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食管癌疫苗的研制及临床应用效果观察
目的 探讨食管癌疫苗的抗癌机制及临床应用效果.方法 培养食管癌细胞Eca109,提取其抗原成分和超抗原金黄色葡葡球菌肠毒素C型构建成肿瘤疫苗;分离人外周血单个核细胞(PBMC),与肿瘤疫苗联合作用,进行体外培养增殖,成为效应细胞;流式细胞仪测定效应细胞表型;细胞毒实验检测其杀伤活性.选取早期食管癌术后患者106例,分为观察组53例,应用食管癌疫苗治疗,对照组53例实施常规治疗.观察对比临床应用效果,对两组患者进行3年随访观察其生存率.结果 经肿瘤疫苗刺激的淋巴细胞组增殖活性强,于72 h达到高峰(A值为0.22);并且上调细胞毒性T细胞(CTLs),CTLs对靶细胞杀伤活性外周血单个核细胞+超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素C型+肿瘤可溶性抗原组(97.36±2.11)％显著高于单个核细胞组(79.27±5.57)％,差异有统计学意义(P＜0.01).3年随访发现观察组生存率[男48.28％(14/29)、女45.83％(11/24)]高于对照组[男21.42％(6/28)、女24.00％(6/25)],差异有统计学意义(x2=5.06、x2=6.28,P均＜0.05).结论 食管癌疫苗能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效、特异的抗肿瘤效果.临床观察发现其能有效防止食管癌术后患者的复发和肿瘤转移,提高生存率.
关键词： 肿瘤疫苗 食管癌 肿瘤可溶性抗原 超抗原金黄色葡葡球菌肠毒素C型 生物治疗 -
食管癌疫苗抗癌机理研究
目的:对食管癌可溶性抗原和超抗原SEC构建的肿瘤疫苗的抗癌机理进行研究.方法:培养食管癌细胞Ecal09,提取其抗原成分,和超抗原金葡素SEC构建成肿瘤疫苗；分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),经肿瘤疫苗联合作用,进行体外培养,进行增殖,成为效应细胞；流式细胞术(FCM)测定效应细胞表型；细胞毒试验检测其杀伤活性,FCM测定效应细胞诱导靶细胞凋亡情况.结果:经肿瘤疫苗刺激的淋巴细胞组增殖活性强,于72 h达到高峰,并且上调CTLs中CD8+T细胞群.肿瘤疫苗刺激的淋巴细胞组诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.01).经效应细胞作用后,靶细胞的凋亡率为32.44％,而对照组仅6.38％的细胞凋亡,具有统计学差异(P＜0.01)).结论:食管癌抗原与超抗原构建的肿瘤疫苗能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效、特异的抗肿瘤效果,效应细胞可诱导靶细胞凋亡,从而发挥抗癌作用.
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树突状细胞肺癌疫苗制备的实验研究
①目的 探讨具有较强免疫活性树突状细胞(DC)的制备及其鉴定.②方法 采用3M KCL提取法和弱酸洗脱法获得肺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽,并定量抗原多肤浓度;用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏,从人外周血PBMC中用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增并经鉴定的DC;利用负栽GLC-82细胞抗原多肽的DC,刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL;③结果 人体外用血PBMC体外经7天诱导出的DC,具有典型的树突状细胞特性,经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,高表达CD3+、CD4+、CD8+.且随培养时间延长,CD3+和CD8+T细胞百分率增加,CD4+/CD8+比例下降,动态观察CTL增殖倍数迅速增加;④结论 利用3Mkcl单盐提取法制备肿瘤可溶性抗原.并以终浓度50ng/mL冲击致敏,从外周血PBMC中分离、扩增、活化的DC,使其负载肿瘤抗原,体外诱导能产生特异性CTL.
