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高效分子排阻色谱法测定头孢羟氨苄胶囊中的高分子杂质
目的 建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定头孢羟氨苄胶囊中的高分子杂质.方法 采用TSK-GEL G2000SWXL凝胶色谱柱(30 cm×7.8mm×5μm);流动相:0.005 mol·L-1醋酸铵溶液(用稀氨溶液调节pH值至7.0);流速:0.7 mL·min-1;检测波长:263nm.结果 高分子杂质在头孢羟氨苄质量浓度0.035～5.00mg·mL内线性关系良好(r=0.999 9):头孢羟氨苄的检测限为1.5ng,高分子杂质的定量限以头孢羟氨苄计为4.9ng;对照溶液重复进样(n=6)的精密度(RSD)为0.24%,样品测定(n=6)的重复性(RSD)为1.35%.结论 本方法操作简单,专属性强,灵敏度高.
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高效分子排阻色谱法分析头孢米诺钠
目的 建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法分析头孢米诺钠聚合物等杂质.方法 采用高效凝胶色谱柱(TSKgel G2500 PWxL7.8 mm×300 mm);流动相为pH 7.0的0.005 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.005 mol·L-1磷酸氢二钠-0.005 mol·L-1磷酸二氢钠(61∶39)]；流速为0.5 mL· min-1;检测波长为254 nm;进样量为10μL.结果 头孢米诺的线性范围为2.02～40.36ug·mL-1 (r=0.9999)；定量限为0.8 ng;样品测定的线性范围为0.4～2.5 mg·mL-1 (r=0.9995).结论 该方法能够较好地分离头孢米诺钠和聚合物等杂质,简便快速、定量准确、重复性好,可用于头孢米诺钠中聚合物等杂质的检验.
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测定重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)原液纯度的高效分子排阻色谱法的建立及方法的验证
目的 建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证.方法 建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法 的专属性、精密度、检测限、定量限、耐用性及拖尾因子等指标进行验证.结果 空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现.重复性试验中原液参比品保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.14％和0.21％,3批分析原液保留时间RSD均＜0.3％,峰面积RSD均＜0.8％;中间精密度试验原液参比品和3批分析原液保留时间RSD均＜0.2％;峰面积RSD均＜2.0％.检测限为样品浓度2.5μg/mL,进样体积20 μL;定量限为样品浓度10 μg/mL,进样体积20 μL.耐用性试验中原液参比品在不同浓度流动相中连续进样3次,保留时间和峰面积RSD均＜2.0％.原液参比品和3批分析原液目的峰的拖尾因子为1.210±0.01,RSD为0.90％.结论 建立的SEC-HPLC方法专属性、精密度、耐用性良好,适用于EV71(汉逊酵母)VLP纯度的检测.
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重组戊型肝炎疫苗类病毒颗粒纯度高效分子排阻色谱检测方法的建立、验证及应用
目的 建立检测重组戊型肝炎疫苗类病毒颗粒(hepatitis E virus-like particle,HE-VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(size-exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC),并对该方法进行验证及应用.方法 利用TSK G5000 PW色谱柱(7.5 mm×30cm)和LC-20AT高效液相色谱系统检测HE-VLP纯度,并对该方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、耐用性进行验证,确定检测限及定量限.应用建立的方法检测戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)疫苗原液以及纯化工艺过程中粗纯液、超滤液、超滤透过液、层析纯化液纯度;将蛋白原液与铝佐剂进行吸附制备疫苗半成品,应用建立的方法检测游离蛋白含量.结果 空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现;样品浓度在50 ～ 500 μg/mL时,溶液浓度与吸收峰峰面积呈线性相关,相关系数R2=0.999;6次重复进样峰面积相对标准偏差(RSD)为0.47％;不同实验人员间隔7d对相同样品进行5次检测,RSD均小于2.0％;将样品浓度2 μg/mL,进样体积20 μL,即0.04 μg定为检测限,将样品浓度4μg/mL,进样体积20μL,即0.08 μg定为定量限;耐用性试验中,PBS浓度在0.05～0.001 mol/L范围内,保留时间RSD为0.89％,峰面积RSD为0.94％.该方法可在20 min内完成检测,原液纯度均不低于95％;随着蛋白纯化步骤的进行,纯度逐步显著提高;吸附完全性检测显示灵敏度较为理想.结论 建立的SEC-HPLC法各项指标均符合要求,可用于HE-VLP蛋白的纯度检测.
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盐酸头孢替安酯的聚合物检查方法的建立与验证
目的 建立高效分子排阻色谱(HPSEC)发测定盐酸头孢替安酯聚合物.方法 采用凝胶色谱柱(TSK G2500 PWxl,7.8mm×30cm);流动相为PH7.0 的0.001mol/L磷酸盐缓冲液[0.001mol/L的磷酸氢二钠溶液-0.001mol/L的磷酸二氢钠溶液(61:39)]一乙睛(80:20);流速0.5mL/min;检测波长为:254nm;进样量为20uL;自身外标法定量.结果 头孢替安的线性范围为1.03～20.60μg/mL定量限为0.66×10-5mg/mL;重复性(RSD)为0.44%;对照品溶液室温放置8h内稳定,满足检测要求.样品测定的线性范围为1.03～20.60μg/mL;重复性(RSD)为1.48%;样品溶液室温放置8h内不稳定,需要临用现配.结论 该方法能够较好的分离盐酸头孢替安酯及其聚合物,可用于盐酸头孢替安酯中聚合物的检验.
