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加巴喷丁对糖尿病神经痛大鼠痛敏和脊髓Glu及下丘脑JNK的影响
目的 观察加巴喷丁(GBP)对糖尿病神经痛(PDN)大鼠皮肤机械痛敏和脊髓谷氨酸(Glu)含量及下丘脑c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的动态表达,探讨GBP在PDN治疗方面的作用机制.方法 制作链脲佐菌素(STZ)PDN大鼠模型.随机分为对照组、PDN组和GBP组.GBP组给予GBP干预,1次/d,按100 mg/kg,连续14d,灌胃给药.对照组大鼠不做任何处理,实验期间各组大鼠均隔天测定机械痛阈一次.实验结束后采用OPA柱前衍生高效液相色谱法测定各组大鼠Ls-DRG,L6-DRG和脊髓组织及脊髓微透析液中Glu含量,免疫组化SP法观察大鼠下丘脑JNK动态表达.结果 实验观察期内GBP组痛觉阈值稳中有升,PDN组痛觉阈值呈现进行性下降,较GBP组差异有统计学意义(P＜0.05).Glu在各实验组大鼠L5-DRG、I6-DRG、脊髓组织和脊髓微透析液中含量不同,GBP组脊髓组织和脊髓微透析液中Glu含量低于PDN组(P＜0.01);L5-DRG,L6-DRG中Glu含量高于PDN组(P＜0.05).JNK在PDN组大鼠下丘脑视上核、室周核和弓状核的表达量均高于GBP组(P＜0.05),也高于对照组(P＜0.01).结论 GBP具有减轻PDN大鼠皮肤机械痛敏的作用,其作用机制可能与抑制脊髓兴奋性氨基酸神经递质Glu的释放及下丘脑JNK的动态表达密切相关.
关键词： 加巴喷丁 糖尿病神经痛 c-Jun氨基末端蛋白激酶 谷氨酸 -
加巴喷丁对糖尿病性神经痛大鼠机械痛敏和背根神经节神经元JNK及p-JNK表达的影响
目的 观察加巴喷丁(GBP)对糖尿病性神经痛(PDN)大鼠皮肤机械痛敏以及背根神经节(DRG)神经元c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)以及磷酸化JNK(p-JNK)表达的影响.方法 制作链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,成模后6周,测定机械痛阈,出现疼痛行为(痛觉过敏)为PDN大鼠,纳入实验对象,并随机分为PDN组和GBP组.GBP组给予GBP干预,按100mg/kg,1次/日,连续14天,腹腔注射给药,同时PDN组腹腔注射等量生理盐水.实验期间各组大鼠均隔天测定机械痛阈一次并做记录,实验结束后采用免疫荧光标记方法观察各组大鼠L5-DRG,L6-DRG和S1-DRG神经元JNK和p-JNK的表达变化.结果 实验观察期内PDN组大鼠皮肤机械痛觉阈值呈现进行性下降,GBP组痛觉阈值稳中有升,但不能恢复至正常水平,和PDN组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).L5-DRG,L6-DRG和S1-DRG内JNK和p-JNK标记阳性神经元大多为中小型细胞,阳性标记主要位于胞质内,分别呈深红色和深绿色,PDN组JNK和p-JNK标记阳性神经元的数量明显多于GBP组,二者比较差异有显著意义(P＜0.05).结论 加巴喷丁具有减轻糖尿病性神经痛大鼠皮肤机械痛敏的作用,其机制可能通过抑制初级感觉神经元JNK和p-JNK的表达有关,本研究亦提示阻断或抑制JNK/SAPK通路活化可以起到缓解糖尿病性神经痛作用.
