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肌萎缩侧索硬化症相关TDP-43降解机制的研究
目的 探索肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关TDP-43的降解机制.方法 用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达野生型(role of wild-type,WT) WT TDP-43,与家族型ALS相关的Q331K TDP-43、M337V TDP-43突变蛋白、TDP-43的两种C末端片段TDP-25和TDP-35,再给予自噬、蛋白酶体通路的特异性诱导剂和阻断剂,通过蛋白印迹方法检测5种TDP-43以及自噬标记物LC3-Ⅱ的表达水平.结果 在自噬诱导剂作用下,各组LC3-Ⅱ的表达升高,同时两种突变TDP-43及其C末端片段的表达明显减少,在自噬通路和蛋白酶体阻断剂作用下突变TDP-43及其C末端片段表达水平明显增多,而WT TDP-43的蛋白表达水平仅在蛋白酶体阻断剂作用时增多.结论 WT TDP-43主要经由蛋白酶体途径降解,Q331K TDP-43、M337V TDP-43及其C末端片段经由蛋白酶体途径和自噬两种途径降解.
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人TDP-43-M337V对NSC-34细胞增殖的影响
目的：探讨人TDP‐43‐M337V对NSC‐34细胞增殖的影响。方法实验分为转染空质粒pEGFP组、转染TDP‐43‐WT的pEGFP‐TDP‐43‐WT组和转染TDP‐43‐M337V的pEGFP‐TDP‐43‐M337V组3组，利用免疫组化方法观察转染细胞的形态变化；通过检测细胞内MDA含量来观察细胞氧化损伤的程度；MTT检测转染基因对NSC‐34细胞的影响。结果转染各组细胞中，转染人TDP‐43‐M337V组细胞，胞体变圆，突起减少，且轴突变短；经过MDA检测发现，突变的细胞内MDA的含量明显高于其它两组细胞（P＜0．05）；突变的细胞内，其MTT水平明显低于其它两组细胞。结论人TDP‐43‐M337V削弱了NSC‐34细胞活性，降低了NSC‐34细胞的抗氧化损伤能力。
