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非选择性内皮素受体拮抗剂CPU0213改善感染性休克小鼠/大鼠的血管活性
目的:通过非选择性内皮素受体拮抗剂CPU20213对结扎小鼠和大鼠盲肠并穿孔致感染性休克血管活性的改善,探讨其通过干预内皮素-活性氧(ET-ROS)轴心治疗感染性休克可能的作用机制.方法:结扎小鼠盲肠并穿孔,8 h后按30 mg·kg-1皮下注射(sc)CPU0213,bid×3 d.观察术后该时间段的存活率,计算腹腔渗出液重量,生命器官脏器系数,心肌、肾匀浆和血清丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量及胸主动脉血管活性;同样方法结扎大鼠盲肠,检测血浆ET-1浓度和肠系膜血管ETA和ETB受体mRNA表达.结果:模型组小鼠存活率明显降低,生命器官脏器系数明显增加,腹腔渗出液显著增多,GSH-PX活性下降,MDA含量增加,血管收缩和舒张功能及NO生物利用度明显降低;大鼠血浆ET-1浓度显著升高,肠系膜血管ETA和ETB受体mRNA表达上调;CPU20213治疗后,均有不同程度改善.结论:CPU0213通过阻断ET-ROS轴心,改善血管活性,减少腹腔渗出液,提高存活率.
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内皮素受体拮抗剂抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌细胞搏动加速及凋亡
观察内皮素受体拮抗剂CPU0213能否阻断异丙肾上腺素 (isoprenaline , ISO) 所致大鼠心肌细胞搏动加速及凋亡.分离大鼠心肌细胞.给ISO(10-7M)的同时给CPU 0213(10-7、10-6、10-5M),并以普萘洛尔(10-6M)作为阳性药对照,观察各组心肌细胞的搏动次数.采用吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色法检测成年大鼠心肌细胞凋亡率的变化.普萘洛尔明显抑制ISO效应(P＜0.001).内皮素受体拮抗剂CPU 0213明显抑制ISO所致的心肌细胞搏动和细胞凋亡,且呈浓度依赖性.大剂量CPU0213对ISO生物效应的阻断作用(P＜0.001)与普萘洛尔相仿.内皮素受体拮抗剂CPU 0213阻断ISO所致的心肌细胞搏动加速和增加细胞凋亡率等生物学效应,提示内皮素介导β-受体效应.
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(7S,13R)-CPU86017及CPU0213对异丙肾上腺素损害血管活性的改善作用
目的:探讨具有钙拮抗及抗氧化作用的(7S,13R)-CPU86017及内皮素受体拮抗剂CPU0213对异丙肾上腺素诱导的血管功能损伤的改善作用.方法:将36只实验大鼠分为正常组、模型组、(7S,13R)-CPU86017和CPU0213治疗组,采用MedLab生物信号采集系统观察各组在去氧肾上腺素(1×10-6 mol/L)预收缩血管后,乙酰胆碱梯度舒张大鼠离体主动脉环效应的变化;在L-硝基精氨酸或无L-硝基精氨酸孵育条件下,对去氧肾上腺素梯度加药引起的血管收缩效应;在含钙或无钙K-H液条件下,对去氧肾上腺素(1×10-6 mol/L)引起的血管收缩变化及对KCl(100 mmol/L)引起的血管平滑肌收缩反应.结果:模型组对去氧肾上腺素、高钾的收缩反应增强,而对乙酰胆碱内皮依赖性舒张反应降低,NO的生物利用度明显降低.经(7S,13R)-CPU86017和CPU0213治疗后,血管功能得到显著改善.结论:异丙肾上腺素因损害血管内皮细胞功能而致血管活性异常.(7S,13R)-CPU86017及CPU0213可明显对抗此异常,改善血管功能.提示异丙肾上腺素引起β受体过度激活效应,可能由内皮素-1、氧自由基生成过多及钙通道的过度激活所介导.
