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常温机械灌注下大鼠骨髓间充质干细胞修复心脏死亡后捐献供肝
目的 研究常温机械灌注(NMP)下大鼠骨髓间充质干细胞对心脏死亡后捐献(DCD)肝脏的修复作用.方法 体外培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs),建立心脏死亡后热缺血45 min模型.30只Wistar大鼠随机分成NMP组、NMP+ BMMSCs(N+B)组、冷保存(CS)组,每组(n=10)于2和4h检测相关指标.结果 N+B组在修复肝脏功能和肝脏病理方面,包括超微结构、改善灌注液酸性环境能力以及升高三磷酸腺苷水平等,优于NMP组和CS组(均P＜0.05).NMP组和N+B组耗氧量在2h后出现明显变化[2 h:(24.35±0.64) ml/min比(29.33±0.47) ml/min;3h:(25.33±0.86)ml/min比(30.34±0.49) ml/min;4 h:(26.88 ±1.07) ml/min比(31.76 ±0.96) ml/min;P＜0.05],提示N+B组的修复作用明显优于其他两组.结论 在常温机械灌注下大鼠骨髓间充质干细胞可对DCD大鼠供肝发挥一定的修复作用.
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常温机械灌注条件下劈离式肝移植猪模型的建立
目的 总结建立常温机械灌注条件下劈离式肝移植模型的经验.方法 巴马小型猪20头,供体受体各10头.供肝在常温机械灌注条件下沿Taira线进行劈离,保留右半肝.右半肝在无转流条件下行原位肝移植术.常温机械灌注过程中监测猪门静脉和肝动脉流量、灌注压力和胆汁生成量,取血检测生化和血气分析指标,取肝脏组织行HE染色并观察病理变化.记录受体手术过程中血流动力学变化以及术后5天存活率和死亡原因.结果 灌注过程中血流动力学、血生化和血气分析指标保持稳定,肝移植术中无受体死亡.术后第2天死亡2头,术后5天存活率为80％ (8/10).结论 在常温机械灌注条件下行肝劈离术,用右半肝在无转流条件下行肝移植术建立大动物模型具有较好的稳定性和重复性,为下一步研究奠定了基础.
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常温机械灌注减轻猪心脏死亡供肝胆管损伤
目的 探讨常温机械灌注对猪心脏死亡器官捐献(DCD)供肝胆管保存的保护作用.方法 12例热缺血40 min的猪DCD供肝随机分为实验组和对照组,每组6个.实验组常温机械灌注(NMP)6 h,并监测灌注期间肝动脉及门脉灌注压力、流量的变化,测量灌注液内ALT、AST等水平,记录每小时胆汁分泌量.对照组UW液冷保存6 h(0 ～4℃).保存结束时,取两组胆管标本行病理学检查.结果 实验组保存期间,动脉及门脉流量始终稳定.灌洗液内ALT、AST水平在灌注开始后,有较高水平的上升,之后维持稳定水平.保存期间胆汁分泌量逐渐增多,第3h达到高峰,6h产生胆汁总量为(27.6±0.6)ml.HE染色可见对照组胆管上皮细胞表面黏膜脱落,部分小胆管坏死,炎细胞浸润,偶见小动脉坏死,血管内皮细胞有不同程度水肿、剥脱,伴出血及小血管透明血栓形成;实验组仅有少量炎细胞浸润,偶见内皮细胞水肿,伴出血.两组胆管组织半定量评分[(12、10、9、8、7、10)比(6、8、7、7、5、9)]差异有统计学意义(P＜0.05).结论 常温机械灌注是一种有效的供体器官保存方法.该法不但可通过持续提供氧及营养代谢底物恢复DCD供肝能量储备,从而逆转热缺血过程中ATP供应中断引起的损伤;还可避免器官保存过程中的进一步损伤,对DCD供肝以及胆管有很好的保护作用.
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常温机械灌注在心脏死亡捐献供肝保存中的作用
心脏死亡捐献器官(DCD)是扩大供肝池的重要来源.相较于脑死亡捐献器官(DBD),DCD供肝更容易出现长时间缺血缺氧,从而导致严重损伤,这使DCD器官移植受到很大的限制.常温机械灌注可通过持续携氧灌流大程度地模拟离体肝脏的在体生理状态,维持细胞生理代谢和肝脏活性,甚至修复肝脏损伤.本文就DCD肝脏常温机械灌注在临床和实验中的研究进展做一综述.
