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RNA快速提取一步法的建立
RNA是分子生物学研究的一个重要组成部分, 不论是cDNA文库的构建、RT-PCR、RNA序列分析、差异显示(mRNA differential display)、代表性差异分析 (representational Difference Analysis, RDA)、抑制性消减杂交(suppression Subtraction Hybridization, SSH)、Northern印迹分析、蛋白质的体外翻译等均依赖于高纯度完整的RNA. 因此, 如何获得高质量的RNA是研究人员关注的问题.1987年Chomczynski等[1]建立了酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(acid-guanidine-phenol-chloroform, AGPC).该方法较以往的传统方法操作简单,无需特殊的设备,抽提时间缩短至4 h,因而得到广泛的应用.数家公司据此开发出RNA提取试剂盒[2,3].使用试剂盒简单方便,但价格相对昂贵.为探索操作简便、经济实用、快速有效的RNA提取方法,我们分析了大量相关文献资料,进行了多次实验,成功地研制出一种新型的RNA提取试剂,建立了其操作程序,我们称之为RNA快速提取一步法.其性能达到进口试剂盒的水平,但造价低廉、操作简便,特别适用于国内实验室.
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口蹄疫病原免疫学的分子基础
FMDV属于微RNA病毒科,口蹄疫病毒属成员,是一种单股正链RNA病毒.基因组长度约为8 500 nt, 5'端共价连接一种特殊的小蛋白VPg(3B),其后为一个约1 300 nt的5'非编码区,与宿主RNA相比,FMDV的5'非编码区没有帽子结构,而是靠一个内部核糖体进入位点(IRES)启动基因组的复制;3'端含有poly(A)的尾巴,尾巴上游为100 nt的非编码区.5'非编码区和3'编码区之间为一个大约7 500 nt 的开放阅读框(ORF),编码一个2 300 aa多聚蛋白,这个多聚蛋白在感染细胞中或体外翻译体系从未发现,因为其被病毒编码的蛋白酶迅速裂解,这个蛋白酶也存在于多聚蛋白中.