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莲子心化学成分及其抑制蛋白二硫键异构酶活性研究
蛋白质二硫键异构酶既能抑制肿瘤细胞凋亡,又能促进肿瘤细胞浸润转移,在肿瘤的发展进程中具有关键作用.为了研究中药莲子心是否对该酶活性有影响,该文首先对莲子心的化学成分进行了提取分离,得到12个单体化合物,其中N-甲基乌药碱、山柰酚、金圣草素-7-O-新橘皮糖苷和甘露醇为首次从该药材中分离得到.随后该文研究了莲子心中主要的生物碱成分N-甲基乌药碱、莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱对蛋白质二硫键异构酶活性的影响,首次发现它们均具有抑制蛋白二硫键异构酶活性的作用,其中N-甲基乌药碱活性强(IC50 1.4 μmol·L-1).
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肿瘤相关基因TXNDC5的研究进展
TXNDC5基因定位于染色体6p24.3上并且具有编码蛋白二硫键异构酶的功能。其所编码的蛋白含有3个硫氧还蛋白结构域并且可以补偿二硫键异构酶在酵母中功能的损失。研究发现TXNDC5基因在一些癌组织中的表达水平明显高于正常组织。本文主要就TXNDC5在肿瘤领域的新研究进展进行综述。
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ERp29——一种新的内质网蛋白
蛋白二硫键异构酶是内质网非常重要的氧化还原酶和分子伴侣,硫氧还结构域的两个活性半胱氨酸是蛋白功能的物质基础.ERp29是近十年来发现的特殊内质网蛋白,硫氧还结构域与蛋白二硫键异构酶相似但缺失活性半胱氨酸.它在动物细胞广泛存在.不具备已知分子伴侣的特征(N端糖基化、与ATP结合、与Ca2+结合).虽然人们对其进行深入研究,包括空间结构、组织分布、病理模型的表达变化,但是ERp29的生物学功能还不清楚,暂时将之归类为蛋白分泌因子和外运蛋白.
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家兔各组织蛋白二硫键异构酶的活性及含量研究
目的探讨蛋白二硫键异构酶(PDI)的生物学功能及与微粒体的关系.方法应用改良的Hillson方法及酶联免疫技术,测定家兔不同组织细胞内PDI的活性及其含量.结果家兔不同组织细胞内均有PDI分布,但酶活性及含量差异显著,在分泌功能旺盛的胰腺细胞、肝细胞其含量占细胞总蛋白的2～6%,是肌细胞的100倍,酶比活性为4～24unit/g,约为肌细胞的80～400倍,不同细胞微粒体获得率明显不同,单位重量微粒体蛋白含量基本相同.结论不同细胞内质网含量不同,而单位重量内质网的蛋白种类和含量具有一定保守性.
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共表达蛋白二硫键异构酶对IFNβ-HSA融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响
目的 探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HAS)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响.方法 根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并整合入融合蛋白(IFNβ-HAS)基因工程菌中,筛选共表达PDI的重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA法检测IFNβ-HAS的表达量.结果 经PCR鉴定,重组表达质粒pPICZαA-PDI已转入毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HAS中.经SDS-PAGE分析,PDI在菌体内大量表达,原始菌株和共表达菌株均明显表达融合蛋白IFNβ-HAS,共表达PDI菌株表达量提高了60%,ELISA法测定达(22.49±3.52)mg/L.结论 共表达PDI能促进外源蛋白的分泌表达,为进一步研究在毕赤酵母中过量表达分子伴侣对其分泌外源蛋白的影响奠定了基础.
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蛋白二硫键异构酶小分子抑制剂PACMA-31对血小板活化、血栓形成以及止血的影响
目的 蛋白二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)通过催化底物蛋白的二硫键调控其结构和功能.近期有研究发现小分子抑制剂PACMA-31 (propynoic acid carbamoyl methyl amide-31)能够特异性地抑制PDI酶活性,本文我们将探讨PACMA-31对血小板活化和血栓形成的影响.方法 通过还原酶活性测定实验验证PACMA-31抑制PDI酶活的特异性;通过血小板聚集实验、活体荧光显微镜实验和小鼠尾巴出血实验检测PACMA-31对血小板聚集,体内血栓形成和止血的影响.结果 PACMA-31能够显著地抑制重组PDI蛋白的还原酶活性,而不抑制重组ERp57蛋白的还原酶活性.PACMA-31抑制血小板聚集,同时对血小板的积聚以及纤维蛋白形成起抑制作用,并能够延长小鼠尾巴出血时间.结论 PDI的小分子抑制剂PACMA-31显著抑制血小板聚集,血栓形成和止血.
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蛋白二硫键异构酶调控组织因子介导的凝血酶生成
目的 研究蛋白二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)在血栓形成中的机制.方法 应用重组PDI蛋白和PDI基因敲除小鼠通过凝血酶生成实验(thrombin generation asaay,TGA)探讨PDI对组织因子促凝活性的调控作用.结果 组织因子抗体(4501)几乎完全抑制单核细胞介导的凝血酶产生(P＜0.001),表明该凝血反应依赖于组织因子;重组PDI蛋白(rPDI ss-ss)促进凝血酶的产生(P＜0.01);相比野生型单个核细胞,PDI敲除的单个核细胞促凝活性明显降低(P＜0.05).结论 PDI对于组织因子介导的凝血酶生成具有重要的调控作用.
