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硒-甲基硒代半胱氨酸抑制原发性肝癌大鼠肿瘤血管生成的作用及机制
目的 探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methyl selenocysteine,MSC)抑制原发性肝癌大鼠肿瘤血管生成的作用及机制.方法 选取重庆医科大学实验动物中心提供的清洁级SD大鼠120只,采用随机数字表法分成4组,分别为对照组(30只)、MSC低剂量组(30只)、MSC中剂量组(30只)和MSC高剂量组(30)只,采用小剂量间断DNE法制备原发性肝癌大鼠模型,MSC低、中、高剂量组大鼠分别使用12.5 mmol/L、50 mmol/L和200 mmol/L MSC灌胃,给药剂量为5 ml/kg,对照组使用等剂量生理盐水灌胃,每周5次,共进行6周.采用全自动生化分析仪检测血清AST和ALT水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)水平,观察大鼠肝脏病理状态,采用免疫组织化学法检测大鼠微血管密度(microvascular density,MVD)与组织内VEGF、HIF-α的表达.结果 MSC低剂量组AST水平高,对照组ALT水平高,组间大鼠血清AST、ALT水平差异有统计学意义(F值分别为13.057、12.991,P值分别为0.015,0.023).对照组大鼠HIF-1α、VEGF及MVD水平高,组间差异有统计学意义(F值分别为13.054、12.973、13.068,P值分别为0.029、0.014、0.032).MSC中、高剂量组大鼠肝组织内VEGF、HIF-1α表达强度显著低于对照组(χ2值分别为13.521、14.205,P值分别为0.042、0.033).结论 MSC可有效抑制原发性肝癌大鼠模型瘤体中新生血管的生成,其机制与MSC抑制癌组织内HIF-1α和VEGF的表达有关.
关键词： 肝癌 原发性 硒-甲基硒代半胱氨酸 新生血管 大鼠 -
硒甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞凋亡及Caspase蛋白表达影响的研究
目的 研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用. 方法 不同浓度的MSC(12.5、25、50、100、200 μmol/L)RPMI-1640培养液作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h,MTT法检测MSC对细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测caspase3,8,9蛋白表达,SPSS16.0进行数据录入及统计学分析.结果 MSC对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间-浓度依赖性(P＜0.01),其中200 μmol/L浓度抑制作用明显.24h及48h后,凋亡相关蛋白caspase9和caspase3的蛋白表达较空白对照组明显上调(P＜0.01),变化呈浓度依赖性;而caspase8蛋白表达无显著性变化(P＞0.05).结论 MSC能抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,诱导其凋亡,呈现时间浓度依赖性;其发生可能与线粒体途径的细胞凋亡有关.
关键词： 硒-甲基硒代半胱氨酸 乳腺癌 细胞凋亡 Caspase -
硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响
目的 研究有机硒化合物硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenoey-stein,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞端粒酶活性的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用机制. 方法 不同浓度的MSC (12.5、25、50、100、200 μmol/L) RPMI-1640培养液分别作用于人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24h、48h,ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞hTERT mRNA基因的表达;SPSS16.0进行数据录入及统计学分析.结果 各MSC浓度处理组明显抑制端粒酶活性和hTERT mRNA的表达(P＜0.01).结论 MSC能够抑制人乳腺癌细胞的增殖并诱导凋亡,其发生机制可能与端粒酶活性、hTERTmRNA表达的降低有关.
