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续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响
目的:探讨续断皂苷Ⅵ(ASA Ⅵ)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用.方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-qPCR方法评价ASA Ⅵ对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA Ⅵ对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响.结果:适宜浓度下的ASA Ⅵ能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达.ASA Ⅵ能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构.结论:ASA Ⅵ促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA Ⅵ诱导的成骨分化过程.
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HPLC测定妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ的含量
目的:建立高效液相法测定妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ含量的方法.方法:采用Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈0.05%磷酸(28:72);检测波长:212 nm;流速:1.0 ml/min.结果:川续断皂苷Ⅵ在0.001 2～0.011 0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 2).平均回收率为99.58%(RSD=0.94%).结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ的质量控制.
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高速逆流色谱法分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的研究
目的 以川续断的干燥根为原料,建立高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的方法.方法 川续断醇提物先经过AB-8大孔树脂富集目标物质.然后,以乙酸乙酯-正丁醇-水(3∶1∶4,v/v)为溶剂体系,轻相为固定相,重相为流动相,主机转速800 r/min,流速3.0 ml/min,ELSD检测,利用半制备型HSCCC分离纯化续断皂苷Ⅵ.结果 经过大孔吸附树脂富集-高速逆流色谱法分离后,从200 mg川续断提取物中一次性得到续断皂苷Ⅵ75 mg,经HPLC检测其纯度为98.5％.结论 本方法快捷简便,重复性好,为大批量制备生产川续断中续断皂苷Ⅵ提供了参考.
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HPLC法测定十一方药酒中6种成分
目的 建立HPLC法测定十一方药酒(三七、续断、红花等)中6种成分的含有量.方法 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、川续断皂苷Ⅵ含有量的测定采用Inertsil(R) ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm);以乙腈-0.1％磷酸为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长203 nm.马钱子碱、士的宁含有量的测定采用Geminni(R)C18110(A)色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);以乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾的混合溶液为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长为260 nm.结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r ＞0.999 0),平均加样回收率98.52％～99.96％,RSD 2.0％ ～2.3％.结论 该方法简便准确,重复性好,可用于十一方药酒的质量控制.
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HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究
目的:比较两种检测方法优劣,为丰富续断药材质量控制方法提供参考.方法:采用HPLC-UV及ELSD串联检测技术同时检测续断皂苷Ⅵ.结果:紫外检测器基线易漂移且有溶剂峰,蒸发光散射检测器基线平稳,但出峰不多;对两种检测器均有响应的续断皂苷Ⅵ,其出峰时间基本一致,蒸发光散射检测器下所得色谱峰明显高于紫外检测器;紫外检测方式的重复性、线性关系及加样回收率略优于蒸发光散射检测,两者均符合含量测定要求,且两种检测方式测定的样品结果相当.结论:紫外检测器灵敏度及稳定性较好;蒸发光散射检测器适用范围更广,能消除流动相配比变化对基线产生的影响,可以很好的支持梯度洗脱;HPLC-UV,HPLC-ELSD及HPLC-UV/ELSD串联均可作为续断药材含量测定方法.
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续断皂苷Ⅵ诱导的脂肪间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架治疗大鼠桡骨骨缺损
目的:探讨续断皂苷Ⅵ诱导的大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)联合纳米羟基磷灰石/壳聚糖(n-HA/CS)人工骨材料修复大鼠桡骨骨缺损的效果.方法:应用细胞表面抗原鉴定ADMSCs.取传至第3代的ADMSCs,培养基中加入续断皂苷Ⅵ诱导15d.诱导后的ADMSCs和n-HA/CS复合培养获得的植骨材料修复大鼠桡骨骨缺损模型,于术后第4、12周骨缺损区行X光拍片并按照改良Gray标准进行结果分析.H-E染色,并按改良Nilsson的组织学评分标准进行成骨效应评估.结果:ADMSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,高表达CD44.续断皂苷Ⅵ诱导后的细胞呈三角形、矮方形及多边形.茜素红染色可见散在的红色阳性结节,骨钙素表达阳性,阳性细胞率85.46％±5.22％.骨缺损修复术后4周移植材料已部分被吸收.术后12周实验组部分新生骨皮质恢复连续,开始出现骨髓腔.改良Gray评分显示,在各时间点实验组均高于各对照组,差异有统计学意义.第4周行H-E染色可见植入支架部分被吸收,实验组支架间隙和周围均充满细胞.第12周实验组出现类似骨单位样结构,骨基质中为淡粉色.改良Nilsson评分显示实验组在术后的4周和12周均高于各个对照组,有统计学意义.结论:续断皂苷Ⅵ能够诱导大鼠ADMSCs分化为成骨细胞,复合n-HA/CS支架能很好修复骨缺损.
关键词： 续断皂苷Ⅵ 脂肪间充质干细胞 纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架 骨缺损 -
虫创愈胶囊的质量标准研究
目的：建立虫创愈胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法对制剂中红参、续断、骨碎补进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对续断中川续断皂苷Ⅵ进行含量测定；色谱条件：C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流动相：乙腈-水(30∶70)。检测波长：212 nm。结果：在薄层色谱中可检出红参、续断、骨碎补的特征斑点，阴性对照无干扰；川续断皂苷Ⅵ在4.16～41.6 mg(r=0.9999)的范围内呈良好的线性关系，平均回收率为97.4%。结论：建立的虫创愈胶囊中主要活性成分的定性定量方法准确、专属性及重现性好，且快速简便，可作为该制剂质量的控制方法。