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高效分子排阻色谱法测定头孢硫脒聚合物含量
目的 建立以凝胶色谱柱的分子筛机制为分离原理的高效分子排阻色谱法测定头孢硫脒聚合物含量.方法 采用TSK-GELG2000SWXL柱(7.8mm×30 cm,5μm),以0.01mol·L-1醋酸铵溶液:乙腈(93:7)为流动相,流速0.5mL·min-1;检测波长254nm.结果 头孢硫脒浓度在0.4～2.0mg·mL-1范围内与聚合物的峰面积呈良好的线性关系(r=0.9989).结论 本方法简便快速.定量准确,重现性好,可用于头孢硫脒聚合物的含量测定.
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高效分子排阻色谱法分析头孢尼西钠中的聚合物
目的:建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定头孢尼西钠中的聚合物,并与葡聚糖凝胶G-10为填料的凝胶色谱法进行比较.方法:HPSEC法采用表面键合亲水薄膜硅胶为填料的色谱柱(Zenix SEC-150,7.8mm×300 mm);流动相为0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液-乙腈(95∶5);流速:1.0 mL· min-1;检测波长250nm.结果:HPSEC法:头孢尼西及其聚合物分别在1～100μg·mL-1和0.25～1.75 mg·mL-1范围内的线性关系良好,头孢尼西的定量限为1.0 ng·mL-1,精密度(RSD)为0.57％,聚合物测定重复性(RSD)为1.01％.凝胶色谱法:头孢尼西的定量限为500ng· mL-1,精密度(RSD)为1.81％,聚合物测定重复性(RSD)为3.08％.HPSEC和凝胶色谱法测得的样品中头孢尼西聚合物的量分别为1.31％和0.23％.结论:HPSEC法适于测定头孢尼西钠聚合物,较凝胶色谱法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便.
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高效分子排阻色谱法测定注射用头孢西丁钠聚合物
目的:建立了高效分子排阻色谱法测定注射用头孢西丁钠聚合物的方法.方法:采用TSK-GEL G2000SWXL色谱柱,流动相为0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液[-0.01 mol·L-1 NaH2PO4溶液-0.01 mol· L-1 Na2 HPO4溶液(34∶66)]-乙腈(95∶5),检测波长:232 nm.结果:头孢西丁在0.25～10.0μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),重复性较好(RSD为0.4％,n=6),以头孢西丁计检出限为0.6 ng,定量限为1.9ng.结论:本方法分离效率高、简便,可有效控制注射用头孢西丁钠中聚合物的含量.
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高效分子排阻色谱法测定头孢氨苄原料药中聚合物的含量
目的:建立测定头孢氨苄原料药中聚合物含量的方法.方法:采用高效分子排阻色谱法.色谱柱为TSK-GEL G2000SWXL,流动相为0.005 mol/L磷酸盐缓冲液[0.005 mol/L NaH2PO4溶液-0.005 mol/L Na2HPO4溶液(39∶61,Ⅴ/Ⅴ]-乙腈(95∶5,Ⅴ/Ⅴ),流速为0.6 ml/min,检测波长为220nm,进样量为20 ul.结果:头孢氨苄检测质量浓度线性范围为0.56～28.0 μg/ml (r=0.999 9),分析时间约为20 min,重复性较好(RSD=2.4％,n=6),以头孢氨苄计检出限为1.0 ng、定量限为3.0 ng.结论:本方法分离效能高、检验周期短、准确可靠.
