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丹参素冰片酯对同型半胱氨酸诱导大鼠骨髓间充质干细胞损伤的保护作用及机制
目的 探讨丹参素冰片酯(TBE)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)损伤的作用及机制.方法 以密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离和培养BMSC.将BMSC分为对照组(未干预)、TBE-1组(加入含10 μmol/L TBE-1溶液100μl)、TBE-2组(加入含10 μmol/L TBE-2溶液100μl)、Hcy组(加入含0.5 mmol/L Hcy溶液100μl)、Hcy+ TBE-1组(加入含10 μmol/L TBE-1溶液100μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100μl)、Hcy+ TBE-2组(加入含10 μmol/LTBE-2溶液100μl和含0.5 mmol/L Hcy溶液100μl)、Hcy+ TBE-1+阻断剂组[加入含10 μmol/LTBE-1溶液100μl、0.5 mmol/L Hcy溶液100μl和25 μmol/L LY294002(磷脂酰肌醇3激酶的特异性阻断剂)溶液100 μl]和Hcy+ TBE-2+阻断剂组(加入含10 μmol/L TBE-2溶液100μl、0.5 mmol/LHcy溶液100μl和25 μmol/L LY294002溶液100μl).采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性;黄嘌呤氧化酶法检查细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,TBA法检测细胞丙二醛水平,评价细胞氧化损伤程度;透射电子显微镜观察各组细胞超微结构;免疫细胞化学法检测细胞蛋白激酶B(PKB)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平.结果 (1)干预1、12、24和48 h后,TBE-1组和TBE-2组细胞的增殖活性均高于正常组(P均＜0.01),TBE-1组与TBE-2组的细胞增殖活性差异均无统计学意义(P均＞0.05).(2)TBE-1组和TBE-2组的T-SOD活性均高于对照组(P均＜0.01);Hcy组、Hcy+ TBE-1组和Hcy+ TBE-2组的T-SOD活性均低于对照组(P均＜0.01);对照组、Hcy+TBE-1+阻断剂组和Hcy+ TBE-2+阻断剂组之间的T-SOD活性差异均无统计学意义(P均＞0.05);Hcy+ TBE-1组和Hcy+ TBE-2组的T-SOD活性均高于Hcy组(P均＜0.01);Hcy+ TBE-1+阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy+ TBE-1组(P＜0.05);Hcy+ TBE-2+阻断剂组的T-SOD活性高于Hcy+ TBE-2组(P＜0.05).TBE-1组和TBE-2组的丙二醛水平均低于对照组(P均＜0.01);Hcy组、Hcy+ TBE-1组、Hcy+ TBE-2组、Hcy+ TBE-1+阻断剂组和Hcy+ TBE-2+阻断剂组的丙二醛水平均高于对照组(P均＜0.01);Hcy+ TBE-1组和Hcy+ TBE-2组的丙二醛水平均低于Hcy组(P均＜0.01);Hcy+TBE-1+阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy+ TBE-1组(P＜0.05);Hcy+ TBE-2+阻断剂组的丙二醛水平高于Hcy+ TBE-2组(P＜0.05).(3)透射电子显微镜下,Hcy组、Hcy+ TBE-1+阻断剂组、Hcy+TBE-2+阻断剂组与对照组比较,BMSC的细胞器肿胀明显,衰老凋亡细胞明显增多,而TBE-1组和TBE-2组细胞内粗面内质网丰富,细胞代谢极为活跃;与Hcy组比较,Hcy+ TBE-1组及Hcy+ TBE-2组BMSC的细胞器水肿减轻,衰老凋亡细胞数量减少,细胞损伤程度减轻.(4)TBE-1组和TBE-2组的PKB水平均高于对照组(P均＜0.01);Hcy组、Hcy+ TBE-2组、Hcy+ TBE-1+阻断剂组和Hcy+TBE-2+阻断剂组的PKB水平均低于对照组(P均＜0.01);对照组与Hcy+ TBE-1组之间的PKB水平差异无统计学意义(P ＞0.05);Hcy +TBE-1组和Hcy+ TBE-2组的PKB水平均高于Hcy组(P均＜0.05);Hcy+ TBE-1+阻断剂组的PKB水平低于Hcy+ TBE-1组(P＜0.05);Hcy+ TBE-2+阻断剂组的PKB水平低于Hcy+ TBE-2组(P＜0.05).TBE-1组和TBE-2组的NF-κB水平均高于对照组(P均＜0.01);Hcy组、Hcy+ TBE-1组、Hcy+ TBE-2组、Hcy+ TBE-1+阻断剂组和Hcy+ TBE-2+阻断剂组的NF-κB水平均低于对照组(P＜0.01或0.05);Hcy +TBE-1组和Hcy+ TBE-2组的NF-κB水平均高于Hcy组(P均＜0.05);Hcy+ TBE-1+阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy+ TBE-1组(P＜0.05);Hcy+ TBE-2+阻断剂组的NF-κB水平低于Hcy+ TBE-2组(P＜0.05).结论 TBE可改善Hcy对BMSC的损伤,其机制可能与磷脂酰肌醇3激酶/PKB信号转导通路中的PKB及下游信号蛋白NF-κB活化有关.
