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母乳及配方乳中糖巨肽对体外婴儿双歧杆菌增殖活性的影响
目的：探讨母乳及配方乳中糖巨肽对体外婴儿双歧杆菌增殖活性的影响以及量效关系。方法成熟乳取自2014年9月广州市妇女儿童医疗中心就诊的广州地区身体健康、无特殊饮食习惯、生活安定、奶量充足的30例产妇，从母乳中分离出酪蛋白，通过凝乳酶水解酪蛋白分离糖巨肽，再使用超滤和离子交换色谱法纯化人乳糖巨肽。将牛乳糖巨肽及人乳糖巨肽按一定浓度（0、250、500、1000、1500、2000和3000 mg/L）添加至婴儿双歧杆菌液体培养基，进行厌氧培养，通过比浊法（检测培养基OD600 nm值）确定婴儿双歧杆菌浓度，比较人乳和牛乳糖巨肽促进婴儿双歧杆菌增殖活性的差异。采用两独立样本t检验进行统计学分析。结果人乳纯化的糖巨肽浓度为1712.20 mg/L，纯度为80.3%。培养基中牛乳糖巨肽浓度在250~2000 mg/L的范围内增加其初始浓度，可以提高双歧杆菌的菌体浓度和增殖速率。培养36 h时，不同糖巨肽浓度下，双歧杆菌的生长均处于对数生长期，因此选取36 h作为双歧杆菌浓度的观察时间点。当培养36 h，培养基中糖巨肽浓度分别为1000、1500、2000和3000 mg/L时，人乳糖巨肽培养基中双歧杆菌浓度分别为2.255±0.036、2.583±0.088、2.877±0.080和3.219±0.081，均高于牛乳糖巨肽培养基中的浓度（分别为2.115±0.053、2.312±0.064、2.542±0.090和2.894±0.076），差异均有统计学意义（t值分别为4.867、5.569、6.192和6.516，P值均＜0.01）。结论牛乳糖巨肽及人乳糖巨肽在体外均具有促进婴儿双歧杆菌增殖的活性。在相同浓度时，人乳糖巨肽促双歧杆菌增殖活性高于牛乳糖巨肽。
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酪蛋白磷酸肽-非结晶型磷酸钙与含氟制剂抑制牙釉质脱矿的比较研究
目的 评价酪蛋白磷酸肽-非结晶型磷酸钙(casein phosphopeptide-amorphous calcium phosphate,CPP-ACP)与几种临床常用的含氟制剂抑制牙釉质脱矿的作用,为正畸临床预防牙釉质脱矿提供依据.方法 将70颗离体牙分为7组,每组10颗,即A组:CPP-ACP组；B组:CPP-ACP+含氟漱口水组；C组:含氟漱口水组；D组:含氟玻璃离子牙体保护剂组；E组:含氟树脂粘接剂组；F组:氟保护漆组；G组:空白对照组.将7组样本按三餐进食时间放人人工致龋液中,每次10 min,前6组分别于样本颊面釉质表面涂布CPP-ACP、CPP-ACP和含氟漱口水、含氟漱口水、含氟玻璃离子牙体保护剂、含氟树脂粘接剂、氟保护漆,空白对照组不处理,7组样本其余时间均浸泡于人工唾液中.于实验1、2、3个月用原子力显微镜检测.结果 实验1个月D组釉质表面粗糙度[(114±1) nm]显著低于G组[(172±9) nm] (P ＜0.05)；实验2和3个月各组釉质表面粗糙度与G组差异均有统计学意义(P＜0.05)；B组粗糙度2和3个月为(87±9)和(27±6) nm,显著低于其他各组(P＜0.05)；C组2和3个月粗糙度分别为(145±8)和(126±7)nm,显著高于D、E、F组(P＜0.05).结论 CPP-ACP与含氟制剂在人工致龋环境中均有抑制牙釉质脱矿的作用,CPP-ACP与含氟制剂联合应用效果更佳；含氟固体(D、E、F组)比含氟液体(C组)抑制牙釉质脱矿作用效果更好.
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山萘黄素是一种有效的体外重组人蛋白激酶CK2的抑制剂
目的为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制.方法利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活性来检测CK2的活性.向反应体系中加入不同浓度的山萘黄素,观察其对CK2的抑制效果;通过固定酪蛋白浓度为2 g·L-1, ATP浓度为10, 20, 40和80 μmol·L-1或固定ATP的浓度为10 μmol·L-1,改变酪蛋白浓度(1, 2, 4和8 g·L-1),观察其酶动力学机制.结果山萘黄素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=1.9 μmol·L-1).抑制作用强于已知的CK2抑制剂白杨素、桑色素和金雀异黄素.酶动力学分析表明,山萘黄素与ATP(Ki=1.1 μmol·L-1)及酪蛋白(Ki=3.1 μmol·L-1)均呈非竞争性抑制CK2的活性.初步的化合物结构分析表明,2'和3位上的羟基对山萘黄素及芹黄素发挥其抑制效果产生实质性的负面影响.结论山萘黄素是一种新的体外蛋白激酶CK2的有效抑制剂.黄酮类CK2的抑制剂可能通过不同的位点作用于CK2,这种作用主要取决于其羟基的数目和位置.
