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运动神经元病与TDP-43蛋白的病理性表达
目的 认识TDP-43蛋白在运动神经元病中枢神经系统的病理性表达特征.方法 对4例经尸检病理证实的运动神经元病的临床及病理组织学特征进行总结;并对其脑和脊髓切片进行泛素、磷酸化TDP-43免疫组化染色,观察其阳性表达情况,并与同年龄、无神经疾病病史的3例病例的脑和脊髓组织进行对照.结果 4例病例具有运动神经元病典型的临床与组织学特征,其脑和脊髓组织中,3例存在神经元泛素阳性包涵体结构,主要表现为丝团样包涵体,致密圆形包涵体及路易样包涵体;2例存在明确的TDP-43阳性表达,表现为广泛分布于大脑运动皮层及脊髓前角的各种形态的神经元胞浆包涵体及胶质细胞包涵体,1例存在脊髓前角神经元TDP43弱阳性表达.对照病例无泛素阳性及TDP-43阳性包涵体发现.结论 运动神经元病患者的中枢神经系统存在广泛TDP-43蛋白阳性表达,且其阳性包涵体具有一定特征性,值得进一步研究其形成机制.
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老年痴呆患者血清中TDP-43含量的检测与分析
目的 检测老年痴呆患者与健康者血清中TDP-43水解片段CpTDP-25和TDP-35蛋白的含量,并探究CpTDP-25/TDP-35比值与老年痴呆疾病间的联系.方法 采用酶联免疫法(ELISA)检测老年痴呆患者(阿尔茨海默症、帕金森痴呆、血管性痴呆、路易体痴呆、混合性痴呆)与健康者血清中的CpTDP-25和TDP-35的含量,并计算CpTDP-25/TDP-35比值.结果 血清中CpTDP-25/TDP-35比值老年痴呆患者明显高于健康对照组,不同类型老年痴呆组(路易体痴呆除外)亦高于健康对照组间,差异均有统计学意义(P<0.05);但不同类型老年痴呆组的比值差异无统计学意义(P>0.05).结论 CpTDP-25/TDP-35比值可以作为辅助诊断老年痴呆患者的一个重要临床指标.
关键词： 老年痴呆 TDP-43 CpTDP-25/TDP-35 -
肌萎缩侧索硬化症相关TDP-43降解机制的研究
目的 探索肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关TDP-43的降解机制.方法 用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达野生型(role of wild-type,WT) WT TDP-43,与家族型ALS相关的Q331K TDP-43、M337V TDP-43突变蛋白、TDP-43的两种C末端片段TDP-25和TDP-35,再给予自噬、蛋白酶体通路的特异性诱导剂和阻断剂,通过蛋白印迹方法检测5种TDP-43以及自噬标记物LC3-Ⅱ的表达水平.结果 在自噬诱导剂作用下,各组LC3-Ⅱ的表达升高,同时两种突变TDP-43及其C末端片段的表达明显减少,在自噬通路和蛋白酶体阻断剂作用下突变TDP-43及其C末端片段表达水平明显增多,而WT TDP-43的蛋白表达水平仅在蛋白酶体阻断剂作用时增多.结论 WT TDP-43主要经由蛋白酶体途径降解,Q331K TDP-43、M337V TDP-43及其C末端片段经由蛋白酶体途径和自噬两种途径降解.
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人突变TDP-43转基因小鼠ALS模型的建立
目的 构建带有脊髓运动神经元特异性启动子HB9的人类TDP-43野生型和突变型的转基因小鼠模型,研究TDP-43突变导致肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的机制.方法 构建pHB9 - hTDP -43Q331K,M337v - IRES- EGFP转基因的载体,通过受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠.出生的后代利用PCR方法鉴定.免疫组织化学法观察转基因小鼠的脊髓运动神经元中TDP-43的定位及包涵体的形成.采用步态评估和悬挂实验观察转基因小鼠行为学的改变.结果 获得人TDP-43突变转基因小鼠,其运动神经元胞质中TDP-43染色阳性,未见TDP-43包涵体.小鼠行为学检测显示,转基因小鼠的步距与同龄正常小鼠相比明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为6.05和5.15,M337V型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为10.71和9.91；P＜0.01)；步态宽度升高(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步态宽度t值分别为-11.35和-2.73;M337V型小鼠同Ntg相比后肢步态宽度t=2.49;P＜0.05)；平衡抓握力明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比落地时间t=47.43；M337V型小鼠同Ntg相比落地时间t=26.35,P＜0.01).结论 利用HB9启动子可以获得在脊髓运动神经元特异性表达人TDP-43突变的转基因小鼠,TDP-43突变转基因小鼠运动神经元发生退行性改变.转基因小鼠前后肢步距、步态宽度及平衡抓握能力发生改变,结果显示脊髓运动神经元中过表达人TDP-43突变对小鼠的运动能力产生影响.