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高效分子排阻色谱法测定丙二醇头孢曲嗪原料药中聚合物的含量
目的：建立测定丙二醇头孢曲嗪原料药中聚合物含量的方法。方法：采用高效分子排阻色谱法。色谱柱为Sephadex G-10，流动相A为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液[0.01 mol/L磷酸氢二钠溶液-0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液（61∶39，V/V）]（pH7.0），流动相B为水，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm，柱温为30℃，进样量为200μl。结果：丙二醇头孢曲嗪原料药中聚合物的检测质量浓度线性范围为2.07～103.30μg/ml（r＝0.9994）；定量限为10.4 ng、检测限为4.1 ng；精密度、重复性试验的RSD＜3％。结论：该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于丙二醇头孢曲嗪原料药中聚合物的含量测定。
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HPSEC法测定注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠（6∶1）中高分子聚合物的含量
目的：建立测定注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠（6∶1）中高分子聚合物含量的方法。方法：采用高效分子排阻色谱法。色谱柱为TSK-GEL G2000SWXL凝胶色谱柱，流动相为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0），流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm，进样量为10μl，柱温为25℃。结果：聚合物峰与主峰的分离度良好；头孢噻肟进样量在2.3～226.4 ng范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r＝0.9999）；精密度、重复性试验的RSD≤0.79％；耐用性试验结果表明，柱温、流速、波长、pH、流动相盐浓度等因素在一定范围内变化对高分子聚合物峰之间以及高分子聚合物峰与主峰之间的分离度影响不大。结论：该方法操作简单、专属性强、灵敏度高，可用于注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠（6∶1）中高分子聚合物的含量测定。
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高效分子排阻色谱法测定头孢唑肟钠中聚合物的含量
目的 建立高效分子排阻色谱法(HPSEC)测定头孢唑肟钠中的聚合物等杂质.方法 采用球状蛋白亲水改性硅胶柱(Zenix SEC-150,7.8mm×300mm,3μm);流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.075mol/L磷酸氢二钠溶液-0.075mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)]-乙腈(90:10);流速为1.0mL/min;检测波长为254nm;进样量为10μL.结果 头孢唑肟的线性范围为¨5～57.40μg/mL(r=0.9999);定量限为3.2ng、检出限为1.2ng;聚合物等杂质测定的线性范围为0.0500～4.998mg/mL(r=0.9995);对照品溶液重复进样的精密度(RSD)为0.31％(n=6),样品测定的重复性(RSD)为0.67％(n=6).结论 该方法适于测定头孢唑肟钠中聚合物等杂质,灵敏度高,重复性好,操作简便.
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高效分子排阻色谱法测定头孢呋辛酯片中的高分子量杂质
目的 建立头孢呋辛酯片高分子量杂质的检查方法.方法 采用TSK-GEL G2000HHR色谱柱(7.8mm×300mm,5μm),流动相为含30mmol/L溴化锂的MN-二甲基甲酰胺溶液,流速0.33mL/min,检测波长278nm.结果 对该分析方法的专属性、精密度、线性与范围、灵敏度、重复性等进行考查,各项指标均良好;3批头孢呋辛酯片样品高分子量杂质的含量分别为0.45％、0.41％和0.45％.结论该法简便、准确、专属性高,可用于头孢呋辛酯片中高分子量杂质的检查.
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高效分子排阻色谱法测定比阿培南中聚合物杂质
目的 建立高效分子排阻色谱法(HPSEC)对比阿培南中的聚合物杂质进行分离分析,并采用液一质(LC-MS)联用的方法确定其分子量,进行初步研究.方法 采用Protein-ParkTM60(7.8mm×300mm,10μm)色谱柱,流动相为5mmol/L的乙酸铵溶液,流速为0.5mL/min,检测波长为220nm,进样量为20μL.用LC-MS法测定聚合物杂质分子量.结果 采用HPSEC法,比阿培南聚合物杂质与比阿培南能完全分离,聚合物杂质在含比阿培南0.06～0.16mg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9991),重复性较好(RSD=1.6％,n=6).采用LC-MS法推断聚合物杂质主要是比阿培南的二聚物和三聚物.结论 HPSEC法简便、灵敏、重复性好,适用于比阿培南中聚合物杂质的测定.
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降纤酶注射剂的检测分析
目的:建立降纤酶注射剂的色谱分析方法,为提高该品种的国家标准提供实验依据.方法:采用纤维蛋白原凝同法、反相高效液相色谱法和高效分子排阻色谱法对国内12个生产企业的注射用降纤酶进行检测分析.结果:各企业样品的反相高效液相色谱图差别较大,高效分子排阻色谱法未检出聚合物,酶活力与反相高效液相色谱网中的主峰面积有相关性,与高效分子排阻色谱图中的主峰呈一定趋势分布.结论:反相高效液相色谱法和高效分子排阻色谱法可以用于降纤酶注射剂的检测分析,色谱图中的主峰而积与其酶活力存在一定的相关性.
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高效分子排阻色谱法分析头孢噻肟钠中的聚合物
目的:建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定头孢噻肟聚合物,与2005年版中国药典方法比较,并用LC-MS对二聚物进行初步研究.方法:采用凝胶色谱柱(TSK G2000 SW,60 cm×7.5 mm);流动相:0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液[(0.01 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.01 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61:39),用0.1 mol·L-1磷酸调节pH至7.0];流速1.0 mL·min-1;检测波长254 nm.结果:HPSEC法,头孢噻肟和二聚物的线性范围分别为2.57×10-4 ～0.0205 mg·mL-1(r=1.000)和7.39×10-4～0.0987 mg·mL-1(r=0.9997);二聚物的平均回收率为99.7%(n=9),检测限为5 ng;对照品溶液重复进样的精密度(RSD)为0.20%(n=6),样品测定的重复性(RSD)为0.94%(n=6).药典方法,二聚物的检测限为2 μg,对照品溶液重复进样的精密度(RSD)为0.92%(n=6),样品测定的重复性(RSD)为5.7%(n=6).结论:HPSEC法适于测定头孢噻肟聚合物,比药典方法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便.