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常温机械灌注修复长时间冷保存供肝的大动物实验研究
目的 探索常温机械灌注(NMP)在挽救大动物边缘供肝中的价值.方法 6只雄性、10 ～ 12月龄巴马小型猪分为静态冷保存(SCS)6 h组和SCS 24 h组,每组3只,分别于供肝获取后SCS 6 h、24h后进行2hNMP复苏.基于荷兰Organ Assist公司Liver Assist系统和供体猪自身血液,整合四通道生理仪器及自制灌注管路搭建NMP平台.在NMP过程中分别于灌注0、15、60、90、120 min 5个时间点收集灌注液用于肝功能(ALT、AST)检测及血气分析(pH、氧分压).灌注结束取肝左叶相同位置少许组织,以10％甲醛固定,用于后续HE染色.结果 NMP开始时,SCS 24 h组ALT、AST水平略高于SCS 6 h组,之后AST、ALT水平均缓慢上升.NMP开始时SCS 24 h组pH值中位数为7.28,氧分压中位数为46 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa,下同),均低于SCS 6 h组(7.36,52 mmHg),经过2 h NMP后SCS 24 h组pH值和氧分压逐渐接近甚至优于SCS 6 h组.HE染色发现,灌注前SCS 24 h组肝脏充血严重,炎性细胞浸润明显;NMP2 h后,肝脏充血明显改善、炎性细胞减少,与SCS 6 h组无明显差异.结论 基于Liver Assist系统和供体猪自身血液成功搭建的NMP平台,可有效改善长时间冷保存的边缘供肝质量,提示NMP在修复边缘供肝、扩展供肝来源方面具有重要临床及基础研究价值.
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无缺血肝脏移植患者术后早期观察与护理
目的:探讨无缺血肝脏移植(IFLT)患者术后早期观察及护理方法.方法:对2017年7～8月接受IFLT手术的3例受体进行移植肝功能观察与护理、腹部引流管护理、术后并发症观察与护理、心理护理等措施.结果:3例受者手术过程顺利,手术时间(396±102)min,无肝期(42±12)min,失血量(750±163)ml,患者移植手术中血压稳定;3例受者术后均未发生移植物无功能、早期移植物功能不全、血管胆道相关并发症及急性排斥反应,术后(19±3)d顺利出院.结论:IFLT是一种全新的器官移植技术,术后严密观察肝功能恢复情况,做好管道护理、并发症观察及心理干预是保证患者顺利恢复的关键.
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基于常温机械灌注不中断血流保存供肝肝移植的手术配合
目的 总结基于常温机械灌注不中断血流保存供肝的肝移植手术配合要点.方法 10例患者在常温机械灌注保存供肝下进行肝移植手术,做好供肝获取和保护,不间断加强血流供肝获取的手术配合,准备灌注液、灌注机器,做好常温机械灌注供肝期的安全管理,手术期体温的控制以及供肝植入手术的护理.结果 10例手术均顺利完成,术后恢复良好,出院前肝功能各项指标均恢复正常水平,未发生手术并发症,术后每个月随访复查肝功能,10例患者均未发生急性排斥反应,有1例患者术后1个月复查丙氨酸氨基转移酶(ALT)偏高,予护肝等综合治疗后恢复正常.结论 常温机械灌注保存供肝在肝移植手术应用效果显著,充分的术前准备,医护人员扎实的专业技术及密切的合作,是提高手术效率及保证手术顺利进行的关键.
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无缺血肝移植技术的创立——附三例报告
目的 本研究旨在探讨无缺血肝脏移植(Ischemia-free liver transplantation,IFLT)技术在临床应用的可行性及安全性.方法 在大量动物实验基础上创立了IFLT技术并应用于临床.通过分析2017年7—8月间接受IFLT手术的3例供、受者资料,对其手术方法进行总结,记录肝脏灌注参数及血气生化指标,监测术后早期肝功能恢复及并发症的情况,收集供肝获取前、灌注终点和复流后的组织标本行病理检查,了解肝脏的缺血再灌注损伤情况.结果 3例终末期肝病患者接受了IFLT,在供肝获取、体外保存和植入受者过程中均保持供肝血流供应不中断.机械灌注液中的pH值稳定在7.30～7.47,血乳酸均在灌注1.5～3 h后下降至＜0.3 mmol/L.灌注过程中胆汁持续产生,每小时2～6ml.HE染色及TUNEL检测均显示,供肝获取前、灌注终点及复流后没有明显的肝细胞坏死和凋亡.白细胞介素1β(IL-1β)和血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)免疫组化检测显示,肝组织未见明显炎症因子释放和血管内皮激活.术后1周3例受者的转氨酶均降至正常,术后丙氨酸转氨酶峰值为120～465 U/L,无排斥反应、血管和胆道并发症发生,3例受者已顺利出院.结论 WLT是一种安全、有效的新技术,可望克服传统肝移植技术的诸多缺点,成为未来肝移植的主流技术之一.