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酪蛋白对高碘小鼠机体和甲状腺碘代谢水平的影响
目的 观察酪蛋白摄入对高碘小鼠机体和甲状腺碘代谢水平的影响.方法 采用2×3析因设计将小鼠分成6组,每组8只.饮水分为适碘(50 μg/L)、高碘(600 μg/L)2个水平；饲料分为3个水平:Ⅰ为普通饲料,Ⅱ、Ⅲ分别为加入酪蛋白10％、20％的普通饲料.喂养6、12个月后,酸消化砷铈催化分光光度法测定小鼠血清、尿液和甲状腺组织的含碘量.结果 6个月时,50Ⅰ、50Ⅱ、50Ⅲ、6001、600Ⅱ、600Ⅲ组小鼠血清含碘量分别为(85.59±8.78)、(64.59±9.06)、(72.53±11.69)、(110.04±9.37)、(81.06±9.94)、(86.63±19.59) μg/L,甲状腺组织含碘量分别为(0.21±0.09)、(0.29±0.08)、(0.24±0.05)、(0.50±0.10)、(0.37±0.13)、(0.42±0.12)g/kg,尿碘中位数分别为87.5、68.1、105.5、746.5、828.3、1014.2 μg/L.析因分析显示,碘和酪蛋白摄入水平明显影响血清含碘量(F值分别为27.95、18.52,P均＜0.05),但两者无交互作用(F=0.81,P＞ 0.05)；甲状腺组织含碘量明显受碘摄入水平影响(F=31.35,P＜ 0.05),且酪蛋白与碘摄入水平间存在交互作用(F=3.34,P＜0.05).12个月时,上述6组小鼠血清含碘量分别为(88.54±12.33)、(72.45±7.73)、(72.93±13.61)、(106.26±12.00)、(90.03±7.90)、(104.88±11.67) μg/L,甲状腺组织含碘量分别为(0.58±0.12)、(0.40±0.14)、(0.69±0.16)、(0.84±0.13)、(0.89±0.13)、(1.02±0.11)g/kg,尿碘中位数分别为104.8、121.5、102.7、829.1、1080.8、895.2 μg/L.析因分析显示碘和酪蛋白摄入水平明显影响血清和甲状腺组织含碘量(F值分别为42.78、7.42和66.62、7.90,P均＜0.05),但两者无交互作用(F值分别为1.93、2.31,P均＞0.05).结论 机体长期摄人碘过多可明显增加血清、甲状腺和尿液中的含碘量,而酪蛋白摄人增多可促进高碘的排泄,部分抑制因高碘摄人而引发的血清和甲状腺含碘量增高趋势.
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酪蛋白对高碘小鼠甲状腺细胞凋亡的影响
目的 观察酪蛋白(CA)对高碘小鼠甲状腺细胞凋亡的影响.方法 将昆明种小鼠随机分为4组:对照(NI)组、高碘(HI)组、高碘+CA1(HI+CA1)组、高碘+CA2(HI+CA2)组,喂养12个月,ELISA法检测血清白细胞介素1β(IL-1β),RT-PCR法检测甲状腺组织Fas、FasL mRNA表达水平,TUNEL法检测甲状腺细胞凋亡.结果 与NI组比较,HI组小鼠血清IL-1β水平和甲状腺组织Fas mRNA表达均明显增高(P＜0.05或＜0.01),且甲状腺滤泡上皮凋亡细胞数也明显增多(P＜0.01),而高碘小鼠随着CA摄入量增高,上述改变程度明显降低.结论 高碘可通过提高机体IL-1β水平,诱发凋亡调控基因Fas/FasL系统表达改变,促进大鼠甲状腺细胞凋亡,而CA摄入可以部分拮抗高碘引起的上述改变,对滤泡上皮细胞具有一定的保护作用.
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酪蛋白和高碘对小鼠甲状腺形态结构的影响
目的 观察酪蛋白和高碘对小鼠甲状腺形态结构的影响.方法 按2×3析因设计将实验小鼠分成6组,饮水分为适碘(50μg/L)、高碘(600μg/L)2个水平;饲料分为3个水平,Ⅰ:普通饲料,Ⅱ、Ⅲ:分别加入酪蛋白10%、20%的普通饲料.喂养12个月后,测定小鼠甲状腺质量,光、电镜观察甲状腺形态结构.结果 析因分析结果显示碘因素明显影响小鼠甲状腺绝对质量和相对质量(F值分别为1623、9.47,P＜0.01),且酪蛋白与碘之间具有交互作用(F值分别为5.29、4.68,P＜0.01或＜0.05).600 Ⅰ组[(7.60±2.40)rag、(143.3-1-43.2)mg/kg]、600Ⅲ组[(8.63±1.88)mg、(166.2±39.4)mg/kg]分别与50Ⅰ组[(5.91±0.82)mg、(117.0±22.2)mg/kg]和50Ⅲ组[(4.90-t-0.63)mg、(106.1±13.3)ng/kg]比较,甲状腺绝对质量和相对质量明显增高(P＜0.05或＜0.01)或具有增高趋势,而600Ⅱ组[(5.76±1.13)mg、(109.8±16.5)mg/kg]与600Ⅰ、600Ⅲ组比较,上述指标明显减少(P＜0.05或＜0.01).光、电镜下高碘组小鼠呈现高碘甲状腺肿、淋巴细胞浸润以及局部细胞代偿性功能增强现象,而随着酪蛋白摄入剂量增高,甲状腺形态结构改变程度明显减弱.结论 长期高碘可引发小鼠甲状腺胶质潴留性肿大和炎性损伤,对甲状腺炎的发生可能具有促进作用,而适当增加酪蛋白摄入可部分拮抗高碘引起的上述改变,对滤泡上皮细胞具有一定的保护作用.