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膀胱癌患者膀胱腔内过继免疫治疗后外周血T细胞亚群的变化
①目的观察膀胱腔内过继免疫治疗后患者外周血中T淋巴细胞亚群分布的变化.②方法由膀胱肿瘤可溶性抗原与卡介苗(BCG)共同活化人外周血单个核细胞成为抗膀胱肿瘤特异性杀伤细胞-BT BAK细胞.临床随机选择37例膀胱癌术后患者进行膀胱腔内BT-BAK细胞灌注治疗,采用SAP免疫组化法于治疗前后分别测定患者外周血T细胞亚群分布的变化.③结果治疗2个疗程后患者外周血CD3+、CD4+T细胞亚群分别较治疗前增加约(28.58±7.16)%及(12.92±5.22)%,CD8+T亚群变化不显著.随诊平均18.1 6个月,仅1例发现膀胱粘膜轻度异型性增生,复发率为2.7%.④结论BT-BAK细胞膀胱腔内过继免疫治疗可显著提高膀胱癌患者全身免疫反应能力,有效降低患者术后膀胱肿瘤的复发率.
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食管癌抗原和超抗原构建肿瘤疫苗的抗癌作用研究
目的 利用食管癌肿瘤可溶性抗原(TSA)和超抗原(SEC)构建肿瘤疫苗,刺激外周血淋巴细胞,诱导产生细胞毒性T细胞(CTLs),对肿瘤细胞进行体内外杀伤作用研究,以探讨其抗肿瘤作用.方法 外周血淋巴细胞经肿瘤疫苗作用,进行体外培养,诱导产生细胞毒性T细胞;细胞毒实验测定效应细胞杀伤活性;建立小鼠移植瘤模型,用肿瘤疫苗进行干预治疗,观察其治疗效果.结果 经肿瘤疫苗刺激的淋巴细胞组诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P<0.05),对TSA来源的食管癌细胞具有选择性杀伤作用;体内研究发现肿瘤疫苗能显著减轻小鼠荷瘤负担,延长生存期.结论 肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC构建的肿瘤疫苗能产生高效特异性的抗肿瘤效果,显示出良好的抗肿瘤免疫治疗作用.
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肿瘤抗原诱导的T淋巴细胞膀胱灌注预防膀胱癌复发的临床观察
膀胱癌是泌尿系统恶性肿瘤之一,单纯手术切除后的复发率高达40%～70%[1].由于体内残留细胞是复发根源,临床上预防浅表性膀胱癌术后复发的常用方法仍以卡介苗及丝裂霉素、噻替派等膀胱腔内灌注为主,但总的疗效不理想.新兴的生物疗法已成为治疗肿瘤的又一模式.自1998年起我科已成功地为37例病人采用卡介苗与膀胱肿瘤可溶性抗原共同诱导的细胞毒性T淋巴细胞及其培养上清进行膀胱内灌注治疗,预防膀胱肿瘤术后复发,取得较好疗效.现总结如下.
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肺癌可溶性抗原致敏的DC诱导CTL特异性杀伤肺癌细胞的实验研究
目的 通过对负载人肺癌GLC-82细胞可溶性抗原的树突状细胞(DC)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞的杀伤研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据.方法 通过用3M KCl提取法和弱酸洗脱法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽,用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏从人外周血单核细胞(PBMC)中用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增并经鉴定的DC;利用负载GLC-82细胞抗原多肽的DC,刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL;进一步探讨该CTL对GLC-82,肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应.结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC,经光镜、电镜、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性;经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,诱导激活的CTL与靶细胞共育时镜下发现CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围,致使肿瘤细胞发生凋亡和坏死.结论 肺癌可溶性蛋白抗原能活化致敏DC,无需明确肿瘤特异抗原,获取方法简便可行;联合应用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导人pBMC中的单核细胞,能诱导出功能较强的DC;致敏DC能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8+表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应,对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应.