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常温机械灌注改善猪心脏死亡供体捐献供肝质量和胆汁分泌功能的研究
目的 探讨体外常温机械灌注对心脏死亡供体捐献(DCD)离体供肝活性保护和质量改善的作用.方法 15头小型猪随机均分为活体组、热缺血组和冷保存组.活体组直接获取供肝,冷保存组与热缺血组猪诱导心脏死亡90 min后获取.获取后,冷保存组供肝4℃保存4h,热缺血组与活体组使用常温机械灌注4h,各组供肝均全血机械复流1h.随后留取复流液及新生胆汁检测肝功能,切取肝及胆总管组织行苏木素-伊红(HE)染色.取活体组及热缺血组各2例供肝行18F标记脱氧葡萄糖(18F-FDG)正电子发射计算机断层显像(PET-CT)扫描,比较灌注前后平均标准摄取值(SUVmean)值.结果 热缺血组与冷保存组间的谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)结果差异无统计学意义(P＞0.05).热缺血组新生胆汁[(2.67±1.05) ml]多于冷保存组[(0.87±0.34) ml,P＜0.05].热缺血组新生胆汁中总胆红素浓度[(466.15±156.11) μmol/L]高于冷保存组[(160.79±36.69) μmol/L,P＜0.05].两组肝细胞均出现广泛水肿及肝细胞变性,胆道上皮完整性严重破坏,但冷保存组损伤更为严重.正电子发射计算机断层显像(PET-CT)结果显示热缺血组机械灌注后SUVmean值较前升高.结论 体外常温机械灌注可明显改善DCD供肝糖代谢和胆汁分泌功能,但对于缺血再灌注损伤无明显减轻作用.
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常温机械灌注在无缺血肝移植中的应用体会
目的 探讨常温机械灌注在无缺血肝移植手术中的应用体会.方法 选取我院2017年7月23日～2017年8月25日应用常温机械灌注行无缺血肝移植的患者6例,术前做好人员准备、捐献供体准备、肝移植受体准备、环境和物品准备、器械和设备准备、机械灌注系统准备;术中配合医生完成无缺血供肝获取、无缺血供肝保存及无缺血肝移植手术.结果 6例供体肝脏均成功实施了无缺血器官获取术,手术时间3～4 h,平均3.5 h.器官机械灌注保存过程顺利,未发生异常.接着成功完成了6例全球首创不中断血流肝移植手术,手术过程顺利,手术时间5～7 h,平均6h,手术出血600～2000 mL,平均1400 mL.结论 常温机械灌注系统在无缺血肝移植手术中应用安全有效,术前准备充分,术中娴熟准确的护理配合是手术成功的基础和保障.
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肝脏机械灌注的研究进展
肝移植是目前治疗终末期肝病唯一的有效手段,而供肝严重短缺与等待移植名单的不断增长间的矛盾在持续扩大.肝移植的供肝保存技术中,机械灌注可降低缺血-再灌注损伤,能评估供肝质量并且较好地保存离体肝脏,甚至拯救部分边缘供肝.虽然机械灌注技术给供肝保存带来了新的希望,但其仍存在包括主要技术参数设置未达成统一化,针对肝移植的机械灌注技术尚处于临床实验阶段,广泛应用还需大样本量、多中心的临床验证等问题.本文就机械灌注的发展以及不同类型的肝脏机械灌注技术展开综述.
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机械灌注在肝移植中的应用
自20世纪60年代以来，单纯冷保存一直是临床肝脏保存的主要模式。但供肝短缺，扩大标准供肝应用增加，对供肝保存也提出了更高的要求。近年来，肝脏机械灌注相关研究日益成熟，相关设备开发也越加完善，有望成为供肝保存与修复的有效手段。目前研究较多的机械灌注主要包括低温机械灌注、低温氧合机械灌注和常温机械灌注。经动物实验证明，机械灌注可以有效地挽救部分边缘供肝，减轻缺血-再灌注损伤，促进移植肝功能恢复，且灌注液中生化指标、胆汁量等均可为供肝质量评估提供客观指标。近两三年，在欧美地区也开展了临床应用，结果令人振奋，机械灌注对“不理想”的边缘供肝的确有修复作用。目前临床应用的病例还较少，欧洲数个移植中心已经拟开展相关的多中心研究。尽管机械灌注的前景乐观，但仍存在一些问题，包括应用指征、灌注参数设置、灌注液的选择等仍未达成统一，尚需大量的临床实践进行探索，其效果也需长期观察进一步验证。机械灌注不仅是一种理想的保存和修复手段，同时为药物治疗、基因干预等手段提供了平台。理想的机械灌注可以实现“个体化”保存，大程度地保存、修复供肝。期待这一技术尽早成熟，真正服务于临床。
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间充质干细胞体外修复DCD供肝的研究
目的 探讨体外心脏死亡器官捐献(DCD)供肝的修复方法,采用大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP),研究其对DCD肝脏的影响.方法 体外培养BMMSCs,建立心脏死亡后热缺血45分钟的模型.将Wistar大鼠随机分成3组:A组(冷保存组)、B组(单纯NMP组)和C组(NMP+BMMSCs组),4小时为各组研究时间点(n=5).血生化仪检测循环液中的丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST),苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏的病理情况,血气分析仪检测灌注组的耗氧量.结果 C组ALT和AST的量明显低于B组(ALT:F=177.98,P<0.05;AST:F=284.38,P<0.05);C组ALT和AST的量明显低于A组(ALT:F=3100.39,P<0.05;AST:F=192.88,P<0.05).C组的耗氧量在1小时后明显高于B组(4小时:F=22.90,P<0.05).肝脏病理显示C组的修复作用明显优于其他两组.结论 BMMSCs联合NMP对DCD肝脏功能、病理及细胞活性均具有明显保护作用,为修复DCD供肝提供了新的方法.
