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放疗增敏研究中人卵巢癌SKOV3乏氧细胞模型的建立方法
目的 探讨适用于放疗增敏研究中人卵巢癌SKOV3乏氧细胞模型的建立方法.方法 将人卵巢癌细胞株SKOV3分为常氧对照组、二氯化钴组和环境乏氧组,各组均在X射线单次照射(0、2、4、6、8 Gy)后72 h,应用噻唑蓝法检测细胞增殖.结果 与常氧对照组未照射细胞相比,二氯化钴组和环境乏氧组未照射细胞的细胞增殖率均显著降低(t=24.789、196.960,P均＜0.01);与同组未照射细胞相比,常氧对照组与二氯化钴组接受不同剂量的X射线单次照射后,其细胞存活率均显著性下降(F=2263.039、3672.044,P均＜0.01),且放射剂量越大,其细胞存活率越低,而环境乏氧组无显著性变化(F=1.412,P＞0.05);与常氧对照组、二氯化钴组的同剂量照射细胞相比,环境乏氧组细胞存活率均显著升高(2Gy:F=61.125; 4Gy:F=181.825;6Gy:F=373.830; 8Gy:F=2425.510,P均＜0.01).结论 环境乏氧组的细胞对射线产生了强烈的抵抗性,即放射敏感性显著性降低,射线对其杀伤力减弱,且所获得的乏氧细胞模型明显优于二氯化钴组,因此环境乏氧比二氯化钴更适合作为放疗增敏研究中人卵巢癌SKOV3乏氧细胞模型的建立方法.
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榄香烯对人卵巢癌SKOV3细胞株生物学作用机制
目的 观察外源性榄香烯注射液对人卵巢癌SKOV3细胞株生物学行为影响.旨在为寻找卵巢癌治疗的特效药物提供理论依据.方法 应用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法观察不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞增殖周期各时相变化及凋亡率.透射电子显微镜观察SKOV3亚细胞结构变化.结果 不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞增殖均有抑制作用.呈明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.结论 榄香烯注射液对SKOV3细胞有较强的敏感性和药物浓度依赖性,其机制可能与榄香烯注射液影响SK-OV3细胞周期进程并调节凋亡相关蛋白基因表达有关
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Celecoxib诱导SKOV3细胞株凋亡的机制探讨
目的 探讨塞米昔布(Celecoxib)是否通过抑制Survivin表达来诱导人卵巢浆液性乳头状囊腺癌(SKOV3)细胞株的凋亡.方法 选择SKOV3细胞株分成4组:对照组、Celecoxib组、转染空质粒组和Survivin转染组.各组细胞应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,应用Western印迹方法检测Survivin蛋白的表达.结果 应用Celecoxib处理后,SKOV3细胞株的凋亡率上升,而Survivin蛋白表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05).转染了Survivin基因后,Survivin蛋白表达上调,而凋亡率明显下降,与Celecoxib组及转染空质粒组相比,差异具有显著性(P＜0.05).结论 Celecoxib可以诱导SKOV3细胞株的凋亡,这种凋亡是通过抑制Survivin蛋白的表达来实现的.
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锰超氧化物歧化酶模拟化合物诱导人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3凋亡的研究
目的:研究锰超氧化物歧化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)诱导人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3凋亡的效应及机制.方法:取对数生长期的SKOV3细胞,用不同浓度的MnSODm(0、10、50 μg/mL)处理0、24、48、72 h,采用活细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖能力与活性,采用PI单染和细胞形态学法观察细胞凋亡,采用荧光发光法检测caspase-3/7活性.结果:与空白对照组比较,MnSODm处理后SKOV3细胞的增殖受到抑制(P＜0.01);10、50 μg/mL MnSODm处理后,SKOV3细胞活性分别为(67.5±2.4)％及(16.6±0.9)％,与空白对照组的细胞活性[(100.0±1.7)％]比较,差异有统计学意义(P＜0.01).PI染色显示,MnSODm处理后的SKOV3细胞核边缘不规则,染色质凝集且着色较重,核固缩,核着色强阳性细胞及凋亡细胞较空白对照组明显增多.倒置显微镜显示,与空白对照组比较,MnSODm处理后的SKOV3细胞伸展度降低,部分细胞体积变小、皱缩且折光性差,为细胞凋亡的形态改变.SKOV3细胞经10、50 μg/mL MnSODm处理72 h后,caspase-3/7的活性与空白对照组比较改变不明显(P＞0.05).结论:MnSODm能诱导SKOV3细胞凋亡,但并非通过caspase-3/7途径诱导.
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纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响
目的:观察纳秒级陡脉冲诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度[Ca2+]i的影响.方法:纳秒级陡脉冲场强10kV/cm,脉宽100ns,频率1Hz,作用5min.SKOV3细胞经纳秒级陡脉冲作用后4h,用透射电子显微镜,流式细胞术检测细胞凋亡.以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲对SKOV3细胞[Ca2+]i的影响及[Ca2+]i变化时Ca2+的来源.结果:透射电子显微镜观察到典型的凋亡细胞形态.流式细胞术结果显示,纳秒级陡脉冲主要诱导细胞早期凋亡,早期凋亡率为(22.21±2.71)%,明显高于对照组的(3.04±0.44)%(P<0.01).纳秒级陡脉冲可明显升高细胞[Ca2+]i(P<0.01),而与细胞外钙离子浓度无关(P>0.05).结论:纳秒级陡脉冲能够诱导SKOV3细胞凋亡.细胞内钙释放引起钙离子升高,可能是纳秒级陡脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一.
