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NADH抗肝细胞氰化物损伤的实验研究
为分析NADH在保护正常肝细胞氰化物缺氧性损伤中的作用,在L02细胞组织培养基中加入3mmol/L KCN后立即加入0～600μg/ml的NADH,培养0.5、2、4h后检测细胞凋亡率和Bcl-2家族蛋白的表达.另取L02细胞分3组进行实验,实验组Ⅰ为对照组,实验组Ⅱ、Ⅲ加3mmol/L KCN后分别加入不含和含有NADH(400μg/ml)的RPMI 1640培养2h,检测3组Bcl-XL,Bax,Bcl-2蛋白表达,并取样进行透射电镜观察细胞形态.结果显示,NADH对氰化细胞凋亡率的抑制作用呈剂量依赖性,在浓度为400～600μg/ml时达平台,并且能够上调Bcl-2及Bcl-XL蛋白表达,下调Bax蛋白表达;电镜观察可见损伤后细胞呈凋亡和坏死改变.提示NADH具有明显抗肝细胞氰化物损伤作用,其作用机制可能与Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达的上调及和Bax蛋白表达的下调有关.
关键词： 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 氰化物 脱噬作用 -
辅酶NADH抑制人肝细胞株L02化疗凋亡损伤的作用
为研究辅酶NADH对顺铂(DDP)诱导的肝细胞凋亡的抑制作用及其分子机制,采用透射和扫描电镜检测肝细胞超微结构改变,碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测p53和bcl-2基因表达变化,并用紫外分光光度法测定凋亡分子caspase-3和caspase-8活性水平的改变.结果显示,与DDP组比较,NADH/DDP组典型凋亡超微形态改变不明显,细胞凋亡率明显下降,p53基因表达下降,bcl-2基因表达上升,caspase-3和caspase-8活性维持在低水平.提示NADH具有明显抑制DDP诱导肝细胞凋亡的作用.
关键词： 辅酶类 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 脱噬作用 顺铂 -
还原型辅酶Ⅰ(NADH)拮抗阿霉素心肌线粒体毒性的机制
为探讨还原型辅酶Ⅰ(NADH)对阿霉素(Dox)心肌线粒体毒性的拮抗作用及其机制,建立原代培养的乳鼠心肌细胞和SD大鼠心肌受阿霉素损伤的模型,采用MTT比色法、激光共聚焦显微镜、透射电镜和生物氧耗电极检测器检测线粒体形态和功能改变.结果显示,Dox组心肌细胞杀伤率增高,而NADH/Dox组心肌细胞杀伤作用明显下降,Dox诱发的心肌细胞线粒体结构损害表现为肿胀、裂解、嵴断裂直至溶解,加入NADH后线粒体结构明显得到保护,Dox组和NADH/Dox组MMP和ROS荧光强度有显著性差异,Dox可明显损害线粒体氧化磷酸化功能,Dox组与NADH/Dox组S3值、RCI值和ADP/O值比较,两者差异有显著性意义.提示NADH能够明显拮抗Dox所致的心肌线粒体毒性损伤作用,对线粒体结构和功能起保护作用.
关键词： 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 心肌细胞 线粒体 心脏 阿霉素 -
NADH在辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤中的防护作用
为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用,将L02肝细胞经5.0Gy照射后加入不同浓度(0～600μg/ml)的NADH,培养6、12、24h,观察细胞凋亡率并检测3组Fas,Bax,Bcl-2蛋白表达,透射电镜观察细胞凋亡形态.结果表明,辐射可以诱导细胞凋亡损伤,NADH抑制细胞辐射诱导的凋亡呈剂量依赖性,并可以上调Bcl-2蛋白和下调Fas、Bax蛋白表达.提示NADH对L02肝细胞有明显的抗辐射凋亡损伤作用,其作用机制可能与Fas、Bcl-2和Bax的调控有关.
关键词： 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 辐射防护 脱噬作用 L02肝细胞株 -
还原型辅酶Ⅰ(NADH)对PC12细胞鱼藤酮损伤的分子调控
为探讨NADH对PC12细胞线粒体鱼藤酮损伤的修复机制,采用细胞毒实验、免疫荧光和流式细胞仪检测细胞在鱼藤酮损伤前后细胞增殖基因(c-myc、c-erbB-2)、抗凋亡基因(bcl-2)、抑癌基因(p53)、细胞快反应基因 (c-fos)相关蛋白和细胞增殖核抗原(PCNA)的表达.结果表明,鱼藤酮能明显抑制PC12细胞增殖,下调c-erbB-2、c-myc、bcl-2和 p53基因的表达;NADH可以抑制鱼藤酮对PC12细胞线粒体的毒性作用,上调细胞bcl-2、c-myc、c-erbB-2基因和PCNA的表达.提示鱼藤酮可能通过调控线粒体磷酸化过程和下调细胞增殖基因(c-erbB-2、c-myc)、抗凋亡基因(bcl-2),上调快反应基因(c-fos)表达致使细胞损伤, NADH抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤可能与bcl-2、c-myc、c-erbB-2和p53表达调控有关.