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两种肺动脉高压模型大鼠肺动脉和尾动脉血管活性变化及药物体外干预
目的:考察缺氧及皮下注射野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠肺动脉和尾动脉血管活性变化及药物CPU0213和CPU86017的体外急性给药疗效.方法:建立缺氧及皮下注射野百合碱所致大鼠肺动脉高压模型.造模5周后,大鼠乌拉坦麻醉,经右颈静脉插管,进行血流动力学实验,记录中心静脉压、右心室收缩压等血流动力学指标.随后,处死大鼠,分离肺内动脉和尾部腹侧动脉,进行离体血管环实验,观察分别由乙酰胆碱和苯肾上腺素所致大鼠肺动脉和尾动脉血管舒缩活性的变化以及经CPU0213和CPU86017温孵对病损血管的离体治疗作用.结果:慢性缺氧可致大鼠肺动脉及尾动脉血管收缩增强,而野百合碱致血管收缩削弱.慢性缺氧和注射野百合碱均可致大鼠肺动脉和尾动脉血管舒张削弱.CPU0213和CPU86017温孵能不同程度地改善两种模型大鼠的血管收缩和内皮依赖性舒张功能,CPU0213能部分恢复而CPU86017却进一步削弱两种模型大鼠中KATP介导的血管舒张活性.结论:慢性缺氧和注射野百合碱均损伤血管活性,同时造成尾动脉KATP功能障碍,且慢性缺氧对肺动脉损伤的选择性高于野百合碱.CPU0213体外急性给药对血管活性有较好的改善作用,而CPU86017可部分改善血管活性,但对KATP有阻断作用.
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高糖致血管功能损伤与血管内皮素和瘦素受体表达以及内皮素受体拮抗剂CPU0213 的干预作用
目的:探究高糖引起的血管舒缩功能损害、血管内皮素受体(ETAR)和及瘦素受体(OB-Rb)mRNA表达水平的改变以及内皮素受体拮抗剂CPU0213的干预作用.方法:将大鼠颈椎脱位处死,分离取出其胸主动脉,剪成血管环,分别随机放入正常K-H液(正常对照组)、含33 mol·L-1葡萄糖的K-H液(高糖模型组)以及含33 mol·L-1葡萄糖和10-5 mol·L-1 CPU0213的K-H液(CPU0213治疗组)中,温孵4小时.在各组温孵液中分别累积加入乙酰胆碱和去氧肾上腺素,测定各组血管环的大舒张率和大收缩值;在各组温孵液中分别加入L-硝基精氨酸,并重复去氧肾上腺素的收缩试验,测定各组血管NO生物利用度;通过RT-PCR实验,测定各组血管中ETAR和OB-Rb的mRNA表达水平.结果:与正常对照组相比,高糖模型组血管环的大舒张率和NO生物利用度分别下降了44.7%(P<0.05)和27.2%(P＜0.05),大收缩值升高了32.9%(P＜0.05),且其ETAR和OB-Rb的mRNA表达水平分别上调了111%(P<0.05)和97%(P＜0.05);而与高糖模型组相比,CPU0213治疗组血管环的大舒张率和大收缩值以及NO生物利用度均有显著改善(P＜0.05),并趋于正常,且其ETAR和OB-Rb的mRNA表达水平分别下调了33.6%(P＜0.05)和13.4%(P>0.05).结论:在高糖状态下,血管功能受损可能与血管组织内ETAR和OB-Rb mRNA表达水平上调有关,而ETR拮抗剂CPU0213能下调此时高水平表达的ETAR mRNA,并改善受损血管功能,表明ET系统明显调控血管功能;然而,受损血管组织在经CPU0213干预后,虽然其受损功能得到明显改善,但其OB-Rb mRNA表达水平没有明显改变,表明OB-Rb的表达可能对血管功能没有直接调控作用,且与ETAR并无直接关联.
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CPU0213对内皮素-NADPH氧化酶介导H2O2损伤心肌细胞的改善作用
心肌细胞中NADPH氧化酶活性增强和内皮素系统过度激活,是造成心肌细胞损伤的重要机制.本文旨在探讨内皮素受体拮抗剂CPU0213能否通过抑制ET-NADPH氧化酶的过表达,减轻心肌细胞氧化损伤.将SD乳大鼠心肌细胞分成7组:对照组、H2O2组、PKA/PKC阻断剂H89/Bis干预组、,NADPH氧化酶阻断剂APO/DPI组和CPU0213治疗组.结果表明,H2 O2组钙调蛋白FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2表达明显下调,pPKCε/PKCε,NADPH氧化酶亚基及ETA R/ETBR明显上调,提示:H2O2激活NADPH氧化酶须依赖PKC活性,CPU0213通过抑制ET-pPKC-NADPH氧化酶通路逆转FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2的下调.