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急性呼吸窘迫综合征大鼠血小板 c-Jun氨基末端蛋白激酶磷酸化水平的变化
目的：探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）时血小板活化的信号通路。方法将30只健康SD大鼠按随机数字表法分为对照组（n＝6）和模型组（n＝24）。采用经尾静脉注射油酸0.25mL/kg制备ARDS模型；对照组给予等量生理盐水。模型组于制模后2、6、24、72h取腹主动脉血，分离血小板，采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测血小板丝裂素活化蛋白激酶（MAPKs）通路中的主要蛋白激酶c-Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）的磷酸化（pJNK）水平；处死动物取肺组织，计算肺系数（肺质量/体质量×100%）及肺湿/干质量（W/D）比值；苏木素-伊红（HE）染色后，光镜下观察肺组织病理学变化。结果与对照组相比，ARDS模型组大鼠制模后2h血小板pJNK水平即明显增高（灰度值：0.72±0.09比0.22±0.01），6h达峰值（灰度值：0.91±0.03比0.22±0.01），之后逐渐降低，至72h仍明显高于对照组（灰度值：0.39±0.06比0.22±0.01，均P＜0.05）。ARDS模型组大鼠制模后2h大鼠肺系数和肺W/D比值即较对照组明显升高〔分别为（1.30±0.20）%比（0.60±0.10）%、6.00±0.60比3.30±0.30〕，之后随时间延长逐渐降低，但直至72h肺系数和肺W/D比值仍明显高于对照组〔分别为（0.90±0.10）%比（0.60±0.10）%、4.80±0.70比3.30±0.30，均P＜0.05〕。光镜下显示，对照组大鼠肺组织无明显病理学改变。模型组制模后2h即可见明显的肺泡水肿和间质水肿，炎性细胞浸润，小血管扩张、充血，肺泡内有大量蛋白渗出物；24h病变达极期；72h肺泡腔液体渗出大部分被吸收，肺泡腔缩小，肺泡间隔增厚，炎性细胞浸润减轻，纤维组织增生，有微血栓形成。结论 ARDS时肺组织除发生病理学改变外，血小板也发生了活化，且其活化过程与JNK信号转导通路启动有关。
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鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制
目的 评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响,以及脊髓背角c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达的影响.方法 取鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠120只,随机分为对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(P组)和GDNF治疗组(G组),每组30只.P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury,CCI)模型.C组不给予任何处理；S组只暴露坐骨神经,但不结扎；P组鞘内注射生理盐水10μl,隔日1次,连续14天；G组鞘内注射GDNF 2 μg,用生理盐水稀释至10μ1,隔日1次,连续14天.各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency,PWTL)和机械刺激缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT),然后每组取10只大鼠处死,取L4-6脊髓背角,采用Western blot法测定磷酸化JNK(p-JNK)蛋白和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白的表达水平.结果 与C组比较,P组和G组PWTL和PWMT均缩短,脊髓背角p-JNK蛋白和p-ERK蛋白表达上调(P＜0.05)；与P组比较,G组PWTL和PWTL均延长,脊髓背角p-JNK蛋白和p-ERK蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角p-JNK蛋白及p-ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛.
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c-Jun氨基末端蛋白激酶在人角膜上皮细胞调控NLRP3炎症小体激活中的作用
目的:在高渗条件下,人角膜上皮细胞(HCECs)中c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)对NLRP3炎症小体所介导的炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)释放的作用.方法:设等渗、高渗、高渗+JNK抑制剂(SP600125) 3组,其中等渗组和高渗组均加入DMSO使其浓度和高渗+JNK抑制剂组DMSO浓度相同.用RT-PCR检测各组JNK、炎症小体各聚合成分(NLRP3、ASC、caspase-1)和炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6)的mRNA水平;用caspase-1活性试剂盒检测细胞中caspase-1的活性,用AOEB染色法检测细胞凋亡情况;用免疫荧光检测NLRP3、IL-1β的蛋白表达变化;用Western blot检测JNK、p-JNK、NLRP3、caspase-1、ASC和IL-1β的蛋白表达情况.结果:RT-PCR检测结果显示JNK抑制剂预处理细胞能抑制高渗刺激引起的JNK1、JNK2、NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、TNF-α、IL-8和IL-6的mRNA表达上调(P＜0.05).caspase-1活性测定结果显示JNK抑制剂预处理细胞能抑制高渗刺激引起的caspase-1活性增强(P＜0.001).AOEB染色检测显示JNK抑制剂预处理后,细胞凋亡减少.免疫荧光结果显示JNK抑制剂能抑制高渗引起的NLRP3、IL-1β蛋白表达上调.Western blot进一步提示该抑制剂能够抑制高渗刺激引起的p-JNK、炎症小体聚合成分NLRP3、caspase-1和炎症因子IL-1β的蛋白表达上调(P＜0.05).结论:HCECs在高渗条件下,NLRP3炎症小体被激活,从而分泌更多活性IL-1β,而JNK在调控NLRP3炎症小体的激活以及下游的炎症因子释放中起到了重要作用.
关键词： 高渗 c-Jun氨基末端蛋白激酶 炎症小体 白细胞介素1β 干眼病 -
细胞外信号调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端蛋白激酶在人肝硬化肝癌组织中的表达
目的 观察人肝硬化肝癌组织中丝裂原活化蛋白激酶家族两种主要亚型细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测10例人中晚期肝硬化肝癌及其癌旁正常组织中ERK、JNK mRNA的相对表达量,并采用Western blot检测上述组织中ERK、JNK蛋白产物表达.结果 90%(9/10)的肝癌组织中ERK、JNK mRNA和蛋白表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)该基因表达缺失和蛋白表达减少,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 肝硬化肝癌组织中ERK、JNK表达处于活化状态,可能在肝硬化肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
关键词： 癌 肝细胞 肝硬化 细胞外信号调节蛋白激酶 c-Jun氨基末端蛋白激酶
