欢迎来到360期刊网!
学术期刊
  • 学术期刊
  • 文献
  • 百科
电话
您当前的位置:

首页 > 文献资料 > 正文

低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定

屈野;陈晓;杨静;郭小芹;李玲;王越

摘要: [目的]构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达.[方法]化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入pGL3-BASIC,经PCR、酶切和测序鉴定,获得pGL3-HRE荧光素酶报告载体;然后以pGL3-HRE和β-gal DNA共转染MG63细胞,通过物理和化学低氧来检测其活性,并western blotting分析转染细胞HIF-1表达水平.[结果]获得了pGL3-HRE荧光素酶报告载体,PCR、酶切和测序鉴定均与预期一致;物理低氧(1%O2)和化学低氧(不同浓度CoCl2)均可诱导转染MG63细胞荧光素酶表达水平的升高(P<0.05),其中以CoCl.(300 μmol/L)组为显著,western blotting结果也显示CoCl2(300 μmol/L)组HIF-1表达水平更为显著(P<0.05),与荧光素酶表达趋势一致.[结论]成功构建了HRE荧光素酶报告载体,为进一步研究HIF-1的表达调控作用及筛选抗低氧药物提供了工具.

同期刊相关文献推荐

360期刊网

专注医学期刊服务15年

  • 您好:请问您咨询什么等级的期刊?专注医学类期刊发表15年口碑企业,为您提供以下服务:

  • 1.医学核心期刊发表-全流程服务
    2.医学SCI期刊-全流程服务
    3.论文投稿服务-快速报价
    4.期刊推荐直至录用,不成功不收费

  • 客服正在输入...

x
立即咨询