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新型常温机械灌注装置保存猪DCD供肾的实验研究
目的 构建新型常温机械灌注(normothermic machine perfusion,NMP)系统,利用猪自体肾移植模型,探讨NMP改善猪心脏死亡器官捐献(donation after cardiac death,DCD)供肾保存质量及相关机制.方法 选用健康巴马小型猪10只,随机分为两组,在原位夹闭右肾动脉30分钟后,UW液低温灌注,A组(n=5)以NMP保存8小时,B组(n=5)以UW液4℃低温保存8小时,然后两组均行自体肾移植术,比较术后血清生化指标、肾组织病理变化、细胞因子的表达情况等指标.结果 两组均成功在经过30分钟热缺血和8小时保存后,进行自体肾移植.血流开放1小时后,A组肾组织免疫组化肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、内毒素(endotoxin-1,ET-1)水平明显低于B组,TUNEL法测定凋亡细胞比例也明显低于B组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);血流开放6小时后,A组血清肌酐(serum creatinine,SCr)、TNF-α、Caspase-3水平明显低于B组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);开放后肾脏活检常规病理检查提示,A组肾脏损伤程度明显减轻.结论 NMP保存可明显减轻猪DCD供肾的缺血/再灌注损伤;其保护机制与NMP可模拟器官的生理环境,维持充足能量与氧气供应,减少保存期间和再灌注后炎性细胞因子释放等有关.
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常温机械灌注改善临床心脏死亡供肝功能的可行性及机制
目的 探讨常温机械灌注(NMP)对临床弃肝的保存及修复作用.方法 收集中山大学附属第一医院2015年3月至2016年2月间家属同意捐献但不适宜做临床肝移植的3例心脏死亡供者(DCD)供肝进行NMP保存6h.检测灌注过程中NMP保存液中血糖、乳酸、尿素氮、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肝组织三磷酸腺苷(ATP)浓度;记录胆汁生成量,并检测胆汁中TBIL、碳酸氢盐、γ-谷氨酰转移酶(GGT);观察灌注前后肝组织病理变化、细胞凋亡和氧化应激情况,结果 3例临床弃肝经NMP后发现ALT、AST、TBIL浓度在开始灌注后呈现上升趋势,随后维持相对稳定状态,ALB浓度在灌注过程中由6.00 (4.00～8.00) g/L增加到23.33 (17.00～27.00) g/L,血糖增加到12.07 (10.60～13.90) mmol/L,呈现高糖状态.尿素氮也不断累积浓度达262.3 (216.0～325.0) mg/L.肝组织ATP水平由灌注前的56.95 (44.21～70.89) μmol/g增加至311.85 (276.61～358.08) μmol/g.乳酸浓度则由开始的6.70 (2.60～12.60) mmol/L,降至灌注末期的2.5 (0.3～5.4) mmol/L.随着灌注时间的延长,胆汁的产生逐渐增多,灌注6h胆汁产生量为8.87 (7.30～10.30) ml,而且胆汁的颜色较深,呈黏稠状,伴随着胆汁中的TBIL浓度和碳酸氢盐浓度逐渐升高,而反映胆管损伤指标的γ-GGT浓度则随着灌注时间的延长而减少,灌注6hγ-GGT浓度减少为64.96 (38.5～107.5)U/L.同时灌注后的氧化应激反应[高迁移率族蛋白1(HMGB1)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度]以及炎症反应程度[白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-c)浓度]均维持在较低水平.结论 NMP实现了对DCD供肝移植前的评估,并且对供肝的选择、治疗干预以及预处理提供了新方法,NMP不仅改善了器官质量和功能,也为扩大供肝来源提供了新的途径.