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树突状细胞的体外培养及其抗癌作用
背景与目的 恶性肿瘤患者免疫力低下,缺乏强有力的抗肿瘤免疫应答,其原因是肿瘤细胞的抗原性较弱,而且抗原提呈细胞的功能低下,使肿瘤抗原不能有效地提呈给淋巴细胞.因此如何能有效地诱导出抗肿瘤免疫效应是一个非常关键的问题.本研究通过建立体外培养树突状细胞(dendritic cells, DC)的方法并观察其诱导的抗肺癌作用的研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供实验依据.方法 3 mol/L氯化钾法提取人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽;从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中用GMCSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增DC,用流式细胞仪FCM及免疫染色法分析鉴定DC;肺癌肿瘤可溶性抗原(tumorsoluble antigen, TSA)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A, SEA)联合修饰致敏DC;以联合抗原修饰后的DC、单纯肺癌抗原TSA致敏的DC、单纯超抗原SEA修饰的DC和未经抗原修饰的DC分别与外周血T淋巴细胞共同孵育,刺激T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌抗原的特异性CTL(作为效应细胞分别称为TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、SEA-DCL、DCL);采用MTT法检测各效应细胞对靶细胞GLC-82、肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的抗癌活性;镜下观察DC、效应细胞形态及对靶细胞的杀伤过程.结果 诱导出高表达CD1a、HLADR、CD80具有典型树突状细胞特性的DC;TSA-SEA-DCL对靶细胞GLC-82的杀伤率明显高于TSA-DCL、SEA-DCL及DCL,亦明显高于对K562细胞的杀伤率;与靶细胞共育时镜下发现效应细胞CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围,致使肿瘤细胞发生变性坏死及凋亡.结论 本实验方法能成功诱导出具有典型特征的成熟DC,肺癌TSA联合超抗原SEA诱导的DC疫苗对肺癌细胞有高效特异杀伤作用.
关键词： 树突状细胞 肿瘤可溶性抗原 金黄色葡萄球菌肠毒素A 肺肿瘤 超抗原 -
肺癌可溶性抗原联合超抗原诱导的DC疫苗对肺癌细胞杀伤作用的研究
背景与目的 通过经肺癌肿瘤可溶性抗原(TSA)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合修饰致敏树突状细胞(DC)体外诱导对肺癌细胞杀伤作用的研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据.方法 3M KCI法提取人肺癌可溶性抗原;从人外周血单个核细胞(PBMC)中诱导扩增DC并鉴定;肺癌TSA和不同质量浓度的SEA联合修饰致敏DC;以联合抗原修饰后的DC、单纯肺癌抗原致敏的DC和未经抗原修饰的DC分别与同种异体T淋巴细胞共同孵育,MTT法测定混合淋巴细胞反应中DC的免疫刺激活性,诱导产生具有识别肺癌抗原的特异性CTL(作为效应细胞分别称为TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、DCL);用流式细胞仪FCS及免疫染色法分析鉴定DC和效应细胞表型;M1T法检测各效应细胞对靶细胞体外杀伤效应.结果 诱导出表达CD1a,CD80,HLA-DR分子的DC;经肺癌TSA和SEA联合修饰致敏后,上述分子表达上调;联合修饰后的DC具有较强的免疫刺激活性,DC/T比例1:10可能为适比例;TSA-SEA-DCL中CD3+CD8+细胞的比例大幅度增加;TSA-SEA-DCL对靶细胞GLC-82的杀伤率明显高于TSA-DCL及DCL,亦明显高于对肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的杀伤率.结论 经肺癌TsA和sE^联合修饰致敏的DC可诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CD8+表达增加的CTL;联合抗原诱导的DC疫苗对肺癌细胞有高效特异性的杀伤作用,肺癌TSA和超抗原SEA联合修饰的DC的活性明显强于单用肺癌TSA修饰.
关键词： 树突状细胞 肿瘤可溶性抗原 金黄色葡萄球菌肠毒素A 肺癌 -
可溶性抗原联合超抗原诱导的 CTL 抗瘤作用的实验研究
目的:探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞(CTLs)对肿瘤细胞杀伤机理.方法:外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养.对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定.结果:经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.05),对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化.结论:肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果.