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丹参素冰片酯的不对称合成研究
目的 不对称合成丹参素冰片酯.方法 以3,4-二羟基苯甲醛为原料,经苄基保护及Knoevenagel缩合反应得到(E) -3-( 3,4-二苄氧基苯基)丙烯酸(3),经过酰化反应得到酰氯后与天然冰片反应生成(E)-3-(3,4-二苄氧基苯基)丙烯酸冰片酯(4),通过Sharpless不对称双羟化反应构建手性中心,得到高光学纯度的3-(3,4-二苄氧基苯基)-2,3-二羟基丙酸冰片酯衍生物(5),后经选择性催化加氢及脱保护得到目标产物.结果与结论 目标化合物经高效液相手性色谱柱分析ee为97％,所得化合物的结构通过1H-NMR、13C-NMR、HRMS证实,该合成方法操作简单、条件温和、光学产率高.
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β-(3,4-二羟基苯基)-α(S)-羟基丙酸冰片酯脂肪乳的HPLC法测定
制备并拆分丹参素冰片酯的立体异构体,得到β-(3,4-二羟基苯基)-α(S) -羟基丙酸冰片酯(1),建立了高效液相色谱法测定1脂肪乳中的1.采用C18色谱柱,以甲醇-0.2％甲酸(65∶35)为流动相,检测波长280 nm. 1在10.7～685μg/ml浓度范围内线性关系良好.平均回收率为100.3％,RSD为1.34％.
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丹参素冰片酯影响大鼠脑组织P-糖蛋白表达研究
目的 考察丹参素冰片酯(DBE)及丹参素钠-冰片(SDSS-B)等摩尔联合用药的脑部靶向作用与其对P-糖蛋白表达的影响.方法 采用LC-MS分析大鼠尾静脉注射DBE、SDSS-B及SDSS后脑部丹参素分布量;蛋白免疫印迹法分析3种给药方式对大鼠脑组织P-糖蛋白(P-gp)表达量的影响.结果 以大鼠脑部丹参素分布定性评价其脑靶向大小为:DBE(SDSS-B)>SDSS;蛋白免疫印迹结果分析显示:DBE和SDSS-B给药均可有效降低大鼠海马组织P-gp表达水平(P<0.01,与Control组对比;P<0.01,与SDSS组对比),其表达量在给药45 min时分别降至(47.58±2.28)％及(46.54±1.41)％;SDSS给药对P-gp表达量几乎无明显抑制作用(P>0.05在5、15、45、60 min,与Control组对比).结论 DBE和SDSS-B均表现出脑部靶向作用,其靶向作用与其降低脑组织P-gp表达量有关.
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毛细管气相色谱法测定丹参素冰片酯中有机溶剂残留
目的：建立测定丹参素冰片酯中有机溶剂残留量的毛细管气相色谱法。方法采用顶空毛细管气相色谱法，N，N －二甲基甲酰胺为溶剂，DB － WAX 毛细管柱(30.0 m ×0.25 mm ×0.25μm)，氮气为载气，FID 检测器。结果乙醚、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇和乙醇6种有机溶剂均达到了完全分离，在考察的质量浓度范围内具有良好线性关系，低检测限分别为6.48，5.33，4.79，7.43，12.87，4.81 ng，高、中、低3种质量浓度的回收率均大于98%。结论该方法灵敏度、准确度均达到有机溶剂残留量的检测要求，可用于丹参素冰片酯中6种残留溶剂的检测和分析。
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丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片的含量测定
目的 建立可行的丹参素冰片酯(DBZ)乳剂中DBZ和冰片的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定丹参素冰片酯,色谱柱采用Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.2%甲酸水(65:35)为流动相,检测波长为280 nm.采用气相色谱法测定冰片.HP-1毛细管柱(30.0 m×0.32 mm×0.25μm).进样口温度为260℃,检测器温度为260℃.结果 丹参素冰片酯与杂质峰分离良好,线性范围为0.01-1.00 g/L(R2=0.999);乳剂样品中丹参素冰片酯的含量为4.75 g/L,冰片与杂质峰分离良好,质量浓度线性范围为0.001-0.050 g/L(R2=0.999),乳剂样品中冰片未检出.结论 所采用方法准确、灵敏、专属性好,可用于丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片含量的测定.
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HPLC测定丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量及有关物
目的:建立丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量测定及有关物质检查方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱:KromasilC18(150 mm×4.6mm,5 μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.2％甲酸水(42:58),流速为1.0 mL·min-1,检测波长280 nm,进样体积20 μL.结果:试验结果表明,HPLC法检测主峰与杂质峰有较好的分离度,且重复性较好；丹参素冰片酯的浓度在5～60 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=1.000),平均同收率为98.2％(n=9).结论:该法操作简便,结果可靠,适用于丹参素冰片酯脂肪乳注射液含量测定及有关物质检查.