关键词： 硒-甲基硒代半胱氨酸 乳腺癌细胞 端粒酶 hTERT基因 -
硒-甲基硒代半胱氨酸诱导肝癌SMMC-7721细胞株的凋亡及机制探讨
目的 研究硒-甲基硒代半胱氨酸(MSC)对肝癌SMMC-7721细胞株抑制及凋亡的作用,探讨其分子机制.方法 试验分空白对照组和MSC组(细胞培养体系中加入MSC).MTT法观察细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期及凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳法观察DNA的“梯状”条带；Western blot方法检测凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达.结果 随着MSC浓度和作用时间增加,细胞抑制率上升.肝癌细胞株SMMC-7721在MSC浓度为25、30、100、200μmol/L下,24 h细胞抑制率分别为(14.44±3.83)％、(21.15±0.61)％、(50.61±2.10)％、(64.25±0.87)％,48 h细胞抑制率分别为(35.97±2.08)％、(57.41±2.61)％、(74.71±1.59)％、(91.68±1.33)％(P＜0.05).MSC组细胞周期出现S期阻滞,并出现凋亡峰,50、l00μmol/L浓度的MSC干预48 h后,肝癌SMMC-7721细胞株凋亡率分别为28.46％、50.73％.MSC组细胞呈凋亡表现,核固缩、碎裂,染色质浓缩,边集.MSC 50μmol/L或100 μmol/L组培养48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带；而空白对照组细胞DNA在电泳上未见梯状条带.经MSC干预后,AIF蛋白表达呈浓度依赖性增多(P＜0.05).结论 MSC对肝癌MMC-7721细胞株有抑制增殖、促进凋亡的作用.其机制可能通过调控AIF表达激活非Caspases依赖凋亡通路实现的.
关键词： 硒-甲基硒代半胱氨酸 肝癌 细胞凋亡诱导因子 凋亡 -
硒-甲基硒代半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用
[目的]探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(MSC)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用.[方法]用不同浓度的MSC处理培养的HepG2细胞,MTT法和流式细胞仪分别检测其对细胞生长和细胞凋亡的影响,并检测半胱氨酸蛋白酶3,8,9(caspase-3,8,9)的活性.[结果]25μmol/L的MSC处理HepG2细胞24 h后,细胞生长受到明显抑制,出现细胞凋亡,呈现浓度和时间依赖关系.caspase-3,8,9的活性检测显示,25μmol/L MSC处理HepG2细胞24h,48 h后,caspase-3的活性分别升高38.50%和119.72%,caspase-8活性分别升高28.86%和89.42%,caspase-9活性分别升高31.94%和74.28%.50μmol/L的MSC处理24h,48h后,caspase-3活性分别升高82.56%和155.79%,caspase-8活性分别升高48.95%和167.84%,caspase-9活性分别升高55.94%和126.58%.[结论]MSC抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,其凋亡与caspase-3,8,9的活性增强有关.
关键词： 硒-甲基硒代半胱氨酸 HepG2细胞 凋亡 半胱氨酸蛋白酶 肝肿瘤 -
硒-甲基硒代半胱氨酸对肝癌HepG2细胞的抑制作用
目的:研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,探讨其分子机制.方法:用不同浓度的MSC处理培养的HepG2细胞,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法和流式细胞仪分别检测其对细胞生长和细胞周期的影响,软琼脂生长试验观察瘤细胞恶性表型的变化,并检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性.结果:25 μmol·L-1的MSC处理HepG2细胞24 h后,细胞生长受到明显抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,呈现浓度和时间依赖关系.软琼脂生长试验显示MSC抑制HepG2细胞在软琼脂上的生长能力.RT-PCR和Caspase-3的活性检测显示,25 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了38%和47%,而Caspase-3活性分别升高(39.61±6.65)%和(118.73±6.48)%;50 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了53%和82%, 而Caspase-3活性分别升高(80.66±9.31)%和(152.67±7.95)%.结论:MSC抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,瘤细胞的恶性程度减弱,这种表型变化与Cyclin D1的表达减弱和Caspase-3的活性增强有关.