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散发性肌萎缩侧索硬化发病机制探讨：谷氨酸受体2 Q/R部位RNA无效编辑和病理性TDP-43
谷氨酸受体2（glutamate receptor A2，GluA2）Q/R部位编辑率降低以及相关的RNA2的次黄嘌呤腺苷脱氨酶（adenosine deaminase acting on RNA2，ADAR2）的异常与病理性反式激活应答DNA结合蛋白43（transactivation response DNA-binding protein 43-kD，TDP-43）可同时发生在肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis， ALS）患者的运动神经元中，提示在ALS患者中，这些异常分子病变之间可能存在关联。条件性敲除ADAR2基因的ALS小鼠可表现为运动神经元的缓慢死亡。因为缺乏ADAR2可引起TDP-43的异常分布和聚集，引发神经细胞毒性，继而加速运动神经元变性及死亡。本文总结了GluA2 Q/R部位RNA无效编辑的规律和病理性TDP-43在ALS发病中的作用，并讨论了可能影响ADAR2介导的RNA无效编辑的相关因素，以期为研发新的ALS治疗方法提供参考依据。
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TDP-43与神经退行性疾病
TDP-43(transactive response DNA-binding protein of 43 ku)是一种组织中分布广泛、功能多样的核蛋白.研究表明,病理性TDP-43存在于多种神经退行性疾病中.本文就TDP-43的结构、功能及其与神经退行性疾病之间的关系作一综述.
关键词： TDP-43 阿尔茨海默病 肌萎缩侧索硬化症 泛素阳性包涵体额颞叶变性 -
人TDP-43-M337V对NSC-34细胞增殖的影响
目的：探讨人TDP‐43‐M337V对NSC‐34细胞增殖的影响。方法实验分为转染空质粒pEGFP组、转染TDP‐43‐WT的pEGFP‐TDP‐43‐WT组和转染TDP‐43‐M337V的pEGFP‐TDP‐43‐M337V组3组，利用免疫组化方法观察转染细胞的形态变化；通过检测细胞内MDA含量来观察细胞氧化损伤的程度；MTT检测转染基因对NSC‐34细胞的影响。结果转染各组细胞中，转染人TDP‐43‐M337V组细胞，胞体变圆，突起减少，且轴突变短；经过MDA检测发现，突变的细胞内MDA的含量明显高于其它两组细胞（P＜0．05）；突变的细胞内，其MTT水平明显低于其它两组细胞。结论人TDP‐43‐M337V削弱了NSC‐34细胞活性，降低了NSC‐34细胞的抗氧化损伤能力。
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家族性肌萎缩侧索硬化症10型的临床特征和基因突变分析
[目的]探讨家族性肌萎缩侧索硬化症10型患者的临床特点、分子遗传学特征.[方法]对2013年中山大学附属第一医院神经科门诊就诊发现的该病家系行高通量测序法检测其TARDBP基因外显子突变类型.[结果]该家系中3代共5例患者,每代均有患者且男女都有发病,符合常染色体显性遗传特征.该家系患者于50岁左右起病,病情进展迅速,从出现临床症状到终死亡仅为8～18个月左右.TARDBP基因检测结果显示,先证者的exon6发生了c.892 G＞A的杂合突变,另在第3代家系其他成员中,检测发现了3人携带与先证者相同的突变类型,但目前尚未发病.[结论]家族性肌萎缩侧索硬化症10型是一类病情进展迅速、生存时期短暂的运动神经元疾病.目前无有效治疗方法,对患者进行遗传咨询并对其下一代的出生进行产前诊断,遗传咨询和中断遗传链是防治该病的关键措施.
关键词： 家族性肌萎缩侧索硬化症 TARDBP基因 TDP-43 点突变 -
TDP-43与神经退行性疾病及脑损伤的相关性研究进展
TAR DNA/RNA结合蛋白43 (TARDNA/RNA-binding domain protein 43,TDP-43)是一种高度保守、广泛表达的核蛋白.肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)、额颞叶变性(frontotemporal lobar degeneration,FTLD)、阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)等神经退行性疾病的病理学标记蛋白被公认是TDP-43.就TDP-43的结构、功能及其与神经退行性疾病之间的关系作一综述.同时在对TDP-43生物学特性认识的基础上,探讨TDP-43在急、慢性颅脑损伤中的特殊表达与作用,从而探索TDP-43在法医病理学中确定死亡原因、判定致伤致残情况的可行性.
