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内质网分子伴侣29在胃癌中的表达及临床意义研究
目的 探讨ERp29在胃癌中的表达及其与临床病理特征、预后等之间的关系.方法 通过免疫组化检测胃癌组织及癌旁组织中ERp29的表达情况,并分析ERp29与临床病理特征及预后的相关性.结果 ERp29在胃癌旁组织及癌组织中的阳性表达率分别为为80.48％(66/82)、45.12％ (37/82),两者相比差异具有统计学意义(P＜0.05).ERp29的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、癌组织学类型及局部浸润深度等无明显相关性,但与肿瘤TNM分期及淋巴结转移呈负相关.ERp29表达阳性患者的3年生存率、平均生存期均高于阴性组患者.结论 胃癌组织ERp29的表达下降,并且与肿瘤的临床病理特征及预后相关,提示ERp29是一个潜在抑癌基因.
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ERp29在肿瘤中的研究进展
内质网在动植物中分布广泛,功能多样,它既是所有生物膜的来源;又是细胞钙离子的存储库,对细胞内钙信号起调节作用.它对分泌蛋白的质量进行严格的控制,新生蛋白只有经过信号肽切除、N糖基化、二硫键的正确连接才能形成正确的空间结构,在此过程中分子伴侣发挥了重要作用[1].当未折叠或错误折叠蛋白质在内质网中累积,或细胞内钙稳态失衡时,引起内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).细胞将启动防卫性反应即非折叠蛋白质反应(unfolded protein response,UPR),包括增强蛋白质折叠能力、停滞大多数蛋白质的翻译、加速蛋白质的降解等[2].
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ERp29——一种新的内质网蛋白
蛋白二硫键异构酶是内质网非常重要的氧化还原酶和分子伴侣,硫氧还结构域的两个活性半胱氨酸是蛋白功能的物质基础.ERp29是近十年来发现的特殊内质网蛋白,硫氧还结构域与蛋白二硫键异构酶相似但缺失活性半胱氨酸.它在动物细胞广泛存在.不具备已知分子伴侣的特征(N端糖基化、与ATP结合、与Ca2+结合).虽然人们对其进行深入研究,包括空间结构、组织分布、病理模型的表达变化,但是ERp29的生物学功能还不清楚,暂时将之归类为蛋白分泌因子和外运蛋白.
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PSI诱导PC12细胞帕金森病模型中ERp29蛋白表达
目的:探讨泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍诱发帕金森病(PD)细胞模型的作用机制,为深入研究PD的发病机制提供理论依据.方法:建立PSI诱导的PC12细胞模型,实验组、对照组分别加入PSI和DMSO(终浓度为10μmol·L-1)孵育36 h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF Pro MS)鉴定出差异蛋白.结果:实验组与对照组比较,在36 h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡(细胞核呈固缩状或碎裂状),凋亡百分率为25.53%.实验组内质网蛋白ERp29与对照组比较表达量显著降低,差异有显著性(P＜0.01).结论:内质网应激(ERS)在UPS功能障碍引起PD的病理变化过程中起重要作用.
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ERp29蛋白在BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子中的鉴定和定位
目的 对在BALB/c小鼠附睾精子中内质网蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29,ERp29)进行鉴定以及定位.方法 应用免疫印迹方法鉴定BALB/c小鼠附睾头、尾部精子ERp29蛋白,同时利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究ERp29在附睾头、尾部精子上的定位.结果 证实ERp29蛋白存在于BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子中,且其在尾部精子中含量较头部明显增高.ERp29蛋白主要定位于BALB/c小鼠附睾头部精子的头部前端,而在附睾尾部精子则主要定位于头部和尾部主段.结论 通过对ERp29蛋白在BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子上的鉴定和定位,可以帮助进一步研究该蛋白对小鼠精子的作用.
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内质网蛋白29在食管癌中的表达及其临床意义
目的:探讨食管癌组织中ERP29的表达情况及其与食管癌临床病理特征以及预后等之间的关系.方法:食管癌切除手术标本60例,通过免疫组化检测ERP29在食管癌组织及癌旁食管正常组织中的表达情况.结果:ERP29在食管癌旁组织中的阳性表达率为85％,而在食管癌组织中的阳性表达率为43.3％,两者相比具有统计学差异(x=22.652,P＜0.001).食管癌组织ERP29的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、癌组织学类型及局部浸润深度等无明显相关性,但与肿瘤TNM分期及淋巴结转移呈负相关.患者食管癌组织ERP29表达阳性组1、2及3年生存率分别为92.3％、80.8％、65.4％,高于食管癌组织ERP29表达阴性组79.4％、55.9％、35.3％.根据Kaplan-Meier生存分析和log-rank检验,ERP29表达阳性与阴性患者相比,有统计学差异.结论:食管癌组织ERP29的表达与食管癌旁组织相比明显下降,并且食管癌组织ERP29的表达与肿瘤分期、淋巴结转移呈负相关,提示ERP29是一个潜在抑癌基因.ERP29表达与食管癌的预后相关,可作为预测食管癌预后的一个潜在指标.
