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盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用
目的 研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用.方法 传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol· L-1孵育4h,制备OGD模型.FH 5和10μmol·L-1在OGD前2h加入.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(EdU)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果 与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)％,下降了4倍(P＜0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7) U· L-1(P＜0.01).加入FH 5和10 μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)％和(43±5)％,LDH释放分别下降至290±18和(268±20) U· L-1(P＜0.01),细胞EdU阳性率由OGD模型组的(47±6)％,分别下降到(35±6)％和(29±5)％(P＜0.01).Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P＜0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10 μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5 μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义.结论 FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关.
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右美托咪定通过调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤保护作用的机制研究
目的 探讨右美托咪定调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养PC12神经细胞,复制氧糖剥夺细胞模型,以低(0.1μmol/L)、中(1.0μmol/L)和高剂量(10.0μmol/L)右美托咪定作用24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达,RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量.在复制氧糖剥夺细胞模型中,以TLR4抑制剂TAK-242抑制TLR4表达后,给予右美托咪定作用,观察细胞存活率、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、TLR4蛋白、TNF-α 含量和IL-6含量的变化.结果低、中和高剂量右美托咪定作用后,PC12细胞存活率升高,Bax和TLR4蛋白表达、TLR4 mRNA表达以及TNF-α 和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),且表现出浓度依赖性.TAK-242处理后,TLR4表达降低,PC12细胞存活率升高,Bax蛋白表达以及TNF-α 和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);给予右美托咪定作用后,TAK-242的上述作用明显增强(P<0.05).结论 右美托咪定可通过抑制 TLR4 表达保护神经细胞氧糖剥夺损伤.
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七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用
目的 观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用.方法 将符合标准的40片海马脑片随机均分为四组:2％七氟醚后处理组(2％Sev组)、4％七氟醚后处理组(4％Sev组)、6％七氟醚后处理组(6％Sev组)和氧糖剥夺损伤对照组(OGD组).采用脑片灌注及电生理技术细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS).利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度.结果 OGD组OPS恢复程度为(3.14±2.56)％,恢复率为10％,组织损伤率为0.63±0.05;2％Sev组OPS恢复程度为(46.24±29.34)％,OPS恢复率为40％,组织损伤率为0.51±0.06;4％Sev组OPS恢复程度为(62.40±34.93)％,OPS恢复率为60％,组织损伤率为0.41±0.07;6％Sev组OPS恢复程度为(75.92±45.31)％,OPS恢复率为70％,组织损伤率为0.37±0.06.与OGD组比较,2％Sev组、4％Sev组、6％Sev组的OPS恢复程度和OPS恢复率均明显升高,组织损伤率明显降低(P＜0.01).结论 七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤具有一定的保护作用.
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二苯乙烯苷对大鼠原代皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用
目的：探讨二苯乙烯苷对大鼠皮层神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)损伤的作用。方法：取孕18 d的Sprague-Dawley胎鼠皮层神经元培养7～8 d，进行OGD损伤，同时分别加入二苯乙烯苷(10、20、40μg/mL)和尼莫地平(2.5μg/mL)进行处理。设置空白对照组、OGD组、OGD并加药组(二苯乙烯苷10、20、40μg/mL)以及OGD并尼莫地平阳性对照组。损伤6 h后，用噻唑蓝[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]法检测细胞活力，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)法检测LDH释放量，末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling，TUNEL)法检测细胞的凋亡，免疫蛋白印迹(Western Blot)法检测Toll 样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)及其抑制因子IκB和磷酸化的IκB(p-IκB)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、p38及磷酸化的p38(p-p38)的蛋白表达。结果：OGD损伤后大鼠皮层神经元细胞活力显著降低，LDH释放量明显增多，细胞凋亡显著增多；二苯乙烯苷和尼莫地平均可显著抑制这一趋势。 OGD损伤引起TLR4、NF-κB、p-IκB/IκB、p-p38/p38和IL-6的异常高表达，二苯乙烯苷明显抑制这些蛋白表达。结论：二苯乙烯苷对OGD诱导的原代皮层神经元损伤的保护作用可能是通过抑制TLR4-NF-κB炎症信号通路和p38通路发挥抗炎抗凋亡效应的。
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Poly I:C对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞TLR3信号通路的影响
目的 观察聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)对氧糖剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)星形胶质细胞TLR3信号转导通路的影响,探讨Poly I:C保护神经细胞的作用机制.方法 通过缺血缺糖培养12 h建立星形胶质细胞氧糖剥夺损伤模型,观察10μg/mL和20 μg/mL Poly I:C预孵育对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、磷酸化干扰素调节因子3(phospho-interferon regulatory factor 3,pIRF3)、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor-κB,pNF-κB)蛋白表达的影响.结果 ①与空白对照组相比,星形胶质细胞氧糖剥夺12h后细胞TLR3、pNF-κB蛋白表达升高,而pIRF3蛋白表达无明显变化.②与OGD组相比,Poly I:C预处理组能促进细胞中pIRF3表达,而对细胞TLR3表达无明显影响,pNF-κB表达有下降趋势,但差异无统计学意义.结论 Poly I:C保护神经细胞作用可能与提高氧糖剥夺损伤星形胶质细胞pIRF3蛋白的表达,进而增加下游抗炎因子干扰素-β(IFN-β)的表达有关.
