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5-氟尿嘧啶对人纤维肉瘤HT-1080细胞体外增殖的抑制作用
目的 观察5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人纤维肉瘤HT-1080细胞体外增殖的抑制作用.方法 取处于对数生长期的人纤维肉瘤HT-1080细胞,分别加入不同浓度的阿霉素和5-Fu培养,于培养24、72和144h时,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定HT-1080细胞的吸光度(A)并计算细胞增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞周期.结果 10 μg/ml 5-Fu处理人纤维肉瘤HT-1080细胞24、72和144 h时,HT-1080细胞的增殖抑制率分别为45.9％、64.7％和90.6％;100 μg/ml 5-Fu处理人纤维肉瘤HT-1080细胞24、72和144 h时,HT-1080细胞的增殖抑制率分别为53.1％、86.4％和93.0％,5-Fu显示出与阿霉素相似的细胞毒作用.经不同浓度的阿霉素和高浓度5-Fu处理后,HT-1080细胞可表现出明显的凋亡特征.流式细胞仪检测结果显示,未处理的HT-1080细胞中,G1期细胞占67.5％,S期细胞占21.2％,G2期细胞占11.3％.随着5-Fu浓度的增加,G1+S期细胞的比例逐渐增加,当5-Fu的浓度≥1μg/ml时,未再探及G2期细胞.结论 5-Fu在体外对人纤维肉瘤HT-1080细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;5-Fu在高浓度连续给药后表现出与阿霉素类似的抑瘤效果,能将HT-1080细胞阻滞于G1+S期.
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乌苯美司抑制肿瘤细胞侵袭与诱导凋亡的研究
探讨乌苯美司对肿瘤细胞侵袭及凋亡的影响及其剂量关系,探讨其作用机制.采用免疫荧光法检测CD 13/APN在HT- 1080细胞中的表达;MTT法检测乌苯美司对HT-1080细胞增殖的影响;Annexin V-EGFP/PI双染法检测乌苯美司对HT- 1080细胞凋亡的影响；流式细胞术检测乌苯美司对HT- 1080细胞周期的影响;运用Ala-pNA为底物,检测乌苯美司对细胞表面氨肽酶活性的抑制作用;Transwell法检测乌苯美司对HT-1080细胞侵袭及运动能力的影响;明胶酶谱法检测乌苯美司对基质金属蛋白酶活性的影响;Western blotting法检测CD13的表达变化.研究结果显示,高浓度的乌苯美司可抑制HT-1080细胞的增殖(IC50:3.8 mg·mL-1),诱导HT-1080细胞的凋亡,将细胞周期阻滞于G1期；在低浓度时乌苯美司即可显著抑制HT- 1080细胞的氨肽酶活性(IC50:8.3 μg·mL-1),抑制细胞的侵袭能力,但对细胞的运动能力及增殖无影响；乌苯美司对CD13的表达及基质金属蛋白酶的活性无明显影响.以上研究结果表明,乌苯美司在低浓度时可通过直接抑制细胞表面的氨肽酶活性而抑制肿瘤细胞的侵袭;在高浓度时可通过非CD13依赖的途径抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡.
