNA水平进行比较研究。方法收集HAART 6个月后血液中HIV RNA下降到检测不出的16例患者的精液和血液样本，采用实时定量PCR的方法检测其血浆及精浆中的HIV RNA水平，PBMC及精液细胞中的HIV DNA水平。结果16例患者的精浆中有15例可检测到HIV RNA，在PBMC及精液细胞中均可检测到HIV DNA，且二者HIV DNA水平差异无统计学意义。结论 HAART 6个月后，大多数患者精液中仍可检测到HIV RNA及HIV DNA。
关键词： 高效抗逆转录病毒治疗 精液 HIV 病毒载量 -
慢性丙型肝炎CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的检测价值
目的:探讨慢性丙型肝炎患者外周血C D4+C D25+CD 127low/-Treg细胞比例对其临床诊治的指导意义.方法:以禹城市人民医院收治并采用派罗欣联合利巴韦林治疗的69例慢性丙型肝炎患者为观察组,同期入院体检的65例健康志愿者为对照组.分别于基线和治疗24 wk后检CD4+CD25+CD127low/-Treg比例.分析基线不同病毒载量及肝损伤程度CD4+CD25+CD127low/-Treg比例的变化.同时根据停药后24 wk是否获得病毒学应答分为获得持续病毒学应答(sustained virologic response,SVR)组和未获得SVR组,并分析两组CD4+CD25+CD 127low/-Treg比例在治疗24 wk前后的差异.结果:观察组治疗前外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞比例高于对照组和治疗(P＜0.05).不同HCV RNA载量的患者外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞比例不同,随着HCV RNA载量的升高,CD4+CD25+CD 127low/-Treg细胞比例也持续升高,组与组之间差异有统计学意义P＜0.05).治疗48 wk随访24 wk后,观察组SVR率78.3％.无论是基线还是治疗24wk,获得SVR患者的CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞比例均明显低于未获得SVR者(P＜0.05).此外,经相关性分析发现,基线CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞比例均与肝功能指标AST/ALT呈正相关性(P＜0.05).结论:CD4+CD25+CD 127low/-Treg细胞可能参与了慢性丙型肝炎的发病过程,其临床检测对患者病情诊断和预后评估有指导意义.
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抗乙型肝炎病毒治疗中病毒载量的动力学特点
病毒载量动力学的检测被越来越广泛地用来预测抗病毒药物的治疗效果,先前的免疫学检测受很多因素的影响,已不能正确反应病毒的复制.而病毒载量定量检测可使人们能够比较清楚地了解病毒在体内的变化情况,弥补了免疫学方面的不足.通过对病毒动力学的研究可以使我们了解病毒在清除过程中的特点,从而用于指导临床来评估药物疗效,以及针对不同的患者设计合理的治疗方案.
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抗原表位特异性CTL在慢性HBV感染肝损伤和抗病毒中的作用研究
目的:探讨抗原表位特异性CTL在肝炎发作中的抗病毒和肝损害作用.方法:用四个HBV抗原表位肽四聚体对外周血中抗原特异性CTL进行检测,(HBV抗原表位肽分别为HBcAg18-27,序列为FLPSDFFPSV(C18),HBsAg183-191序列为WLSLLVPFV(E183),HBeAg335-343序列FLLTRILTI(E335),多聚酶P的575-583序列为FLLSLGIHL(P575))检测慢性乙型肝炎患者肝炎发作时病毒抗原表位特异性CTL出现频率,统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平的相关关系.将所有检测的病例按照血清ALT水平高低重新分组进行对比,分析各组间抗原表位特异性CTL频率的差异.结果:36例慢性HBV感染患者抗原表位特异性CTL检测阳性33例(91.7%),HBeAg183-191表位特异性CTL频率高于其他三个(P＜0.05).统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平相关性不显著;分组对比发现血清ALT升高5-10倍组多个抗原表位特异性CTL水平高于其他组(P＜0.05).结论:慢性HBV感染患者外周血中存在抗原表位特异性CTL,但特异性CTL的存在并不能代表保护性免疫.认为慢性HBV感染肝炎发作时抗原表位特异性CTL反应增强,抗原表位特异性CTL在肝炎发作过程中具有抗病毒和肝组织损害双重作用,肝组织损害可能比较轻微,严重的肝损害可能是非特异性细胞造成.
