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Acrp30基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
目的:克隆人Acrp30基因,并在大肠杆菌中表达.方法:提取人脂肪组织总RNA,经RT-PCR扩增目的cDNA片段,进行核苷酸序列分析;将该基因克隆入原核表达载体pQE-30,在大肠杆菌M15中表达,用Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化重组蛋白;并用Western印迹检测所制备多克隆抗体的特异性.结果:从人脂肪组织总RNA中扩增得到736 bp的目的cDNA,其序列与已报道的序列完全一致,并在大肠杆菌中成功获得高水平表达,蛋白相对分子质量大约为30×103,其表达量占菌体总蛋白的15%左右.重组蛋白经Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化,纯度>90%.Western印迹试验证实所制备多克隆抗体具有较高特异性.结论:本研究为进一步探讨Acrp30在肥胖症和糖尿病患者中的表达情况以及Acrp30的作用机制奠定基础.
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Acrp30生物学功能及调控的研究进展
Acrp30是脂肪来源的血浆蛋白,其生理学功能包括调节糖、脂代谢,提高胰岛素敏感性,抗动脉粥样硬化等.新近的研究表明,Acrp30有抗炎保肝的效果,有可能成为一种新的肝病治疗药物.Acrp30表达调控是与代谢相关的多种因素综合作用的结果,其中肾脏在Acrp30生物降解和清除中起重要作用,但目前Acrp30在体内的作用机制还有待于进一步研究.
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脂肪细胞补体相关蛋白Acrp30研究进展
脂肪细胞补体相关蛋白Acrp30是一种分子量为30kDa、由244个氨基酸组成的脂肪细胞特异性分泌的激素,gAcrp30是其球形亚基.Acrp30已被发现具有调节肌肉及肝脏脂类和糖代谢的作用,能够增加胰岛素敏感性、抑制糖异生、促进脂肪酸氧化以降低血糖.在肥胖、2型糖尿病、冠心病、高血压等诸多疾病中,血清Acrp30水平显著下降,提示体内应用Acrp30可能具有针对这些疾病的治疗作用.
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应用酵母双杂交系统筛选Acrp30相互作用蛋白
目的 应用酵母双杂交系统筛选Acrp30相互作用蛋白质,探讨Acrp30的功能,为2型糖尿病的发病机制和疾病的蛋白质相互作用网络研究提供线索.方法 应用酵母双杂交技术,以pGBKT7-Acrp30为诱饵质粒筛选人胎肝cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析.选定其中一个克隆,分别就Acrp30的球状区gAcrp30和胶原区cAcrp30,构建诱饵质粒pGBKT7-gAcrp30和pGBKT7-cAcrp30,与选定的克隆再次进行酵母双杂交,从而确定是与Acrp30的哪个区段相互作用.结果 从人胎肝cDNA文库中筛选得到约20个阳性克隆,经测序和同源性分析得到7个不同的候选基因序列,其中一个是转甲状腺素(transthyretin, TTR),分析表明,与TTR相互作用的是Acrp30的胶原区.结论 应用酵母双杂交系统,共筛选得到7个不同的基因,其编码蛋白与Acrp30有相互作用,可能与糖代谢发病机制相关.并且Acrp30主要通过胶原区与其它蛋白相互作用发挥功能.
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Visfatin、Acrp30与非酒精性脂肪性肝病及肝纤维化指标的关系
目的 研究Visfatin、Acrp30水平与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及肝纤维化指标的关系.方法 采用酶联免疫吸附法检测NAFLD患者和正常对照组的Visfatin、Acrp30水平及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)水平. 结果 NAFLD组Acrp30显著低于对照组,Visfatin水平显著高于对照组(P<0.05),Visfatin水平与WHR、BMI、FBG、TG、FINS、HOMA-IRI、PCⅢ、PCⅣ、HA、LN呈显著正相关(P<0.05),Acrp30水平与WHR、BMI、FBG、TG、FINS、HOMA-IRI、PCⅢ、PCⅣ、HA、LN呈显著负相关(P<0.01或<0.05),Visfatin与Acrp30水平呈显著负相关(P<0.05).结论 NAFLD患者血清Visfatin水平增高,Acrp30水平降低;Visfatin与Acrp30在NAFLD患者肝纤维化进程中可能起重要作用.
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Acrp30/adiponectin研究进展
脂肪细胞特异性分泌的蛋白--Acrp30(adipocyte complement-related protein of 30 kD).其全长分子(或蛋白酶切片段)能降低餐后升高的血浆游离脂肪酸,增强胰岛素抑制肝细胞葡萄糖输出的作用.血浆Acrp30水平与机体胰岛素敏感性有很强的相关性,而且Acrp30具有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用.因此,Acrp30与Ⅱ型糖尿病及冠心病的发生发展有着密切关系.体内实验证明重组Acrp30能改善胰岛素抵抗.目前的关键问题是弄清其各种功能的作用机制.
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Acrp30与胰岛素抵抗
脂肪细胞补体相关30是仅在脂肪细胞合成并分泌的一种激素.一些动物和人体实验证实,Acrp30能够减少餐后游离脂肪酸升高和加强胰岛素抑制肝葡萄糖输出的作用,已经明确建立了Acrp30血浆水平与胰岛素抵抗的关系;其抗动脉粥样硬化的特性是防止和改善动脉粥样硬化病变的因素.
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肥胖性胰岛素抵抗的研究进展
肥胖是胰岛素抵抗和2型糖尿病的主要危险因素.脂肪细胞分泌的多种物质与胰岛素的敏感性可能相关.本文简单介绍了与肥胖性胰岛素抵抗相关的物质leptin、TNF、Acrp30、IL-6.在研究抗糖尿病新药TZDs作用机制时发现的脂肪组织特异性分泌蛋白-Resistin(胰岛素抗性蛋白),在肥胖症中,其含量升高,它具有调节血糖平衡、拮抗胰岛素的作用.Resistin可能是肥胖与糖尿病之间的连接点.Resistin的作用有待于进一步的研究.
