首页 > 文献资料
-
MCC950在野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型中的治疗作用及其机制研究
目的 探讨MCC950是否可缓解野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠肺动脉高压.方法 雄性SD大鼠27只,采用数字表法随机分为对照组、MCT组和MCT+ MCC950 3组,MCT+ MCC950组于腹腔注射MCT第16天给予MCC950干预,每2d1次,共7次.至第31天,检测右心室收缩压、右心肥厚指数;观察肺细小动脉结构,计算血管中膜厚度百分比(mediathickness,MT％),检测肺组织中NLRP3、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和相关分子的mRNA及蛋白表达情况.结果 与对照组比较,MCT组RVSP升高显著[(50.72±3.65) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa) vs (24.29±1.28)mmHg,P=0.000],而MCT+MCC950组与MCT组相比显著降低[(34.19±1.94) mmHg vs(50.72 ±3.65) mmHg,P＜0.01].对照组右心肥厚指数为0.29±0.01,MCT组(0.61 ±0.04)明显较高,差异有统计学意义(P=0.000),MCT+ MCC950组与MCT组相比降低(0.48 ±0.03 vs0.61±0.04,P＜0.01).与对照组比较,MCT组大鼠各级肺血管MT％均显著增高(P=0.000),MCT+ MCC950组与MCT组相比降低,且差异有统计学意义(P＜0.01).MCT组大鼠肺组织中NLRP3、IL-1β和相关分子的mRNA及蛋白表达较对照组均上调,而MCT+ MCC950组肺组织中NLRP3、IL-1β和相关分子的表达量与MCT组相比均降低.结论 MCC950可能通过抑制NLRP3信号通路明显改善肺血管重塑,延缓肺动脉高压进程,具应用于肺动脉高压治疗的潜在价值.
-
MCC950能减轻线粒体损伤相关分子模式对 肺泡巨噬细胞的致炎效应
目的：观察一种化学合成小分子物质MCC950对线粒体损伤相关分子模式（MTDs）诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的影响，并分析其可能的机制。方法利用差速离心法提取SD大鼠肝脏组织来源的MTDs。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞株，并分为空白对照组、LPS阳性对照组（1mg/LLPS刺激12h）、MTDs组（50、100、200mg/LMTDs刺激12h）、MCC950组（0.1μmol/LMCC950处理30min）、MCC950+MTDs组（终浓度0.001、0.01、0.1、1.0μmol/LMCC950预处理30min+100mg/LMTDs刺激12h）5组。收集各组细胞上清液及细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-18）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1及其前体（caspase-1、pro-caspase-1）、IL-1β及其前体（pro-IL-1β）的蛋白表达。结果①与空白对照组相比，50、100、200mg/L的MTDs刺激组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-18含量均显著升高〔TNF-α（ng/L）：459.17±66.71、968.27±124.29、1128.6±172.02比34.67±11.66，IL-1β（ng/L）：341.57±38.09、685.00±75.36、784.97±89.28比26.33±8.04，IL-18（ng/L）：175.87±37.43、364.23±39.24、370.60±44.55比73.77±12.10，均P＜0.05〕，且呈剂量依赖性；并与LPS组具有类似的致炎作用。②与MTDs组相比，0.01、0.1及1.0μmol/LMCC950+MTDs组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量显著降低〔IL-1β（ng/L）：334.23±33.56、38.67±12.89、36.13±17.69比724.00±77.45，IL-18（ng/L）：165.77±25.47、71.37±5.99、66.80±14.61比412.23±40.15均P＜0.05〕，其中0.1μmol/L为产生抗炎作用的佳有效浓度。而各浓度MCC950对TNF-α影响不大。③与MTDs组相比，0.01μmol/LMCC950+MTDs组细胞中caspase-1及IL-1β蛋白表达显著下降（A值：14753.29±950.31比19222.50±1234.13，9981.06±673.63比12759.26±574.69，均P＜0.05），pro-caspase-1及pro-IL-1β蛋白表达无明显变化（A值：17856.08±1076.20比17059.01±966.37，23020.19±3463.57比20642.36±1714.36，均P＞0.05）。结论 MCC950能够减少MTDs诱导的肺泡巨噬细胞炎性因子分泌，可能通过抑制炎性体活化发挥作用。
关键词： 急性呼吸窘迫综合征 线粒体损伤相关分子模式 MCC950 炎症反应 炎性体 -
MCC950对线粒体损伤相关分子模式诱导大鼠肺损伤的保护作用