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Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用
目的 探讨Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用及机制. 方法 新生SD乳鼠海马神经元经体外原代培养7d后分为对照组、氧糖剥夺/复氧组、Caspase抑制剂苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-门冬氨酰氟甲基酮(Z-VAD-FMK)组和二甲基亚砜(DMSO)组,其中氧糖剥夺/复氧组氧糖剥夺6h后复糖复氧,Z-VAD-FMK组在氧糖剥夺复氧过程中加入20 μmol/L Z-VAD-FMK,DMSO组在氧糖剥夺复氧过程中加入1‰药物溶媒DMSO.复氧复糖24 h后光镜及电镜下观察各组海马神经元的形态学变化,MTT比色法测定细胞存活率和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测神经元凋亡率,比色法测定神经元Caspase-3活性,Western blotting法分析Caspase-3活性蛋白表达. 结果 氧糖剥夺/复氧组细胞胞体肿胀,部分胞膜破裂,细胞完整性破坏,细胞核水肿,线粒体肿胀,嵴排列混乱;Z-VAD-FMK组细胞损伤较氧糖剥夺/复氧组减轻,大多数神经元形态完整,细胞内颗粒增多,细胞器肿胀减轻,线粒体嵴结构存在,分布较规则.与氧糖剥夺/复氧组比较,Z-VAD-FMK组海马神经元吸光度值(0.204±0.019 vs 0.303±0.018)及细胞存活率(0.481％±0.045％vs 0.704％±0.040％)明显增高,LDH含量[(406.500±21.286) U/L vs(326.000±20.278) U/L]明显降低,细胞凋亡率(49.700％±3.100％vs 29.820％±2.839％)明显降低,反应Caspase-3活性片段的吸光度值明显降低,Caspase-3活性蛋白表达(1.070±0.077 vs 0.785±0.058)明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 Caspase抑制剂可通过抑制Caspase-3蛋白活性,减轻海马神经元的体外氧糖剥夺损伤.
关键词： Caspase抑制剂 海马神经元 氧糖剥夺损伤 -
不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用
目的:观察不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,探讨组方的佳配比.方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立PC12细胞氧糖剥夺损伤(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,将细胞分为空白组、模型组、阳性组(尼莫地平)、辛芍药物不同配比组(灯盏细辛与赤芍质量比分别为5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5),检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(N0)含量.结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率和SOD活性显著降低(P＜0.01),细胞LDH释放量、MDA和NO水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,辛芍2∶3配比组显著提升细胞存活率(P＜0.05),同时辛芍3∶2和2∶3配比组均显著降低细胞LDH释放量以及MDA和NO水平(P＜0.05),提高SOD活性(P＜0.05).结论:辛芍2∶3配比对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用较好.
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体外氧糖剥夺损伤诱导信号转导和转录激活因子-3信号通路在海马神经元中的动态变化
目的 观察体外培养的大鼠海马神经元经氧糖剥夺损伤后信号转导和转录激活因子-3(signal transducer and activator of transcription factor-3,STAT3)磷酸化及其核转移,探讨体外模拟的脑缺氧、缺血损伤细胞模型中STAT3信号通路的动态变化. 方法 选择新生24h内SD大鼠,取双侧海马神经元,用DMEM/F12培养基培养9d,氧糖剥夺处理4h,建立海马神经元氧糖剥夺损伤模型.运用免疫荧光技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达部位.采用Western bloting技术检测海马神经元氧糖剥夺后不同时相点p-STAT3表达强度的变化. 结果 对照组p-STAT3在胞核表达不明显；而模型组在建模后1 h p-STAT3在胞核内即有表达,3h达到高峰,各时相点与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 氧糖剥夺损伤诱导海马神经元胞核中p-STAT3水平明显升高,提示海马神经元氧糖剥夺损伤后STAT3信号转导通路被过度激活.
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槲皮素对氧糖剥夺损伤的C6胶质细胞凋亡与自噬调节作用
目的 探究槲皮素对氧糖剥夺损伤的C6胶质细胞凋亡与自噬调节作用.方法 用氧糖剥夺/复氧(OGD/R)方法建立C6胶质细胞损伤模型,采用随机数字法分为对照组、氧糖剥夺/复氧模型组、槲皮素注射组、自噬抑制剂(3-MA)组,然后使用AnnexinVFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测LC3II蛋白表达.结果 模型组的LC3II蛋白表达和细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),而槲皮素注射组和3-MA组的C6胶质细胞凋亡率和LC3II蛋白表达则明显低于模型组(P<0.05),但仍然高于对照组(P<0.05).结论 槲皮素能够降低C6胶质细胞凋亡率,进一步激活细胞自噬而发挥保护作用.