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CPP-ACP及氟促进脱矿牙骨质再矿化的体外实验
目的：比较普通含氟牙膏、酪蛋白磷酸肽钙磷复合体（CPP-ACP）及含氟CPP-ACP（CPP-ACPF）促进脱矿牙骨质再矿化的效果。方法制备健康牙骨质块，开窗后脱矿液脱矿96 h ，分为空白对照组、普通含氟牙膏组、CPP-ACP组和CPP-ACPF组，每组10个样本，将实验药品按要求在牙骨质表面反复涂擦3 min ，流水冲洗5 min ，每天1次。28 d后扫描电镜观察各组牙骨质表面形貌，通过能谱分析测定牙骨质表面的微区成分（Ca、P含量及Ca/P），采用SPSS 17．0统计软件对各组间Ca、P、Ca/P进行单因素方差分析。结果扫描电镜结果显示各组牙骨质表面形貌不同：与对照组相比，各实验组再矿化后均可见不同程度矿物质沉积，以CPP-ACPF组沉积物厚。能谱分析结果显示各实验组钙磷含量均较对照组明显升高，各实验组之间的差别无统计学意义。结论CPP-ACP及CPP-ACPF均能促进脱矿牙骨质再矿化，CPP-ACP与氟可能具有协同抗龋作用。
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CPP-ACP对牙骨质表面形貌及微区成分的影响
目的 观察局部应用酪蛋白磷酸肽钙磷复合体(CPP-ACP)后牙骨质表面形貌的变化,并分析其微区成分,以明确CPP-ACP对牙骨质的影响.方法 制备健康牙骨质块,以含10% CPP-ACP的GC Tooth Mousse分别涂擦21,14,7 d,未涂擦组作为空白对照,并设标准对照组.扫描电镜观察各组牙骨质表面形貌,通过能谱分析测定牙骨质表面的微区成分(Ca、P含量及Ca/P),并进行比较.结果 各组牙骨质表面形貌不同,与对照组相比,CPP-ACP处理14和21 d后的牙骨质表面可见膜状覆盖物.各组牙骨质微区成分(Ca、P含量及Ca/P)的差别无统计学意义.结论 含10% CPP-ACP的GC Tooth Mousse在健康牙骨质表面应用14 d后,对牙骨质可能具有保护作用.
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酪蛋白磷酸肽-磷酸钙溶液抑制牛牙早期釉质龋的体外研究
目的 研究酪蛋白磷酸肽-磷酸钙溶液(CPP-ACP)在体外对牛牙釉质早期人工龋的抑制作用.方法 将28颗牛牙釉质样本随机分成4组,每组7颗,浸入唾液24 h以形成人工获得性膜,然后用4种不同溶液(A组:去离子水;B组:1% CPP-ACP溶液;C组:0.05%的NaF溶液;D组:1% CPP-ACP和0.05% NaF的混合液)浸泡7 d后,将其悬吊在新鲜配制的变异链球菌悬液中7 d,建立体外生物膜脱矿模型.采用扫描电镜观察处理前后牙釉质表面形态的改变,采用显微硬度法测量处理前后牙釉质表面硬度.结果 扫描电镜下,A组釉质表面可见大小不等的圆形孔隙,呈蜂窝状改变;其他3组釉质表面完整,没有明显的龋损孔隙,可见不规则的矿物质沉积.显微硬度测量显示,B、C、D组表面硬度值均大于A组,有显著性差异(P<0.05);B、C、D组之间两两比较,亦有显著性差异(P<0.05).结论 CPP-ACP能够减少牙釉质脱矿并促进再矿化;CPP-ACP与氟化钠在防龋方面具有协同作用.
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Tyrphostin AG1478对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2 α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的32P放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、[KG*2]cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1478对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为25.9 μmol/L,抑制作用接近于已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3),稍小于5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB).AG1478对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白均呈竞争性抑制作用,是一种双底物抑制剂.结论:AG1478不仅是高效特异的表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且也是一种新型有效的蛋白激酶CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便的筛选和开发有效CK2抑制剂的分子靶点.