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内皮素受体拮抗剂CPU0213和钙拮抗剂CPU86017改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心衰的作用机制
为了验证内皮素受体拮抗剂CPU0213和钙拮抗剂CPU86017改善异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心衰的分子生物学机制,将SD大鼠均分为5组:正常组、ISO组、药物治疗组(3组).除正常组外,其余4组均皮下给予异丙肾上腺素(ISO,1 mg/kg,10 d),其中3个治疗组于第10,11天分别皮下注射:氨基胍(30 mg/kg)、CPU0213(30 mg/kg)和CPU86017(4 mg/kg).结果发现,ISO组,内皮素受体A(ETA)、iNOS、衰老蛋白p66Shc、ε型蛋白激酶C(PKCε)、瘦素受体(OBRb)、NADPH氧化酶p67phox、瘦素(leptin)mRNA或蛋白表达均上调,药物治疗后对这些异常均有逆转.CPU0213和CPU86017均通过抑制内皮素受体和氧化应激及下调p66Shc和PKCε等相关分子表达,减轻ISO引起的心衰.
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内皮素受体拮抗剂CPU0213对异丙肾上腺素心肌病SERCA2a表达的改善作用
目的:研究异丙肾上腺素心肌病模型心肌细胞肌浆网钙ATP酶(sarco-endoplasmic reticulum ATPase 2a,SERCA2a)表达的改变,以及新型内皮素受体拮抗剂CPU0213的治疗作用.方法:雄性SD大鼠皮下给予异丙肾上腺素 (2 mg·kg-1·d-1)10 d,治疗组动物在第6到第10天皮下给予CPU0213 (30 mg·kg-1·d-1).各组动物颈动脉插管记录心功能指标:左心室收缩压(LVSP), 左心室舒张末期压(LVEDP),和左心室压力变化大速率(±dp/dtmax).左心室心肌组织SERCA2a的mRNA及蛋白表达分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定.结果:异丙肾上腺素引起左心室收缩和舒张功能明显下降,同时SERCA2a的mRNA及蛋白表达均显著下调(P<0.05).CPU0213显著提高SERCA2a表达(P<0.05),明显改善心功能(P<0.05).结论:CPU0213可通过逆转肌浆网钙调控蛋白SERCA2a的表达下调,使异丙肾上腺素引起的心功能下降得以恢复.本实验证明SERCA2a是β受体过度激活引发心衰过程中的重要靶点.内皮素受体介导了β受体过度激活状态下SERCA2a的表达下调,是内皮素受体拮抗剂治疗心衰的重要依据之一.
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CPU0213通过抑制ET系统和NF-κB通路改善感染性休克大鼠血管活性
目的:通过观察CPU0213对感染性休克大鼠血管活性的改善,探讨其治疗感染性休克可能的作用机制.方法:感染性休克大鼠术后8 h皮下给予CPU0213(30 mg·kg-1,bid×3 d).记录存活率,血流动力学参数,器官脏器系数和腹腔渗出液重量,检测血浆ET-1和血清iNOS、GSH-PX、SOD、MDA含量及胸主动脉血管活性,肠系膜血管NF-κB、TNF-α、iNOS和ET系统mRNA表达及其激活态NF-κB蛋白表达.结果:模型组大鼠存活率和平均动脉压明显降低,心率和器官脏器系数明显增加,腹腔渗出液显著增多,ET-1和iNOS、MDA含量明显增加,GSH-PX和SOD活性显著下降,血管功能明显降低,TNF-α、iNOS和ET系统mRNA表达及NF-κB的蛋白表达明显增加;CPU0213治疗后,上述指标均有不同程度改善.结论:CPU0213通过阻断ET系统和NF-κB通路改善血管活性,减少腹腔渗出液,提高存活率.
