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表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478通过叉头转录因子O3a对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1表达的影响
目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1 (FOXM1)、叉头转录因子O3a(FOXO3a)的表达调控,以及RNA干扰技术下调FOXM1、FOXO3a的表达后对肺癌细胞增殖及其对AG1478药物敏感性的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肺腺癌细胞株A549中FOXM1和FOXO3a mRNA和蛋白的表达情况；瞬时转染FOXM1和FOXO3a小干扰RNA (siRNA)后,RT-PCR和Western blot法检测转染效率和相关蛋白的表达；采用CCK-8法、集落形成实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、集落形成能力及细胞周期分布的改变.结果 AG1478呈时间依赖性抑制FOXM1 mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).转染FOXM1 siRNA后,FOXM1 mRNA和蛋白及其细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、c-Myc、Bcl-2蛋白的表达明显下降,p21和剪切后多腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)蛋白的表达则明显上调(均P ＜0.05).空白组、阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落数分别为(135.3±7.0)个、(125.3±7.5)个和(37.3±8.6)个,阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落形成抑制率分别为(7.40±0.94)％和(72.40±6.09)％(P＜0.05).FOXM1 siRNA转染组的G2/M期细胞比例为(55.60±4.83)％,明显高于空白组[(24.30±1.95)％]和阴性对照组[(21.30±2.06)％,P＜0.05].转染FOXM1 siRNA后,可明显增加A549细胞对AG1478的药物敏感性(P＜0.05).AG1478可诱导活化的FOXO3a分子表达并促进其核定位；转染FOXO3a siRNA后,FOXM1蛋白水平明显上调,并通过活化的AKT削弱AG1478对FOXM1表达的抑制.结论 AG1478通过诱导活化的FOXO3a表达及胞核重定位,下调FOXM1的表达,进而抑制肺癌细胞增殖,增加肺癌细胞对AG1478的敏感性.
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EGFR/AKT信号转导通路在调控结肠癌LoVo细胞生物学行为中的作用研究
目的:探讨EGFR/AKT(表皮生长因子受体/蛋白激酶B)信号转导通路在调控人结肠癌细胞株LoVo生物学行为中的作用机制.方法:用EGFR抑制剂AG1478处理人结肠癌细胞LoVo;用免疫细胞化学法检测p-EGFR及p-AKT蛋白表达;用MTT法检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力;用Transwell小室结合Matrigel胶检测肿瘤细胞侵袭能力.结果:AG1478(20μmol/L)处理后p-EGFR及p-AKT的表达水平明显降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05),结论:EGFR与人结肠癌细胞LoVo的增殖、凋亡、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过AKT信号转导通路调控人结肠癌的发展.
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表皮生长因子受体抑制剂AG1478影响HuH7细胞黏附、迁移和侵袭的研究
目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂AG1478对人肝细胞癌细胞HuH7黏附、迁移及侵袭的影响及其相关细胞内信号转导通路,探讨EGFR在肿瘤转移中的作用.方法:用AG1478处理人肝细胞癌细胞HuH7;用MTT法检测细胞的黏附能力变化;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力变化:Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化;用Western blot法检测Erk2及Paxillin蛋白表达.结果:AG1478(20 μmol/L)处理后,细胞的黏附、迁移和侵袭能力分别下降了52%、49%和70%(P＜0.01),Erk2及Paxillin的表达水平也明显降低(P＜0.01).结论:EGFR与人肝细胞癌细胞HuH7的黏附、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过Erk2及Paxillin信号转导通路调控人肝细胞癌的发展.
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EGFR抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞上皮-间质转化的影响
目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化的影响.方法:蛋白印迹法检测子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白Ecadherin、α-catenin,间质标记蛋白N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平.MTT法检测不同浓度AG1478对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用.蛋白印迹法检测AG1478对子宫内膜癌细胞E-cadherin、α-catenin,N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平的影响.体外迁移实验检测AG1478对子宫内膜癌细胞迁移能力的影响.结果:(1)EGFR过表达可下调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并上调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平(P＜0.05).(2) AG1478对两种子宫内膜癌细胞均有增殖抑制作用,以经转染稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞更为敏感(P＜0.05).(3)AG1478上调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并下调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平,以转染EGFR的Ishikawa细胞变化更为显著(P＜0.05) . (4) AG1478可减弱子宫内膜癌细胞的迁移能力,以过表达EGFR的Ishikawa细胞更为明显(P＜0.05).结论:EGFR抑制剂AG1478可有效地抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化.
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表皮生长因子受体抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后突触再生微环境的影响
目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478 对脊髓损伤后突触再生微环境的影响.方法:SD 大鼠60 只随机分为AG1478 组、对照组和假手术组.AG1478 组和对照组采用重物坠落打击法建立大鼠脊髓损伤模型,假手术组仅暴露硬脊膜,不损伤脊髓;AG1478 组在脊髓损伤局部给予AG1478 治疗,对照组和假手术均给予二甲基亚砜作对照治疗.于术后14 及28d,观察各组大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR )、硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP )、生长相关蛋白43(GAP-43)的表达;于术后1d 及1、2、4、6、8 周,观察各组大鼠神经功能恢复和体重变化的差异.结果:AG1478 组pEGFR 、CSPGs 和GFAP 的表达明显低于对照组(P＜0.01),而GAP-43 的表达明显高于对照组(P＜0.01).AG1478 组BBB 评分明显高于对照组(P＜0.01),且体重较对照组增加更明显(P＜0.05).结论:大鼠脊髓损伤后局部应用AG1478 治疗可明显改善损伤突触再生微环境,促进脊髓损伤神经功能的恢复.
关键词： 表皮生长因子受体抑制剂 AG1478 脊髓损伤 突触再生微环境 -
EGFR抑制剂AG1478对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响
目的：研究AG1478对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响，为宫颈癌治疗提供初步理论基础。方法：通过CCK8、Western blot、RT?qPCR、免疫荧光及TUNEL染色，检测AG1478对HeLa细胞增殖的影响；凋亡相关基因及蛋白表达的改变；磷酸化ERK亚细胞定位的分布及早期凋亡现象。结果：AG1478对HeLa细胞的增殖有抑制作用；对EGFR、ERK及AKT的磷酸化活性有抑制作用同时激活凋亡信号通路；磷酸化ERK细胞核转位被阻断同时出现早期凋亡现象。结论：AG1478可以通过抑制EGFR及下游PI3K/AKT及Ras/MAPK信号通路抑制HeLa细胞增殖并引起凋亡。