关键词： 鱼藤酮 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 脱噬作用 -
辅酶NADH保护和修复细胞损伤的研究
探讨辅酶NADH增加能量代谢水平、修复细胞损伤、提高细胞应激反应的能力和降低化疗药物、放射线对正常组织的毒性损伤作用,探讨NADH细胞保护的分子调控机制,为今后临床多种疾病的细胞保护治疗提供新的防治途径.
关键词： 辅酶类 细胞保护 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 -
自发荧光成像在消化道疾病诊断中的应用
一、自发荧光成像(auto fluorescence imaging,AFI)原理在生物体内某些物质不需外源荧光染料即可受激发发出荧光的现象称自发荧光.在人体组织细胞内富含多种荧光基团,这些荧光基团如胶原蛋白、弹力蛋白、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)等主要聚集胃肠道黏膜下层.正常组织和病变组织所透过的自发光强弱不等,影响自发荧光强弱的主要原因与组织内生化成分及其比例有关.
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多级超滤及亲和超滤法分离纯化NADH工艺的研究
研究出一种经济、高效、简便且容易放大的提取、分离和纯化辅酶NADH的工艺条件并进行优化.使用化学渗透法处理啤酒酵母细胞Saccharomyces cerevisiae粗提NADH,多级超滤及亲和超滤法进一步分离和纯化NADH.选用酵母醇脱氢酶(YADH)作为亲和配体,在pH值8.0,离子强度为0.1 mol/L时,用YADH和细胞渗透液中的NADH亲和.使用MWCO=30 000的滤膜超滤.结果:NADH YADH复合物留在截留液中,从而与其它小分子物质分离.改变pH值和离子强度,NADH-YADH复合物解离,通过MWCO=1 000的滤膜超滤,NADH分离到滤过液中,YADH作为截留而回收,回收率达93%,活性损失15%.试验表明使用化学渗透法处理酵母细胞,用亲和超滤纯化可获得高的NADH产率.和以前的方法相比具有简单、经济、省时、高效等特点,且容易放大.
关键词： 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 膜分离技术 亲和超滤 -
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在细胞保护中的应用及其机制
探讨辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)在增加能量代谢水平、修复神经细胞损伤、改善帕金森综合征、疲劳综合征及提高细胞应激反应能力和降低化疗药物对正常组织的毒性损伤作用,阐明NADH对细胞保护的分子调控机制, 为今后临床多种疾病的细胞保护治疗,提供一条崭新的途径.
关键词： 辅酶 细胞保护 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 -
辅酶NADH对大鼠心肌缺血再灌注损伤生化标志物含量的影响
目的 观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其可能的保护机制.方法 选取健康雄性Wistar大鼠制备心肌缺血再灌注模型,雄性Wistar大鼠80只,随机分为4组,每组20只,分别为:缺血再灌注(MIR)模型组,NADH低剂量组(5mg/kg),NADH中剂量组(10mg/kg),NADH高剂量组(15mg/kg).缺血再灌注(MIR)组:左前降支结扎前30min,5%葡萄糖腹腔注射;NADH低、中、高剂量组于结扎前30min,分别给予NADH 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg腹腔注射.以上各组造模成功者分别随机分为:缺血30min和再灌注60min两组.观察大鼠血液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶(MB isoenzyme of creatine kinase,CK-MB)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、羟自由基、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)含量的变化.结果 与缺血再灌注(MIR)组比较,各处理组再灌后MDA、羟自由基、LDH、CK-MB释放水平明显降低,而T-SOD的水平升高,有统计学意义.结论 NADH能够减少缺血再灌注引发的心肌细胞的一系列损伤,对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,且达到治疗量(5mg/kg)后这种保护作用不具有剂量依赖性.
关键词： 再灌注损伤 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 羟自由基 心肌型肌酸激酶同工酶 -
辅酶NADH对缺血再灌注损伤大鼠心肌保护作用的观察
目的 研究还原性辅酶(NADH)对缺血再灌注心肌的保护作用.方法 雄性Wistar大鼠36只,制备大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为心肌缺血再灌注(MIR)组、空白对照组、NADH处理组,各12只,MIR组和NADH组分别在缺血30 min(T1)、再灌注60 min(T2)后取心肌组织,检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)活力变化(对照组在穿线30 min、90 min后检测);并于12时立即取左心室结扎线以下游离心室壁心肌,采用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;光镜及电镜下观察心肌超微结构的变化.结果 与同时相MIR组比较,NADH组再灌注60 min后心肌组织中的MDA含量、MPO活力明显减少(P<0.05);NADH组再灌注60 min后心肌组织中的T-SOD含量明显升高(P<0.05).电镜显示再灌注60min后MIR组线粒体膜破裂,嵴严重断裂,糖原消失;NADH组线粒体膜完整,部分嵴模糊,糖原减少.NADH组心肌细胞凋亡指数为6.28±0.72明显低于MIR组的10.91±0.92(P<0.05).结论 NADH能够明显降低缺血再灌注后脂质过氧化水平,抑制羟自由基产生,抑制心肌细胞凋亡,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用.
关键词： 再灌注损伤 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 细胞凋亡 超微结构