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内质网蛋白29在乳腺癌中的表达及意义
目的：探讨内质网蛋白29（ERp29）在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法通过免疫组化 SP 二步法检测乳腺癌组织中 ERp29的表达情况，并分析 ERp29与临床病理特征和无病生存期（DFS）等的关系。结果共收集71例患者的乳腺癌组织标本，42例 ERp29表达阳性，阳性表达率为59.15％，ERp29表达与患者的 TNM分期、肿块直径存在统计学关联，但未见与患者年龄、病理分级、淋巴结转移及激素受体表达、原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER －2）表达和辅助治疗等因素间存在统计学关联。ERp29表达阳性患者3年 DFS 高于阴性患者。Cox 回归分析显示 TNM分期（包括肿块直径和淋巴结转移）是影响乳腺癌患者预后的因素（OR ＝34.218，95％CI：7.828～149.566，P ＜0.05）。结论乳腺癌组织 ERp29表达与肿瘤的病理特征及预后相关，但 ERp29是否为与预后相关的潜在抑癌基因，有待更多方面作进一步验证。
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ERp29在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的 研究结直肠癌中内质网蛋白29(ERp29)的表达情况及临床意义.方法 对62例结直肠癌患者病理组织切片,行ERp29免疫组化染色,统计分析癌组织及癌旁组织 ERp29表达情况,并比较不同ERp29表达水平的结直肠癌患者,其临床及病理特征差异有无统计学意义.结果 62例癌组织中ERp29表达阳性24(38. 7％)例,阴性38(61. 3％)例,癌旁组织阳性58(93. 5％)例,阴性4(6. 5％)例,癌组织 ERp29阳性组与阴性组之间,肿瘤的TNM分期以及淋巴结转移情况差异有统计学意义(P＜0. 05).结论 结直肠癌组织中ERp29的表达水平低于癌旁组织,ERp29的表达情况可为评估肿瘤转移倾向及预后提供一定参考价值.
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RNAi抑制IEC-6细胞中ERp29表达
目的构建抑制大鼠ERp29基因表达的重组质粒,并在IEC-6细胞中发挥作用.方法根据大鼠ERp29的基因序列,设计合成含有发夹结构的寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至pAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常IEC-6细胞,通过PCR方法对siERp29干扰片段进行鉴定,并采用Western blot检测ERp29蛋白水平的表达变化.结果重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示ERp29干扰片段已克隆至pAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致.重组质粒转染IEC-6细胞后经G418筛选,成功获得阳性克隆,Western blot结果显示ERp29的蛋白水平表达显著下降.结论成功构建ERp29基因RNA干扰表达质粒,并在IEC-6细胞中发挥抑制作用,这为深入研究该基因在电离辐射中的作用奠定了基础.
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ERp29基因的克隆及其在IEC-6细胞中的表达
目的克隆小鼠ERp29基因并在IEC-6细胞中表达.方法采用RT-PCR方法从小肠上皮细胞克隆该基因的编码区,经T-载体克隆并测序证实后构建真核表达载体,并转染IEC-6细胞,RT-PCR分析外源基因的表达.结果从小肠上皮细胞总RNA中成功地克隆了ERp29基因,序列测定结果表明克隆的序列与数据库中序列完全一致.构建的真核表达载体与预期一致,表达质粒转染细胞后的RT-PCR分析结果表明:外源的质粒得到了有效的表达.结论成功地克隆了ERp29基因,并获得真核表达.
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电离辐射后ERp29蛋白在IEC-6细胞中的表达
目的探讨大鼠空肠上皮细胞株(IEC-6)受到不同剂量γ射线照射后,ERp29蛋白(endoplasmic reticulum protein)在不同时相点的表达变化情况.方法分别提取正常IEC-6细胞和5、10、15、20 Gy照射后3、12、24、48、72 h细胞的蛋白样品,采用Western blotting方法检测ERp29的表达.结果不同剂量照射后IEC-6 ERp29蛋白表达比正常细胞高,蛋白表达随照射时间的增加而增加.结论电离辐射可诱导IEC-6细胞高表达ERp29蛋白,提示该蛋白在肠道的损伤修复中起重要作用.
关键词： ERp29 电离辐射 肠上皮细胞 Western blotting
