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比卡鲁胺联合紫杉醇对雄激素受体阳性三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用
目的 探讨比卡鲁胺(BIC)联合化疗药物紫杉醇( PTX)对雄激素受体( AR)阳性的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及可能的作用机制.方法 采用CCK-8试剂盒观察不同浓度的BIC (0. 1、1. 0、10. 0 μmol/L)和PTX(0. 1、1. 0、10. 0、100. 0、1 000. 0、10 000. 0 nmol/L)以单药及不同联合给药方式处理后,对MDA-MB-231 细胞增殖的抑制作用.细胞增殖抑制率比较采用单因素方差分析.组间两两比较采用LSD法.选取10 nmol/L PTX及10 nmol/L DMSO分别处理MDA-MB-231 细胞样品(各3个)72 h,采用生物信息学方法分析样品的相关基因表达芯片数据,采用校正t检验筛选出差异基因.结果 使用不同浓度的BIC分别处理MDA-MB-231 细胞24、48、72 h后,各组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F=4. 124、8. 189、4. 139, P=0. 037、0. 004、0. 032).BIC 10. 0 μmol/L 组MDA-MB-231 细胞增殖抑制率在48 h 高,为(12. 9 ± 5. 5)% .不同浓度的PTX分别处理MDA-MB-231 细胞24、48、72 h后,不同浓度组MDA-MB-231 细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F=8. 407、47. 432、14. 907, P均<0. 001). PTX在48 h时对MDA-MB-231 细胞的半数抑制浓度(IC50)为5 380. 0 nmol/L. 5 000. 0 nmol/L PTX单药或联合不同浓度(0. 1、1. 0、10. 0 μmol/L)的BIC同时处理MDA-MB-231细胞48 h后,5 000. 0 nmol/L PTX单药处理组与3个实验组中细胞增殖抑制率分别为(53. 2±2. 7)% 、(53. 2±3. 1)% 、(51. 7±3. 4)% 、(51. 0±2. 3)% ,组间差异无统计学意义(F=0. 831,P=0. 492).采用5 000. 0 nmol/L PTX和10. 0 μmol/L BIC以不同的序贯方式联合给药处理MDA-MB-231 细胞(PTX 24 h +BIC 24 h 组、BIC 24 h +PTX 24 h 组、PTX 48 h +BIC 24 h 组、BIC 48 h+PTX 24 h 组),并用5 000. 0 nmol/L PTX(PTX 48 h组)和10. 0 μmol/L BIC(BIC 48 h组)单药处理及同时联合给药(PTX 48 h+ BIC 48 h 组)分别处理MDA-MB-231 细胞后,各组间细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=241. 466,P<0. 001).其中,两两比较结果显示,PTX 24 h+BIC 24 h组细胞增殖抑制率为(72. 9±1. 9)% ,高于BIC 24 h +PTX 24 h组的(42. 9±1. 7)% (P<0. 001),PTX 48 h组的(60. 9±3. 7)% (P<0. 001)和PTX 48 h +BIC 48 h组的(60. 3±4. 1)% (P<0. 001). PTX处理组中有EGR1、FST、FOS、IL8、IL6、RPL27A及CA2 7 个基因的表达量与DMSO处理组比较,差异均有统计学意义( t=18. 647、10. 336、10. 098、9. 683、9. 408、9. 050、8. 001,P均<0. 050).结论 通过先PTX 再BIC 的序贯联合给药方式较单药及其他联合给药方式能够更有效抑制AR 阳性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖,两者间可能存在协同作用.
关键词： 乳腺肿瘤 雄激素受体拮抗剂 化学疗法 联合药物疗法 早期生长反应蛋白质1 -
川芎嗪对土三七诱导的小鼠肝小静脉闭塞病治疗机制的研究
背景：肝小静脉闭塞病（HVOD）临床上以肝肿大、黄疸、腹水和体重增加为特征，目前尚缺乏有效的治疗手段。本课题前期研究发现川芎嗪对土三七诱导的小鼠 HVOD 具有治疗作用。目的：探讨川芎嗪对土三七诱导的小鼠HVOD 的治疗机制。方法：将115只小鼠随机分为土三七组（土三七浓缩煎液30 g·kg-1·d-1灌胃）、低剂量川芎嗪干预组（土三七浓缩煎液30 g·kg-1·d-1＋川芎嗪100 mg·kg-1·d-1灌胃）、高剂量川芎嗪干预组（土三七浓缩煎液30 g·kg-1·d-1＋川芎嗪200 mg·kg-1·d-1灌胃）和正常对照组（PBS 30 g·kg-1·d-1灌胃），30 d 后处死所有小鼠。行HE 染色和 Masson 染色，以 RT-PCR 法和蛋白质印迹法分别检测肝组织中组织因子（TF）、核因子（NF）-κBp65、早期生长反应因子-1（Egr-1）mRNA 和蛋白表达。结果：HE 染色和 Masson 染色结果显示川芎嗪可明显改善 HVOD 小鼠肝组织病理损伤。土三七组 TF、NF-κBp65和 Egr-1 mRNA 和蛋白表达显著高于正常对照组，组间差异有统计学意义（P ＜0.05）；川芎嗪干预后，TF、NF-κBp65和 Egr-1 mRNA 和蛋白表达均不同程度下降（P ＜0.05），以高剂量组下降更为明显，而高剂量川芎嗪干预组与正常对照组相比差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论：川芎嗪可能通过下调 NF-κBp65和 Egr-1表达降低 TF 水平，阻止凝血系统活化，从而有效治疗 HVOD，且高剂量川芎嗪的疗效更为确切。
关键词： 肝静脉闭塞性疾病 土三七 川芎嗪 组织因子 早期生长反应蛋白质1 NF-κBp65 亚基 -
细胞因子对培养的人视网膜色素上皮细胞早期生长反应基因-1的影响
目的 检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞早期生长反应基因-1(Egr-1)的影响.方法 体外培养人RPE细胞,采用免疫荧光染色、Western blotting和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)定性定量观察不同刺激因素作用下Egr-1蛋白和mRNA的表达变化.刺激因素包括:20 μg/ml脂多糖(LPS)、40 ng/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α、10 U/ml干扰素(IFN)-γ、30%单核/巨噬细胞株(THP-1细胞)上清液和正常人玻璃体液分别刺激0(未受刺激)、10、20、30、40、60 min.结果 在未受刺激的RPE细胞中Egr-1呈弱阳性表达,细胞浆为浅黄绿色荧光,随着刺激因素的作用,Egr-1的表达明显增强,细胞浆和部分细胞核呈强绿色荧光.20 μg/ml LPS、40 ng/ml TNF-α、10 U/ml IFN-γ、30%THP-1细胞上清液和玻璃体液刺激RPE细胞后,与未受刺激的RPE细胞相比,Egr-1 mRNA的大增强幅度分别为1.9、1.3、1.4、1.2、1.4倍,Egr-1蛋白的大升高幅度分别为3.4、1.2、1.7、3.2、1.3倍.结论 LPS、TNF-α、IFN-γ、THP-1细胞上清液和玻璃体液可上调体外培养的人RPE细胞Egr-1 mRNA和蛋白的表达,且出现核转位现象,说明这些刺激因素可引起Egr-1的活化.