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乏氧对黄酮类化合物放射增敏作用的实验性研究
目的：：考察三种黄酮类化合物在乏氧条件下对卵巢癌SKOV3细胞的放射增敏效应。方法：将SKOV3细胞分为常氧组与乏氧组,建立体外SKOV3乏氧细胞模型并检测细胞内HIF-1α蛋白的水平加以验证；克隆形成法检测常氧与乏氧SKOV3细胞的放射敏感性；MTT法检测三种黄酮类化合物对SKOV3细胞增殖抑制的影响,筛选出药物的无毒浓度范围；改良的MTT法检测放射增敏效应,结合多靶单击模型拟合剂量存活曲线,分析放射生物学参数。结果：常氧组和乏氧组HIF-1α与β-Ac-tin的灰度值之比分别为0.117和1.068,乏氧SKOV3细胞的放射敏感性显著低于常氧细胞；黄酮类化合物作用于SKOV3细胞的存活率随药物作用浓度的增大而降低；在常氧与乏氧条件下,随着药物浓度的增大,白杨素与槲皮素组D0、Dq值显著减小(P<0.01),SER值显著增大(P<0.05)。灯盏花素各浓度组之间SER值无显著性差异(P>0.05)。乏氧组D0、Dq、SER值整体高于常氧组。结论：乏氧诱导SKOV3细胞内HIF-1蛋白表达显著升高,导致细胞放射敏感性降低。白杨素与槲皮素可明显改善SKOV3细胞放射敏感性,且在乏氧条件下放射增敏效应更明显,而灯盏花素不具有此功效,其增敏机制可能是通过降低细胞内HIF-1α的水平和延迟细胞修复亚致死性损伤而实现。
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应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白
背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克降第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型.本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异.方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率.应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测.应用Ciphergen Protein Software 3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较.峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白.结果:动物实验显示.细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05).获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10 103、11 655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达.结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关.
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去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨
背景与目的:去甲斑蝥素(norcanthridin,NCTD)是斑蝥素(canthridin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小.本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制.方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变.Western blot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、Cyclin B1、Bax和Bcl-2表达的影响.结果:2.5、5、10、20、30和40 μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48 h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.001).Nd3作用24 h、36 h和48 h的IC50分别为(25.1±2.3)μmol/L、(21.8±2.8)μmol/L和(20.4±3.3)μmol/L.细胞周期分析证实,10、20、30、40 μmol/L Nd3作用48 h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%:同时30 μmol/L的Nd3作用12、24、36、48 h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞.此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40 μmol/L的Nd3作用48 h后细胞凋亡率高于对照组30%以上.Western blot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、Cyclin B1和Bcl-2的表达则相应减少.结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、Cyclin B1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关.
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IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制
背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用.本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响.方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照.ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达.MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间.建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况.ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein 10,IP-10)的表达.结果:转染48、60 h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P＜0.01).SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P＜0.01).裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P＜0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P＜0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%.SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01).SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P＜0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P＜0.01).结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用.
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Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡及对 docetaxel的增敏作用
背景与目的:Survivin在大多数肿瘤组织中特异性高表达,并与肿瘤细胞的凋亡和耐药密切相关.本研究探讨Survivin反义真核表达载体(anti-pcDNA3-svv)对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用及对docetaxel的增敏作用.方法:采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染SKOV3细胞,筛选出阳性细胞株.以RT-PCR检测survivin mRNA的表达,Westem blot检测Survivin蛋白的表达.用流式细胞仪和透射电镜观察Survivin反义核酸对SKOV3细胞凋亡的诱导作用,MTT法检测其对docetaxel的增敏作用.结果:稳定表达anti-pcDNA3-svv的SKOV3细胞survivin mRNA及Survivin蛋白均比未转染者明显降低,透射电镜下可见稳定转染组细胞呈凋亡晚期变化,流式细胞仪显示其凋亡率为19%,docetaxel对实验组细胞的IC50值为(13.3±2.2)ng/ml,而对照组为(53.2±2.4)ng/ml,差异具有显著性(P＜0.05).结论:Survivin反义核酸可诱导SKOV3细胞凋亡,增强SKOV3细胞对docetaxel的敏感性.
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CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究
背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变.本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响.方法:利用Western blot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响.结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失.转染后,SKOV3细胞CAR mRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4).结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型.
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纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞SKOV3生长抑制及诱导凋亡作用
目的 探讨纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用.方法 采用人卵巢癌细胞SKOV3,应用MTT比色法,倒置显微镜,荧光显微镜及Annexin-FITC技术等方法进行检测和观察.结果 中(8.5 kV/cm)、高(10 kV/cm)场强处理组对SKOV3细胞活性具有明显抑制作用,呈剂量依赖性,在处理后2～4 h内呈时间依赖性;倒置显微镜和荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪示,中、高场强处理组早期凋亡率分别为(22.21±2.71)%、(57.30±6.51)%,与对照组(3.04±0.44)%比较均有显著性差异.结论 一定范围内的纳秒级陡脉冲能明显抑制SKOV3细胞增殖,亦诱导SKOV3细胞凋亡.