关键词： 硒-甲基硒代半胱氨酸 HepG2细胞 细胞凋亡 细胞周期 恶性表型 -
硒-甲基硒代半胱氨酸对MCF-7细胞抗氧化及Survivin基因表达的影响
目的探讨硒-甲基硒代半胱氨酸( MSC)对乳腺癌MCF-7细胞抑制及其诱导凋亡的作用机制。方法采用不同浓度(12.5、25、50、100、200μmol/L ) MSC 作用于 MCF-7细胞,四甲基偶氮唑盐( MTT)法测定MSC对细胞增殖的抑制作用；Hoechst染色法观察细胞凋亡形态；氮蓝四唑( NBT)显色法检测MSC对细胞超氧化物歧化酶( SOD)活性的影响；硫代巴比妥酸法( TBA )法检测 MSC 对细胞内丙二醛( MDA)水平的影响；RT-PCR法检测细胞Survivin基因的表达。结果MSC对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,细胞存活率随其浓度的增加而逐渐降低；荧光染色可见,MSC干预组细胞变圆、胞核皱缩、染色质浓缩,与对照组比较差异有统计学意义；MSC降低MCF-7细胞内SOD的活性,升高细胞内MDA水平( P<0.01)；同时, MSC能下调Survivin mRNA的表达( P<0.01)。结论MSC可通过调节乳腺癌细胞内氧化还原状态及Survivin基因的表达抑制乳腺癌细胞的体外增值和诱导凋亡, MSC作为一种新型营养强化剂有望开发其预防和辅助乳腺癌治疗的新用途。
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硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞生物学行为及基质金属蛋白酶-2表达的影响
背景与目的:硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)是一种天然有机硒,已被证实能预防和治疗多种肿瘤.但其抗肿瘤作用的机制尚有待进一步阐明.本研究旨在通过MSC处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,研究其对细胞生物学行为和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响.方法:用不同浓度的MSC处理MDA-MB-231细胞.镜下观察细胞形态的改变.细胞计数试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)、流式细胞仪及软琼脂生长实验分别检测其对肿瘤细胞增殖、周期分布和凋亡及恶性表型的影响,逆转录.多聚酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Westem blot检测MMP-2mRNA和蛋白水平的表达,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液中MMP-2蛋白浓度.结果:MSC处理的MDA.MB-231细胞增殖受到抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,软琼脂上细胞集落形成数明显减少.MMP-2mRNA和蛋白的表达却表现出不一致性.50 μmol/L MSC处理细胞48 h和72 h后.MMP-2 mRNA表达水平分别上调32.2%和47.1%,而MMP-2蛋白表达水平却分别下调42.4%和50.8%,培养液中的MMP-2浓度也分别下调了56.7%和75.2%;100 μmol/L MSC处理细胞钙和72 h后.MMP-2 mRNA表达水平分别上调52.6%和61.3%,而MMP-2蛋白表达水平分别下调72.9%和81.4%,培养液中的MMP-12浓度也分别下调了68.5%和80.9%c.结论:MSC抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖.诱导S期阻滞及细胞凋亡,降低细胞恶性程度.MSC上调该细胞MMP-2 mRNA的表达,但下调其蛋白的表达和分泌.
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硒-甲基硒代半胱氨酸对人食管癌EC109细胞Ki-67及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响
目的:探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(MSC)对人食管癌细胞系EC109细胞增殖及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响.方法:用荧光染色、免疫组化及免疫蛋白印迹等技术,在MSC的不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/mL)与时间(6、12、24、48h)的作用下,观察其对EC109细胞形态的影响以及细胞核增殖抗原Ki-67及凋亡相关蛋白Bcl2/Bax的表达.结果:细胞主要表现出固缩,生长密度降低,凋亡小体形成并被吞噬等形态改变,未见明显细胞毒性作用.各实验组的Ki-67标记指数均明显低于对照组(P<0.01),Bcl-2/Bax表达比值降低,并呈明显的时间和浓度依赖性.结论:MSC有抑制EC109细胞系增殖及下调Bcl-2/Bax表达的作用.
关键词： 食管癌 硒-甲基硒代半胱氨酸 增殖 凋亡
