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低蛋氨酸饮食对实验性结肠炎大鼠紧密连接蛋白表达和功能的影响
目的 研究低蛋氨酸(methionine restriction,MetR)饮食对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的大鼠结肠炎的结肠黏膜病理组织学、肠黏膜通透性以及结肠上皮紧密连接蛋白表达的影响,并探讨其可能机制.方法 SD大鼠随机分为常规饮食正常组(AA组)、低蛋氨酸饮食正常组(MetR组)、常规饮食模型组(DSS+ AA组)、低蛋氨酸饮食模型组(DSS+ MetR组),每组15只.DSS建模后第21天腹主动脉采血,分析血常规、肝肾功能和电解质水平,取结肠组织行HE染色分析肠黏膜病理学变化,检测肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)分析肠上皮细胞的增殖状况,采用尤斯灌流室(Ussing chamber)检测肠黏膜通透性；采用蛋白质印迹法分析肠上皮紧密连接蛋白的表达.结果 结肠炎造模大鼠出现腹泻、便血、体重下降,炎症集中在远端结肠,表现为隐窝脓肿,炎性细胞的浸润.与DSS+ AA组比较,MetR饮食干预可显著降低模型大鼠结肠的组织病理学评分[(10.55 ±3.62)分比(15.00±4.89)分,P=0.003].DSS+ MetR组和DSS+ AA组大鼠血白细胞计数、肠组织MPO活性以及PCNA免疫组化结果的差异均无统计学意义.Ussing chamber检测显示,DSS+ AA组的跨膜电阻抗显著低于AA组[(28.40±6.78)Ω·cm2比(46.53 ±4.03)Ω·cm2,P＜0.05],MetR组显著高于AA组[(60.64 ±8.40)Ω·cm2比(46.53 ±4.03)Ω·cm2,P＜0.05],DSS+ MetR组的短路电流值显著高于DSS+ AA组[(35.01 ±2.19) μA/cm2比(29.61±1.19)μA/cm2,P＜0.05].蛋白质印迹结果显示,AA组和MetR组未见claudin2蛋白表达,MetR组的结肠上皮claudin3蛋白表达量明显高于AA组；与DSS+ AA组比较,DSS+ MetR组claudin2的表达量更高,claudin3表达量更高.结论 MetR饮食对DSS诱导的结肠炎模型大鼠有明显的治疗作用,其机制可能不是通过调节炎性细胞浸润以及促进肠细胞生长的途径来缓解炎症损伤,而可能是通过改变紧密连接蛋白结构和功能而改善其肠黏膜屏障的功能,促进受损肠黏膜的修复.