目的 严重创伤诱发的急性呼吸窘迫综合征目前尚无特异性治疗策略,探讨MCC950对线粒体损伤相关分子模式(MTDs)诱导肺损伤的影响,初步分析其作用机制.方法 将40只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、MTDs组、MCC950组和MTDs+MCC950组4组,MTDs+MCC950组采用腹腔注射MCC950(20 mg/kg)预处理SD大鼠1 h后,经尾静脉注射MTDs(5%体积肝[5])到大鼠体内;对照组注射等渗盐水;MTDs组腹腔注射等渗盐水,尾静脉注射MTDs;MCC950组腹腔注射MCC950,尾静脉注射等渗盐水,12 h后麻醉,腹主动脉放血处死.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18含量,BCA法检测BALF中蛋白含量,称重以计算肺湿重/体重比值(LWW/BW),采用HE染色后光镜观察组织病理学改变,Smith肺损伤评分评价肺损伤情况,Western blot检测Pro-Caspase-1和Caspase-1蛋白表达.结果 与对照组相比,MTDs组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18含量显著增多(P<0.05),MCC950组差异无统计学意义(P>0.05),MTDs+MCC950组中TNF-α含量显著增多(P<0.05),而IL-1β和IL-18差异无统计学意义(P>0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组BALF中IL-1β和IL-18含量显著减少(P<0.05).与对照组相比,MTDs组LWW/BW比值明显增大[(4.19±0.36)mg/g vs(6.32±0.54)mg/g,P<0.05],BALF中蛋白含量明显增多[(0.12±0.03)g/L vs(0.79±0.07)g/L,P<0.05];与MTDs组相比,MCC950组、MCC950+MTDs组LWW/BW比值[(4.35±0.29)mg/g、(4.47±0.46)mg/g]明显降低(P<0.05),BALF中蛋白含量[(0.12±0.06)g/L、(0.15±0.06)g/L]明显减少(P<0.05).Smith肺损伤评分统计分析表明,与对照组相比,MTDs组肺损伤评分明显增高(1.00±0.00 vs 8.33±0.58,P<0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组肺损伤评分明显降低(8.33±0.58 vs 3.67±0.58,P<0.05).与对照组相比,MTDs组Pro-Caspase-1和Caspase-1蛋白水平明显增高(P<0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组Caspase-1蛋白条带灰度降低,蛋白表达水平降低(P<0.05),Pro-caspase 1无明显变化(P>0.05).结论 MCC950可能通过抑制NLRP3炎性体活化对MTDs诱导的肺损伤发挥保护作用.
关键词： 肺损伤 线粒体损伤相关分子模式 MCC950 NLRP3炎性体 -
Mcc950对H2O2诱导的ARPE-19细胞炎性损伤的保护作用
目的:探讨Mcc950对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)炎性损伤的保护作用.方法:将ARPE-19细胞分为正常对照组、H2O2损伤组、单纯Mcc950给药组、Mcc950预处理+H2O2损伤组,采用CCK-8法检测细胞活力并确定H2 O2和Mcc950合适的实验浓度,ELISA法检测细胞分泌的IL-1β 浓度,免疫印迹(Western blot)法检测细胞中NLRP3炎性小体相关蛋白的表达情况,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况.结果:细胞活力随H2 O2刺激浓度的增加逐渐下降,H2O2浓度为400μmol/L时细胞活力显著降低;而0.1、1μmol/L Mcc950对细胞活力无显著影响,故选取400μmol/L H2O2和1μmol/L Mcc950作为合适的实验浓度.与正常对照组相比,H2O2损伤组细胞活力显著降低,细胞上清液中IL-1β 浓度显著升高,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),而与H2O2损伤组比较,Mcc950预处理+H2O2损伤组细胞活力明显升高,细胞上清液中IL-1β浓度和细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot检测结果显示,H2O2能够促进细胞中NLRP3、Pro-caspase1和caspase1的表达,而Mcc950预处理+H2O2损伤组细胞中NLRP3、Pro-caspase1依然保持高表达,但caspase1表达水平得到明显抑制,表明Mcc950能有效抑制NLRP3炎性小体的激活从而干扰具有细胞凋亡作用的成熟caspase1的产生.结论:Mcc950能够有效抑制H2O2诱导的NLRP3炎性小体激活,恢复细胞活力,抑制细胞凋亡.
-
Mcc950对小鼠脑创伤后神经元树突棘的保护作用
目的 研究Nod样受体蛋白3(NLRP3)抑制剂Mcc950对小鼠脑创伤后神经元树突棘的保护作用.方法 选取60只C56BL/6J成年小鼠通过液压打击的方法建立小鼠多次脑创伤模型,然后将小鼠随机分为对照组、生理盐水组、Mcc950组各20只进行创伤后的处理,8个月时取小鼠脑组织进行高尔基染色计数神经元树突棘计数比较,以分析Mcc950对神经元树突棘的保护效应,并取脑皮层蛋白进行蛋白印记实验分析树突棘调节蛋白差异.结果 30μm长树突上树突棘的数量:Mcc950组(32.080±1.831)明显高于对照组(20.820±2.252)和生理盐水组(19.380±1.623),差异具有统计学意义(Mcc950组vs对照组:t=3.921,P=0.001;Mcc950组vs生理盐水组:t=5.187,P＜0.001;对照组vs生理盐水组:t=0.527,P=0.603).Mcc950组在PSD95、Profilin1以及GTPase HRAS的表达量均明显高于对照组和生理盐水组,差异具有统计学意义(Mcc950组比较于对照组和生理盐水组表达倍数分别是:PSD95:4.64,4.34;Profilin1:4.43,4.47;GTPase HRAS:2.97,3.03.PSD95:对照组vs Mcc950组:t=8.880,P=0.012,生理盐水组vs Mcc950组:t=7.248,P=0.002;Profilin1:对照组vs Mcc950组:t=6.654,P=0.022,生理盐水组vs Mcc950组:t=5.340,P=0.033;GTPase HRAS:对照组vs Mcc950组:t=5.092,P=0.036,生理盐水组vs Mcc950组:t=4.469,P=0.047).结论 Mcc950作为NLRP3的抑制剂,对脑创伤后神经元树突棘数量的稳定具有保护效应.
